高考一輪復(fù)習(xí)現(xiàn)代生物科技專題胚胎工程的操作流程胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)①胚胎移入的基礎(chǔ)②胚胎收集的基礎(chǔ)③移入胚胎存活的基礎(chǔ)④保留胚胎遺傳特性的基礎(chǔ)排卵后，同種動物的供、受體生殖器官的生理變化是相同的，為供體的胚胎移入受體提供了相同的生理環(huán)境。早期胚胎形成后，在一定時間內(nèi)不會與母體子宮建立組織上的聯(lián)系，而是處于游離狀態(tài)，為胚胎的收集提供可能。受體對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，為胚胎在受體內(nèi)存活提供了可能。供體胚胎可與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系，其遺傳物質(zhì)不會發(fā)生改變，為移植后的胚胎繼續(xù)發(fā)育提供了營養(yǎng)等方面的保障，同時保障了供體優(yōu)良遺傳性狀。分析：胚胎的來源：①雌性動物體內(nèi)的胚胎（通過優(yōu)良個體正常交配或人工授精得到）；②采用體外受精和早期胚胎培養(yǎng)獲得的胚胎；③采用核移植技術(shù)得到的重組細(xì)胞發(fā)育形成的胚胎；④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎。從而，胚胎移植是胚胎工程和其他技術(shù)的最后一道“工序”。精子和卵子的發(fā)生項目精子的發(fā)生卵子的發(fā)生場所睪丸的曲細(xì)精管卵巢(MⅠ)、輸卵管(MⅡ)時間從初情期開始，直到生殖機能衰退①卵泡的形成和在卵巢內(nèi)的儲備:出生前；②排卵:初情期后過程特點①MⅠ和MⅡ是連續(xù)的，需變形；②兩次分裂細(xì)胞質(zhì)都均等分配①MⅠ和MⅡ是不連續(xù)的，不需要變形；②細(xì)胞質(zhì)都不均等分配結(jié)果形成4個精子形成1個卵子和3個極體相同點①原始生殖細(xì)胞的增殖方式為有絲分裂；②原始生殖細(xì)胞產(chǎn)生成熟生殖細(xì)胞為減數(shù)分裂；減數(shù)分裂過程中染色體復(fù)制一次，細(xì)胞分裂兩次，子細(xì)胞中染色體數(shù)目減半胚胎的來源——①雌性動物體內(nèi)的胚胎精子和卵子的發(fā)生胚胎的來源——①雌性動物體內(nèi)的胚胎細(xì)胞核---高爾基體---中心體---線粒體---細(xì)胞內(nèi)的其他物質(zhì)---頭部的主要部分頂體(在頭部)尾球狀的原生質(zhì)滴精細(xì)胞:精子:尾基部的線粒體鞘膜消失精子和卵子的發(fā)生胚胎的來源——①雌性動物體內(nèi)的胚胎卵泡=卵泡細(xì)胞+初級卵母細(xì)胞卵子=次級（或初級）卵母細(xì)胞+透明帶+放射冠排卵：卵子從卵泡中排出卵子的結(jié)構(gòu)圖精子和卵子的發(fā)生胚胎的來源——①雌性動物體內(nèi)的胚胎減數(shù)第一次分裂是在雌性動物排卵前完成減數(shù)第二次分裂是在精子和卵子結(jié)合的過程完成的精子和卵子的發(fā)生胚胎的來源——①雌性動物體內(nèi)的胚胎受精前的準(zhǔn)備階段受精階段場所：輸卵管過程：＋受精作用胚胎的來源——①雌性動物體內(nèi)的胚胎

受精前的準(zhǔn)備1)精子獲能2)卵子的準(zhǔn)備（在輸卵管中發(fā)育到減II中期）

受精過程1)精子穿越放射冠和透明帶2)精子進(jìn)入卵黃膜3)原核形成和融合頂體反應(yīng)透明帶反應(yīng)卵黃膜封閉作用防止多精入卵輸卵管內(nèi)獲能實質(zhì)：雌雄原核融合飾窺訛纜粱二菩死喀磅軟妥循穴魂御梢鉗硼服砍垢修癬衍例澈瑞霧矗襖廁《體內(nèi)受精和早期胚胎發(fā)育》復(fù)習(xí)《體內(nèi)受精和早期胚胎發(fā)育》復(fù)習(xí)受精作用胚胎的來源——①雌性動物體內(nèi)的胚胎1.精子獲能:剛剛排出的精子，不能立即與卵子受精，必須在雌性動物生殖道發(fā)生相應(yīng)的生理變化后，才能獲得受精能力。在人工授精時，常用一定濃度的肝素或鈣離子載體A23187溶液處理。2.卵子成熟:剛從卵巢中排出的卵子，也不能立即授精，需要在輸卵管中繼續(xù)發(fā)育到減數(shù)第二次分裂中期才有受精能力。在人工授精時，要在培養(yǎng)液中培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期。3.受精過程:頂體反應(yīng)、透明帶反應(yīng)、卵細(xì)胞膜反應(yīng)、雄原核和雌原核形成、雌雄原核融合(標(biāo)志著受精完成)、減數(shù)第二次分裂形成第二極體。受精作用——受精過程前后的生理活動胚胎的來源——①雌性動物體內(nèi)的胚胎第一步：精子穿越放射冠和透明帶。頂體反應(yīng)使頂體內(nèi)的酶釋放出來并溶解放射冠內(nèi)的卵丘細(xì)胞之間的物質(zhì)。透明帶反應(yīng)是防止多精入卵受精的第一道屏障。第二步：精子進(jìn)入卵細(xì)胞膜。卵細(xì)胞膜反應(yīng)是防止多精入卵受精的第二道屏障。第三步：原核形成。雄原核形成和雌原核形成。第四步：合子形成。雌雄原核融合形成合子（受精卵）。受精作用——受精階段胚胎的來源——①雌性動物體內(nèi)的胚胎1、受精的標(biāo)志：在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙可以觀到兩個極體2、受精完成的標(biāo)志：雌雄原核融合成合子關(guān)鍵點受精作用胚胎的來源——①雌性動物體內(nèi)的胚胎2個屏障2個標(biāo)志3個反應(yīng)2個極體2個原核頂體反應(yīng)透明帶反應(yīng)卵細(xì)胞膜反應(yīng)透明帶反應(yīng)卵細(xì)胞膜反應(yīng)第一極體、第二極體在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙可以觀到兩個極體雌雄原核融合成合子雌原核、雄原核受精作用胚胎的來源——①雌性動物體內(nèi)的胚胎受精卵：在輸卵管內(nèi)形成，進(jìn)行有絲分裂，開始發(fā)育卵裂期：在透明帶內(nèi)進(jìn)行有絲分裂，細(xì)胞數(shù)量不斷增加，但胚胎總體積并不增加，或略有縮小。早期胚胎發(fā)育細(xì)胞分裂方式為有絲分裂，細(xì)胞數(shù)不斷增加，每個細(xì)胞體積減小，胚胎總體積不增加或略有縮小，DNA總量增加，每個細(xì)胞中DNA數(shù)目不變，有機物總量減少，有機物種類增加，核質(zhì)比增加早期胚胎發(fā)育桑椹胚——32個細(xì)胞這一階段前的每一個細(xì)胞都具有發(fā)育成完整胚胎的潛能，屬于全能細(xì)胞。囊胚桑椹胚進(jìn)一步發(fā)育，細(xì)胞開始出現(xiàn)分化，聚集在胚胎一端，個體較大的細(xì)胞稱為內(nèi)細(xì)胞團（即胚胎干細(xì)胞是一種未分化的細(xì)胞，具有全能性），將來發(fā)育成胎兒的各種組織。沿透明帶內(nèi)壁擴展和排列的、個體較小的細(xì)胞，稱為滋養(yǎng)層細(xì)胞，發(fā)育成胎膜和胎盤，胚胎可通過這些組織從母體中獲得正常發(fā)育所需的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)。早期胚胎發(fā)育囊胚隨著胚胎進(jìn)一步發(fā)育，胚胎內(nèi)部出現(xiàn)了含有液體的囊腔——囊胚腔，這個時期的胚胎叫做囊胚，囊胚進(jìn)一步擴大，會導(dǎo)致透明帶破裂，胚胎從其中伸展出來，這一過程叫做孵化。透明帶在囊胚形成并長大后破裂，這個過程稱為囊胚孵化。囊胚孵化是哺乳動物中胚胎著床前的必要步驟，只有在脫去透明帶之后著床才可以發(fā)生。囊胚的大小仍和受精卵相似，但細(xì)胞數(shù)目已增加到上千個。囊胚形成后，細(xì)胞繼續(xù)分裂，囊胚的一端內(nèi)陷，細(xì)胞層逐漸褶入的細(xì)胞層形成了一個新腔，原腸腔，即未來將發(fā)育成消化管道的原腸。到此時，只有一層細(xì)胞的囊胚發(fā)育稱為有兩層細(xì)胞的原腸胚。原腸的出現(xiàn)使動物生物胚胎出現(xiàn)了外胚層和內(nèi)胚層的分化。早期胚胎發(fā)育原腸胚外胚層（內(nèi)細(xì)胞團的表層細(xì)胞）：形成神經(jīng)系統(tǒng)的各個器官，包括腦、脊髓和神經(jīng)、眼的網(wǎng)膜、虹膜上皮、內(nèi)耳上皮、以及皮膚的表皮和皮膚的附屬結(jié)構(gòu)。

內(nèi)胚層（下方細(xì)胞）：形成消化道（咽、食道、胃、腸等）和呼吸道（喉、氣管、支氣管等）的上皮，肺、肝、胰和咽部分衍生的腺體（甲狀腺，副甲狀腺、胸腺等）以及泌尿系統(tǒng)的膀胱、尿道和附屬腺體的上皮等。

中胚層（部分細(xì)胞）：主要形成各種肌肉、骨胳、結(jié)締組織以及皮膚的真皮，循環(huán)系統(tǒng)（心臟、血管和血液）、排泄系統(tǒng)（腎、輸尿管）、生殖系統(tǒng)（生殖腺、生殖管道及附腺等）、氣管和消化道的管壁、體腔膜等。

早期胚胎發(fā)育胚胎的來源——②采用體外受精和早期胚胎培養(yǎng)獲得的胚胎胚胎的來源——②采用體外受精和早期胚胎培養(yǎng)獲得的胚胎（1）卵母細(xì)胞的采集以及培養(yǎng)采集對象采集部位采集方法細(xì)胞培養(yǎng)小型動物大型動物輸卵管卵巢卵巢給供體注射促性腺激素，促進(jìn)多排卵之后從輸卵管中沖取卵子。摘取剛屠宰動物的卵巢，并從中采集卵母細(xì)胞。借助超聲波探測儀、內(nèi)窺鏡或腹腔鏡等工具，直接從活體動物的卵巢中吸取卵母細(xì)胞。不需要，直接用于受精需要需要胚胎的來源——②采用體外受精和早期胚胎培養(yǎng)獲得的胚胎①收集精子的方法：手握法、假陰道法、電刺激法②獲能的方法培養(yǎng)法：把精子放入獲能液中培養(yǎng)一段時間。（嚙齒動物、家兔和豬）化學(xué)誘導(dǎo)法：把精子放入一定濃度肝素或鈣離子載體A23187溶液中，用化學(xué)藥物誘導(dǎo)精子獲能。（牛、羊）

適用于豬、犬等體型較小，容易控制的家畜適用于牛、馬等體型較大，不太容易控制的家畜或大型動物適用于野生動物或經(jīng)濟動物胚胎的來源——②采用體外受精和早期胚胎培養(yǎng)獲得的胚胎（2）精子的采集以及獲能（3）受精獲能的精子和培養(yǎng)成熟的卵子，一般情況下在獲能溶液或?qū)Ｓ玫氖芫芤褐型瓿墒芫^程。

目的：因為采集的為精液，精液為精子和精清，精清中含有抑制精子獲能的物質(zhì)，一般情況下精液中的精子無法獲能，因此需要經(jīng)過離心，除去精清以利于精子獲能。胚胎的來源——②采用體外受精和早期胚胎培養(yǎng)獲得的胚胎（4）胚胎的早期培養(yǎng)——發(fā)育培養(yǎng)液1.早期培養(yǎng)的目的：檢查受精狀況和受精卵的發(fā)育能力2.早期培養(yǎng)的條件：與動物細(xì)胞培養(yǎng)條件基本相同，只是營養(yǎng)物質(zhì)有所不同。條件實現(xiàn)手段①無菌無毒滅菌加抗生素定期更換培養(yǎng)液②營養(yǎng)：發(fā)育培養(yǎng)液無機鹽、有機鹽、維生素、激素、氨基酸、核苷酸等+動物血清③溫度和pH36.5±0.5℃pH7.2~7.4合適的滲透壓

④氣體環(huán)境95%空氣(O2:用于細(xì)胞呼吸)，5%CO2調(diào)節(jié)pH(CO2培養(yǎng)箱)胚胎的來源——②采用體外受精和早期胚胎培養(yǎng)獲得的胚胎3.早期培養(yǎng)的去向：當(dāng)胚胎發(fā)育到適宜的階段時可進(jìn)行受體移植或冷凍保存。

理論基礎(chǔ)：動物細(xì)胞核的全能性實質(zhì)：無性繁殖（克隆動物）細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)全能性困難細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易分類胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：克隆（clone）是指通過無性生殖而產(chǎn)生的遺傳上均一的生物群，即具有完全相同的遺傳組成的DNA分子、一群細(xì)胞或者生物個體，分別屬于分子水平克隆、細(xì)胞水平克隆、個體水平克隆。胚胎的來源——③采用核移植技術(shù)得到的重組細(xì)胞發(fā)育形成的胚胎從母猴體內(nèi)取出卵細(xì)胞去除卵細(xì)胞的細(xì)胞核從體細(xì)胞中取出細(xì)胞核從供猴的某一部位取出體細(xì)胞融合后的細(xì)胞經(jīng)人工方法激活后，在體外培養(yǎng)形成早期胚胎把體細(xì)胞核注入去除了細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中將早期胚胎移入代孕母猴體內(nèi)克隆猴“中中”和“華華”目前的通常做法是：采用顯微操作的方法，直接將供核細(xì)胞移植到已經(jīng)去核的，處于MⅡ中期的卵母細(xì)胞（或受精卵）的透明帶下，然后通過細(xì)胞融合（電融合或仙臺病毒介導(dǎo)）的方式，使供核細(xì)胞與受體細(xì)胞發(fā)生融合，由此實現(xiàn)核與細(xì)胞質(zhì)的重組。該方法在家畜等大動物上取得成功的例子頗多。另一種做法是用顯微針反復(fù)抽吸供核細(xì)胞，從而分離出其中的細(xì)胞核部分，然后將細(xì)胞核直接注入細(xì)胞核已去除的受體細(xì)胞（MⅡ中期卵母細(xì)胞），這種方法主要被用于克隆小鼠的制作。胚胎的來源——③采用核移植技術(shù)得到的重組細(xì)胞發(fā)育形成的胚胎體細(xì)胞核移植的過程①供體選擇②卵細(xì)胞選擇③卵母細(xì)胞去核④供體核移植到去核卵母細(xì)胞的方法⑤重組細(xì)胞的激活胚胎的來源——③采用核移植技術(shù)得到的重組細(xì)胞發(fā)育形成的胚胎選用卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞:卵（母）細(xì)胞體積大、易操作；更關(guān)鍵的是卵（母）細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)較多，營養(yǎng)豐富，含有較多促使動物細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)。卵母細(xì)胞要培養(yǎng)到MⅡ中期:由于MⅡ中期卵母細(xì)胞核的位置，靠近第一極體，用微型細(xì)管可一并吸出細(xì)胞核與第一極體-----顯微操作去核法胚胎的來源——③采用核移植技術(shù)得到的重組細(xì)胞發(fā)育形成的胚胎去掉卵母細(xì)胞的核:移植前要先去掉卵母細(xì)胞核，這樣可以保證目標(biāo)動物的核遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的供核方。促進(jìn)供體細(xì)胞核與去核的卵母細(xì)胞融合的方法：可采用電刺激使兩細(xì)胞融合，促使供體核進(jìn)入受體卵母細(xì)胞，成為重組細(xì)胞。用物理和化學(xué)方法（如電脈沖、鈣離子載體、乙醇、蛋白質(zhì)合成抑制劑等）激活受體細(xì)胞使其完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。胚胎的來源——③采用核移植技術(shù)得到的重組細(xì)胞發(fā)育形成的胚胎選用供體細(xì)胞直接移植：供體細(xì)胞形態(tài)小，取細(xì)胞核不方便，直接植入，不用取出細(xì)胞核，而且可以減少對供體細(xì)胞核的損傷，與去核卵母細(xì)胞融合后也能表達(dá)細(xì)胞核的全能性，這是核移植技術(shù)的后來改進(jìn)；早期，締造多利羊的時候，是把核取出來放入去核卵母細(xì)胞中的。誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法和原理：物理法：離心、振動、電刺激等；化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）生物法：滅活的病毒；常用滅活的仙臺病毒原理：細(xì)胞膜的流動性胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎基因操作的工具分子手術(shù)刀—限制酶特點：專一性。作用：識別雙鏈DNA中某種特定的核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。來源：主要從原核生物體內(nèi)分離純化。為防止目的基因自身環(huán)化，最好用兩種不同的限制酶切割獲取目的基因(1)根據(jù)目的基因兩端的限制酶切點確定限制酶的種類：①應(yīng)選擇切點位于目的基因兩端的限制酶，如圖甲可選擇PstⅠ。②不能選擇切點位于目的基因內(nèi)部的限制酶，如圖甲不能選擇SmaⅠ。③為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，如圖甲也可選擇用PstⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶(但要確保質(zhì)粒上也有這兩種酶的切點)。(2)根據(jù)質(zhì)粒的特點確定限制酶的種類：①所選限制酶要與切割目的基因的限制酶一致，以確保具有相同的黏性末端。②質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因等，所以所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu)，如圖乙中限制酶SmaⅠ會破壞標(biāo)記基因。正確判斷限制酶的選擇胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎DNA連接酶——“分子縫合針”將雙鏈DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵，不需要模板。類型功能E.coliDNA連接酶只能“縫合”DNA互補的黏性末端。T4DNA連接酶即可”縫合”雙鏈DNA互補的黏性末端，又可“縫合”雙鏈DNA的平末端胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運輸車”質(zhì)粒：一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于細(xì)菌擬核DNA之外，并且具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。λ噬菌體的衍生物、動植物病毒能夠在細(xì)胞內(nèi)自我復(fù)制，或整合到染色體DNA上，隨染色體DNA進(jìn)行自我復(fù)制。具有一個或多個限制酶切點，便于供外源DNA插入。具有特殊的遺傳標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。安全、對受體細(xì)胞無害胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎目的基因：主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因。基因工程的基本操作程序——目的基因的獲取胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎獲取方法：①從基因文庫中獲取；②利用PCR技術(shù)擴增；③用化學(xué)方法直接人工合成。提取某種生物的全部DNA用適當(dāng)?shù)南拗泼盖幸欢ù笮〉腄NA片段將DNA片段與載體連接導(dǎo)入受體菌中儲存基因組文庫某種生物的mRNA單鏈互補DNA雙鏈cDNA片段導(dǎo)入受體菌中儲存與載體連接cDNA文庫逆轉(zhuǎn)錄胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎基因工程的基本操作程序——目的基因的獲取歸納總結(jié)真核生物的cDNA文庫與基因組文庫文庫類型cDNA文庫基因組文庫基因中啟動子和內(nèi)含子無有文庫大小小大基因多少某種生物的部分基因某種生物的全部基因物種間的基因交流可以部分基因可以胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎基因工程的基本操作程序——目的基因的獲取微提醒：①從cDNA文庫獲取的目的基因不含啟動子和終止子。②通過DNA合成儀用化學(xué)方法合成DNA時需要知道DNA的堿基排列順序，不需要模板。③利用乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥物時，應(yīng)將目的基因與乳腺蛋白基因的啟動子連接到一起。胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎基因工程的基本操作程序——目的基因的獲取①概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，③條件：待擴增的目的基因、一對引物、四種脫氧核苷酸、TaqDNA聚合酶(熱穩(wěn)定DNA聚合酶)②原理：DNA雙鏈復(fù)制④方式：以指數(shù)方式擴增，即2n（n為擴增循環(huán)的次數(shù)）⑤結(jié)果：使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴增利用PCR技術(shù)擴增目的基因胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎基因工程的基本操作程序——目的基因的獲取⑥過程：a、DNA變性（90℃-95℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNAb、退火（DNA復(fù)性55℃-60℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈

c、延伸（70℃-75℃）：在TaqDNA聚合酶的作用下，從引物處延伸，合成與模板互補的DNA鏈。胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎基因工程的基本操作程序——目的基因的獲取利用PCR技術(shù)擴增目的基因5Primer15Primer2Cycle2Cycle1555555TemplateDNA55555555胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎基因表達(dá)載體的構(gòu)建——基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的作用：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞細(xì)胞類型方法說明特點植物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T--DNA上→通過農(nóng)桿菌→進(jìn)入植物細(xì)胞→插入到植物細(xì)胞中的染色體DNA上→目的基因表達(dá)經(jīng)濟、有效，適合于雙子葉植物和裸子植物基因槍法目的基因包裹在微小的金粒或鎢粒表面→用基因槍高速射入到受體細(xì)胞或組織中→目的基因表達(dá)成本較高，是單子葉植物中常用的基因轉(zhuǎn)化方胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞植物細(xì)胞花粉管通法含目的基因的溶液→滴加在柱頭上(或用含目的基因的溶液處理花粉粒)→花粉粒吸入目的基因→授粉→目的基因表達(dá)簡便、經(jīng)濟，我國科學(xué)家獨創(chuàng)動物細(xì)胞顯微注射技術(shù)目的基因片段→受精卵的核內(nèi)→受精卵經(jīng)胚胎早期培養(yǎng)一段時間后移植到雌性動物的輸卵管或子宮內(nèi)→使其發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動物最為有效的將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞的方法胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞微生物細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞法Ca2＋處理微生物細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→將基因表達(dá)載體在緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合→一定溫度下促使感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子簡便、經(jīng)濟、有效胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞胚胎的來源——④采用基因工程技術(shù)獲得的胚胎目的基因的檢測與鑒定

探針制備：用放射性同位素標(biāo)記含有目的基因的DNA片段動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件（1）充足的營養(yǎng)①生長因子（如表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子等，生長因子能促進(jìn)細(xì)胞生長并維持細(xì)胞形態(tài)）②營養(yǎng)液要定期更換③補充生長因子的方法是向營養(yǎng)液中添加動物一定量的血清（2）無菌環(huán)境（3）適宜的溫度（36.5℃±0.5℃）（4）適宜的氣體環(huán)境（95%空氣+5%CO2）和pH（7.2-7.4）

（5）

穩(wěn)定的滲透壓現(xiàn)代生物工程技術(shù)——動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)的流程選取幼齡動物組織現(xiàn)代生物工程技術(shù)——動物細(xì)胞培養(yǎng)要點分析選取幼齡動物組織將動物組織剪切成小塊細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)胰蛋白

酶消化出現(xiàn)細(xì)胞貼壁接觸抑制時，要分瓶培養(yǎng)傳代培養(yǎng)（10代左右）（1）選擇幼齡動物組織的原因是幼齡動物組織的增殖能力強（2）剪碎組織塊的目的是有利于動物組織充分接觸胰蛋白酶（3）用胰蛋白酶處理的原因是動物組織細(xì)胞間有蛋白質(zhì)，另外培養(yǎng)動物組織的培養(yǎng)液的pH值為7.2~7.4，所以不能用胃蛋白酶處理。（4）進(jìn)行傳代培養(yǎng)的原因是原代培養(yǎng)時會出現(xiàn)細(xì)胞貼壁和接觸抑制，細(xì)胞會停止分裂。（5）動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)常將細(xì)胞培養(yǎng)至10代以內(nèi)。（1）原代培養(yǎng)：從動物體獲取組織或細(xì)胞后，進(jìn)行的第一次培養(yǎng)過程稱為原代培養(yǎng)，也叫初