實驗1

大腸桿菌的培養和分離進行大腸桿菌的擴增，利用液體培養基進行細菌培養的操作。進行大腸桿菌的分離，用固體培養基進行細菌的劃線培養。說明大腸桿菌培養的條件和操作要求。學習目標0119世紀中期，法國的釀造業在生產過程中，出現了葡萄酒變酸、變味的怪事。經過一番研究，法國科學家巴斯德發現，導致生產失敗的根源在于發酵物中混入了雜菌。

新課導入02微生物是結構簡單、形體微小，若想得到純凈的微生物，就必須對其進行培養和分離。今天我們就以大腸桿菌為例學習微生物的培養與分離。（一）基礎知識（二）實驗流程新知探究03微生物1培養基2無菌操作3（一）基礎知識微生物11、概念：指結構簡單,形體微小的單細胞、多細胞或無細胞結構的低等生物。2、微生物的類群病毒

細菌

藍細菌

放線菌

酵母

霉菌

原生動物病毒原核生物真菌原生動物培養基21、類型：按物理性質分液體培養基固體培養基凝固劑瓊脂擴大培養，工業生產分離純化，鑒定菌種，計數，保藏2、成分及其作用：成分作用主要來源碳源主要作能源物質無機碳(CO2)或有機碳(糖類)氮源合成含N類化合物N2，NH3，銨，硝酸鹽尿素，牛肉膏，蛋白胨無機鹽調節滲透壓等硝酸銨，磷酸二氫鉀，磷酸氫二鈉，氯化鈉等水提供生存環境水生長因子調節促生長維生素，AA，堿基等無菌操作31、概念：

無菌操作泛指在培養微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。2、無菌操作包括：（1）對實驗操作空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；（2）將培養器皿、接種用具和培養基等器具進行滅菌；（3）為避免周圍微生物污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近旁進行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。（1）消毒：用化學或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程；不能殺死芽孢和孢子。3、消毒與滅菌的概念及兩者的區別（2）滅菌：以化學或物理方法消滅所有微生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達到完全無菌的過程。4、常用的消毒與滅菌的方法：（1）常用消毒法：A、煮沸消毒法：100℃煮沸5-6minB、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min（牛奶）C、化學藥劑消毒法：用70%酒精進行皮膚消毒;氯氣消毒水源D、紫外線消毒：（空氣）a.灼燒滅菌（2）常用滅菌法：b.干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。c.高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.1.無菌技術除了用來防止實驗室的培養物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？答：無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。思考2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養細菌用的培養基與培養皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。配制培養基包器材滅菌菌種擴增倒平板接種、劃線培養觀察記錄（二）實驗流程配制培養基包器材滅菌菌種擴增倒平板接種、劃線培養觀察記錄（二）實驗流程配制培養基MS培養基的配制流程圖配制培養基包器材滅菌菌種擴增倒平板接種、劃線培養觀察記錄（二）實驗流程包器材包器材配制培養基包器材滅菌菌種擴增倒平板接種、劃線培養觀察記錄（二）實驗流程高壓鍋滅菌滅菌條件：121℃（1kg/c㎡）15min滅菌配制培養基包器材滅菌菌種擴增倒平板接種、劃線培養觀察記錄（二）實驗流程搖床震蕩培養12h（于LB液體培養基中）菌種擴增配制培養基包器材滅菌菌種擴增倒平板接種、劃線培養觀察記錄（二）實驗流程倒平板滅菌后的培養基在無菌操作臺上倒入4個培養皿中，倒后立即置于水平位置上，輕輕晃動，使培養基鋪滿平皿底部，待凝，使之形成平面。配制培養基包器材滅菌菌種擴增倒平板接種、劃線培養觀察記錄（二）實驗流程接種將斜面上培養的大腸桿菌菌種接種到滅菌后的液體培養基中，使其在37℃搖床培養12小時。注意事項:1.火焰旁從斜面上用接種環取菌；2.取菌前接種環要用酒精燈灼燒滅菌，冷卻后方能取菌；3.取菌后封口膜和棉塞復原。燒至暗紅接種劃線

1）灼燒接種環；

2）接種環冷卻后，蘸取帶菌培養物；

3）在近火焰處，讓帶菌接種環在固體培養基上劃線。①④③②分離后，一個菌體便會形成一個菌落，這是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選菌株的最簡便方法之一。編號成分含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml右表是某微生物培養基成分，請據此回答下列問題：隨堂練習041）右表培養基可培養的微生物類型是

。2）若不慎將過量NaCl加入培養基中。如不想浪費此培養基，可再加入

。自養型微生物含碳有機物3）若除去成分②，加入（CH2O），該培養基可用于培養

。4）表中營養成分共有

類。固氮微生物35）不論何種培養基，在各種成分都溶化后分裝前，要進行的是

。