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第十二章固相膜免疫測第一節概述一、常用的膜和硝酸纖維素（NC）膜等。其中最常用為NC膜。二、固相膜的技術要第二節免疫金標記技色顆粒，當這些標志物在相應的配體處大量時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而用于定性或半定量一、膠體金（一）原二、免疫金（一）原 第三節膜載體免疫測定的種類與原理一、免疫滲上的相應抗體或抗生反應，過量試劑很快滲入吸水材料中。二、免疫層臨有現成試劑盒供應，試劑盒主要成分為膠體金層析條，所用試劑全部為干試劑，它們被組合在等三、斑點酶免疫吸附斑點酶免疫吸附試驗（DoISA）的實驗原理與常規的ELISA相同，不同之處在于斑點-ELISA所用載體為蛋白質具有極強吸附力（100%）的硝酸纖維素（NC）膜，此外酶作用底物后形成有色的沉淀物，使NC染色。物的底物溶液（如HRP標志物，常用二氨基聯苯胺）；陽性者即可在膜上出現肉眼可見的染色斑點。優點為：NC膜吸附蛋白力強，微量抗原吸附完全，故檢出靈敏度可較普通ELISA6～8倍；試劑用量較ELISA節約約10倍；操作簡單，實驗及結果判斷不需特殊設備條件；吸附抗原（抗體）或已有結果的NC膜可長期保存（－20℃可長達6個月），不影響其活性。四、酶聯免疫斑點試細胞受到刺激后局部產生細胞因子，此細胞因子被特異單克隆抗體捕獲。細胞分解后，獲的細胞因子與生物素標記的二抗結合，其后再與堿性磷酸酶標記的親和素結合。BCIPNBT，PVDFELISPOT微鏡下人工計數斑點或通過ELISPOT分析系統對斑點進行計數，1個斑點代表1個細胞，從而計算出該蛋3、由于是單細胞水平檢測，ELISPOTELISA和有限稀釋法等更靈敏，能從20萬～30個細胞中檢究、腫瘤研究、過敏性疾病研究、性疾病研究、抗原決定簇圖譜分析、化合物和藥物免疫學反應的篩五、免疫印1些能識別耐變性表位的抗體可與抗原結合，多數多克隆抗中或多或少地含有這種類型的抗體，所以在第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）。抗原等蛋白樣品經SDS處理后帶負電荷，在聚丙烯晰可辨。并可根據SDS時加入的分子量標準，確定各組分的分子量。抗體的性質影響免疫印跡成敗的一個主要因素是抗原分子中可被抗體識別的表位的性質。只有那些能識別耐變性表位的抗體可與抗原結合，多數多克隆抗中

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