流感項目文獻調研報告2010年1月26日流行病學信息呼吸道感染是臨床常見疾病，急性上呼吸道感染90％以上是由病毒引起。最常見的傳染病，發病率高、傳播快，流行廣泛，對人民健康危害極大。感冒大約占所有人類疾病的1/4左右，人均年發病5～6次。所有急性傳染病中感冒的發病率占第一位。流行性感冒危害性最大，可引起局部乃至世界性范圍的大流行。近100年來人類經歷了三次流感大流行：1918～1919，“西班牙流感”，引起很高的流感病毒死亡率，在美國死亡人數超過50萬人。在全球死亡人數為4000～5000萬人。此病毒的毒力高，發病快。死者多為年輕的健康成人。1957～1958年，“亞洲流感”，在美國死亡人數為7萬人。1968～1969年，“香港流感”，在美國有約3.4萬人死亡，迄今還在全球流行。2009年4月在墨西哥首先發生甲型H1N1流感病例，并迅速出現世界性蔓延。截止2009年12月6日，中國境內31個省份報告甲型H1N1流感確診病例9737例，住院治療3225例，死亡125人。

流感病毒屬于正黏病毒科RNA病毒。根據其核蛋白的抗原性可以分為三類:甲型流感病毒（InfluenzaAvirus），又稱A型流感病毒乙型流感病毒（InfluenzaBvirus），又稱B型流感病毒丙型流感病毒（InfluenzaCvirus），又稱C型流感病毒。有些流感病毒引起嚴重的疾病大多發生于家禽方面，而人類缺很少出現。但經過鳥類和哺乳動物的傳播和變異，這可能導致疫情或人類流感大面積傳播。命名原則根據世界衛生組織1980年通過的流感病毒毒株命名法修正案，流感毒株的命名包含6個要素：型別/宿主/分離地區/毒株序號/分離年份(HnNn)，例如A/swine/Lowa/15/30(H1N1)表示的是核蛋白為A型的，1930年在lowa分離的以豬為宿主的H1N1亞型流感病毒毒株，其毒株序號為15，這也是人類分離的第一支流感病毒毒株。甲型流感病毒亞型分類依據：HA和NA。16種H型別(H1～H16)和9種N型別(N1～N9)。H和N的組合不同，病毒的毒性和傳播速度也不相同。病毒基因變異H1、H2、H3和N1、N2亞型常見。抗原飄移。RNA缺乏校正讀碼酶，病毒RNA復制時大約每10000個核苷酸會出現1個錯誤，形成新的突變。基因重配。同一細胞感染2種或2種以上流感病毒亞型時，就可能出現RNA片段的混合或重配，從而導致病毒基因組大的改變，形成抗原轉變。新病毒會感染新的宿主或輕松克服原有宿主對其產生的免疫力，從而可能形成流感暴發流行。甲型流感病毒有5N1,H7N2,H1N7,H7N3,H13N6,H5N9,H11N6,H3N8,H9N2,H5N2,H4N8,H10N7,H2N2,H8N4,H14N5,H6N5,H12N5等變種。根據宿主，主要有以下變種：禽流感，人類流感，豬流感，馬流感，狗流感。病毒基因組：8個單體（非配對）RNA鏈，編碼11個蛋白(HA,NA,NP,M1,M2,NS1,NEP,PA,PB1,PB1-F2,PB2)?？偦蚪M大小是13588bp。分割性質基因組允許整個基因在不同的病毒載體的細胞同時存在。呼吸道病毒感染是臨床最常見的疾病之一，且病原學復雜。多種病毒具有感染力強、傳播快、潛伏期短、發病急等特點，及時、準確識別病原體不僅是確診依據，也是合理選擇治療方案的基礎。甲型H1N1流感是由一種新型流感病毒引起的急性、人畜共患呼吸道傳染性疾病。。目前，正式上市的抗流感藥物大體分為兩類：M2離子通道阻斷劑和NA抑制劑。金剛烷胺(Amantadine)和金剛乙胺(Rimantadine)可有效抑制甲型流感病毒株的復制。神經氨酸酶抑制劑是通過選擇性地抑制A、B型流感病毒的神經氨酸酶，使病毒難以釋放，并促進已釋放的病毒相互凝聚，繼而死亡。神經氨酸酶抑制劑：扎那米韋（zanzmivir）和奧司他韋（Oseltamivir）兩種藥物，因為流感病毒的高頻率變異，耐藥性毒株的比例呈明顯上升的趨勢。目前已經測序的甲型流感病毒基因組共有5811個，共有421個基因型。其中[A,D,B,3A,A,2A,B,1A]（基因型H3N2）包括1899個基因組，[K,G,D,5J,F,1J,F,1E]（基因型H5N1）包括1067個基因組，[A,A,B,1B,A,1A,B,1A]（基因型H1N1）包括757個基因組。[K,G,E,9C,F,2B,F,1E]（基因型H9N2）包括80個基因組[C,I,G,3F,C,8B,E,1D]（基因型H3N8）包括83個基因組[C,F,H,7F,H,2G,E,2B]（基因型H7N2）包括103個基因組，宿主非人類。[B,A,C,1A,A,1B,A,1A]（基因型H1N1）包括108個基因組，宿主非人類。[C,F,E,7F,H,2G,E,2B]（基因型H7N2）包括1899個基因組H109序列比對結果H1序列與引物比對結果H3基因與引物序列比對H5基因與引物序列比對A流感病毒M基因與引物比對B流感病毒M基因與引物比對中國CDC使用軟件中國CDC使用引物序列國家流感中心推薦的標準操作規程第一章基本生物學實驗SOP

第二章標本采集SOP

第三章病毒分離SOP

第四章病毒鑒定SOP

第五章核酸檢測SOP

血清學檢測SOP

動物學實驗SOP耐藥性檢測SOP

第九章其他SOP

第四章病毒鑒定流感/禽流感病毒紅細胞凝集試驗紅細胞凝集抑制試驗鑒定流感/禽流感病毒方法流感病毒神經氨酸酶活性試驗及其活性抑制試驗禽流感H5N1病毒感染間接免疫熒光檢測技第五章核酸檢測禽流感病毒RT-PCR檢測人禽流感實時熒光定量PCR檢測禽流感病毒H5N1NASBA檢測分子鑒別診斷技術禽流感病毒H5N1NASBA檢測核酸序列依賴性擴增（Nuclearacidsequence-basedamplification，NASBA）：快速等溫核酸擴增，實時觀測結果。主要原材料：AMV逆轉錄酶、噬菌體T7RNA多聚酶、核糖核酸酶H、兩種特別設計的特異性寡核苷酸引物和分子信標探針共同協作而完成。樣品檢測信號值（WTsignal）：在擴增過程中分子信標探針與靶基因發生特異性結合后，產生熒光信號的熒光信號被收集經軟件轉換后的強度值，即WTsignal。判斷閾值（threshold）：在NASBA反應過程中會產生熒光信號，閾值是判斷陰性或陽性結果的熒光信號界線值，樣本熒光信號≥閾值者為陽性，反之為陰性。分子鑒別診斷技術.分子鑒別診斷技術（MolecularDifferentialDiagnosis,MDD）原理：靶序列富集多重PCR（TargetenrichedmultiplexPCR，Tem-PCR）和MultipleAnalysisProfiling（xMAP）技術有機結合。雜交反應過程分子在顏色編碼的微球表面進行反應，對于每一種病原體，靶序列特異的捕獲探針與一組顏色編碼的微球之間形成特異的共價結合。在雜交懸浮體系中，標記的PCR產物被結合有微球的探針捕獲。結果判定：Luminex100分析樣品時，經過一套微流體系統檢測裝置，紅色激光識別病原體，綠色激光檢測雜交信號，即MFI值，根據MFI值的強弱從而顯示特定病原體的有無。SFDA批準的產品1.甲型流感病毒抗原檢測試劑盒(Dot-ELISA法)(北京萬泰生物藥業股份有限公司)2.甲型H1N1流感病毒(2009)RNA檢測試劑盒(熒光PCR法)(北京金豪制藥股份有限公司)3.甲型H1N1流感病毒(2009)RNA檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)(中山大學達安基因股份有限公司)4.甲型流感病毒核酸診斷試劑盒(PCR-熒光法)Inf.AFQ-PCRKIT(廣州華銀醫藥科技有限公司)5.乙型流感病毒核酸診斷試劑盒(PCR-熒光法)Inf.BFQ-PCRKIT(廣州華銀醫藥科技有限公司)6.甲型流感病毒抗原診斷試劑盒(酶聯免疫法)Inf.AELISAKIT(廣州華銀醫藥科技有限公司)7.乙型流感病毒抗原診斷試劑盒(酶聯免疫法)Inf.BELISAKIT(廣州華銀醫藥科技有限公司)病毒診斷方法專利（免疫）禽流感免疫膠體金診斷試紙條和測試卡鑒別診斷禽流感自然感染雞群酶聯免疫吸附試驗的方法禽流感病毒抗原檢測方法及其金標快速診斷試劑盒和制備方法一種重組甲型H1N1流感病毒非結構蛋白NS1的原核表達、純化及其檢測方法的建立一種禽流感病毒H5亞型乳膠凝集檢測試劑盒及應用鑒別診斷禽流感感染雞群的酶聯免疫吸附試驗方法一種雞禽流感疫苗免疫與病毒野毒感染的膠體金免疫層析快速鑒別診斷試劑盒及應用重組豬流感病毒NP抗原、其制備方法及在診斷中的應用檢測和診斷流感病毒的篩選方法一種檢測H5N1亞型禽流感病毒的方法及其專用試劑盒一種能同時檢測人類和禽類禽流感病毒感染的生物芯片方法

一種禽流感病毒乳膠凝集檢測試劑盒及應用

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