1、第一課時 微生物的培養巴蜀名校高三備課組1.了解有關培養基的基礎知識，掌握無菌操作技術的有關內容。2.了解消毒和滅菌常用的方法及二者的區別。3.學會以大腸桿菌為材料進行微生物培養與分離純化的方法。一 目標導航一、培養基與無菌技術1培養基(1)概念：人們按照微生物對_的不同需求，配制出供其_的_。(2)成分：一般含有_、_、_、_，此外還要滿足微生物對_(即生長因子)、_以及氧氣的需求。營養物質生長繁殖營養基質水無機鹽碳源氮源特殊營養物質pH營養物質定義作用主要來源碳源能提供所需_的物質構成生物體的_和一些_，有些是異養生物的_無機化合物：CO2、NaHCO3等；有機化合物：糖類、脂肪酸、花生粉

2、餅、石油等氮源能提供所需_的物質合成蛋白質、核酸以及含氮的代謝產物無機化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生長因子生長必不可少的_酶和核酸的組成成分維生素、氨基酸、堿基等水在生物體內含量很高，在低等生物體內含量更高不僅是優良的溶劑，而且可維持生物大分子結構的穩定無機鹽為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素細胞內的組成成分，生理調節物質，某些化能自養菌的能源，酶的激活劑微量有機物碳元素細胞物質代謝產物能源物質氮元素微生物培養與植物組織培養的營養成分區別？大腸桿菌、硝化細菌、乳酸菌等微生物營養類型。牛肉膏天然培養基，主要提供C源、磷酸鹽和維生素、N源。玉米粉主要

3、提供C源與能量植物組織培養微生物培養培養基成分水、礦質元素、蔗糖、維生素、有機添加物和植物激素等水、無機鹽、碳源、氮源等大腸桿菌：異養兼性厭氧型硝化細菌：自養需氧型乳酸菌：異養厭氧型根據不同的微生物營養類型不同，選擇配制不同的培養基。由可以得到什么結論？1不同的微生物對營養物質的需要各不相同。下列有關一種以CO2為唯一碳源的自養微生物營養的描述中，不正確的是()A氮源物質為該微生物提供必要的氮素 B碳源物質也是該微生物的能源物質C無機鹽是該微生物不可缺少的營養物質 D水是該微生物的營養要素之一營養型碳源氮源生長因子舉例自養型微生物CO2、NaHCO3N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等一般不需要硝化細

4、菌異養型微生物糖類、脂肪酸等銨鹽、硝酸鹽、蛋白胨等有些種類需要乳酸菌B自養微生物與異養微生物的營養什么區別呢？ (3)培養基的種類劃分標準培養基種類特點用途物理性質_培養基加凝固劑，如_半固體培養基觀察微生物的運動、分類、鑒定_培養基微生物_、_、活菌計數、保藏菌種化學成分_培養基含化學成分不明確的天然物質工業生產_培養基培養基成分明確(用化學成分已知的化學物質配成)分類、鑒定用途_培養基培養基中加入某種化學物質，以_ _不需要的微生物的生長，_ 所需要的微生物的生長培養、_出特定微生物(如培養酵母菌和霉菌，可在培養基中加入青霉素或鏈霉素；培養固氮菌可用無氮培養基)_培養基根據微生物的代謝特點

5、，在培養基中加入某種指示劑或化學藥品_不同種類的微生物，如可用伊紅美藍培養基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)液體固體工業生產分離鑒定瓊脂天然合成選擇抑制促進分離鑒別鑒別純化大腸桿菌、分離分解尿素微生物、分離細菌與真菌混合菌的培養基類型是什么？拓展深化病毒目前的利用人工培養基來培養方法？需接種在動、植物組織細胞中才能繁殖。常用于培養病毒的是活雞胚。2下列說法正確的是()A培養基是為微生物的生長繁殖提供營養的基質B培養基只有兩類：液體培養基和固體培養基C除水以外的無機物只能提供無機鹽 D無機氮源不可能提供能量選擇培養基A3.下列關于植物組織培養、微生物培養和

6、無土栽培技術的比較的有關說法中，不正確的是（ ）A 微生物培養和無土栽培技無需更換培養基，植物組織培養需更換培養基B 植物組織培養、微生物培養需要嚴格控制無菌操作，植物組織培養不需要C 三者都需要加入水、礦質元素和一些必要的有機物D 三者培養的目的和原理各不相同C【配對練習 2】關于配制培養基的敘述中，正確的是()A制作固體培養基必須加入瓊脂B加入青霉素可得到放線菌C培養自生固氮菌不需氮源D發酵工程一般用半固體培養基解析：固體培養基需加入凝固劑，瓊脂是常用的，但不是唯一的；青霉素可抑制細菌和放線菌的生長；發酵工程一般用液體培養基；自生固氮菌能夠將空氣中的氮還原成氨，故培養基配制時不需加氮源。答

7、案：C拓展深化某些細菌在其生長發育后期，可在細胞內形成一個圓形的抗逆性休眠體，稱為芽孢。每個細菌細胞僅形成一個芽孢，故它無繁殖功能。芽孢有極強的抗熱、抗輻射、抗化學藥物和抗靜水壓的能力。芽孢的休眠能力十分驚人，可保持幾年到幾十年的生活力。孢子是微生物產生的一種有繁殖或休眠作用的細胞。一般是單細胞，個體微小，通常是適應于從不利環境條件中存活下來，并在條件改變時產生新的營養體，能直接發育成新個體。(4)消毒與滅菌的常用方法方法條件作用對象消毒100，煮沸56 min殺死微生物的營養細胞和一部分芽孢7075煮30 min或80煮15 min不耐高溫的液體（如牛奶）70%的酒精對雙手消毒50%的石炭酸

8、、來蘇水對空氣消毒一定濃度的乳酸、食醋通過熏蒸對空氣進行消毒紫外線法紫外線照射30 min物體表面或空氣中的微生物煮沸法巴氏消毒法化學藥劑法滅菌在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒對接種環、接種針或其他金屬工具滅菌，也可以對試管口、瓶口滅菌在干熱滅菌箱內，160170條件下，加熱12 h耐高溫且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金屬用具等在高壓蒸汽滅菌鍋內，121，100 kPa，滅菌1530 min30 W照射30 min小型接種室、接種箱等紫外線滅菌灼燒滅菌干熱滅菌高壓蒸汽滅菌(一)配制培養基1配制原則(1)_(根據微生物的種類、培養目的等)，如培養基可由簡單的無機物組成；生產用培養基內可加入化學成分

9、不明確的天然物質，而分類鑒定用培養基內必須加入已知化學成分的物質。(2)_，注意各種營養物質的濃度和比例。(3)_，各種微生物適宜生長的pH范圍不同，細菌6.57.5、放線菌7.58.5、真菌5.06.0。二、實驗操作目的要明確營養要協調pH要適宜判斷下列各項是否需要消毒或滅菌。如需要，選擇合適方法。（1）豆漿 （2）游泳池 （3）超凈工作臺 （4）玻棒、試管、吸管、錐形瓶 （5）培養細菌用的培養皿 （6）無菌水 （7）牛肉膏蛋白胨培養基（8）接種針和接種環 （9）實驗操作者的雙手滅菌（灼燒）消毒（巴氏）消毒（化學）消毒（先化學后紫外線）消毒（化學）消毒（化學）滅菌（干熱）滅菌（高壓蒸汽）滅菌

10、（高壓蒸汽）)【例 3】下列操作與滅菌無關的是(A接種前用火焰灼燒接種環B接種前用酒精擦拭雙手C接種在酒精燈火焰旁完成D將平板倒置，放入培養箱中培養無菌操作是微生物培養的必要前提，學生必須樹立“無菌概念”。前三項都是無菌操作的規范要求，第四項將平板倒置(為了防止皿蓋上的冷凝水落入培養基中，造成污染)，放入培養箱中培養與滅菌無關。【答案】：D注意不同微生物對營養需求不同，因此，首先根據不同微生物的營養需求配制針對性強的培養基。營養物質濃度過低不能滿足微生物營養需要，過高對微生物的生長有抑制作用，另外，培養基中各營養物質濃度比直接影響微生物的生長繁殖和代謝產物的形成和積累，其中碳氮比(C/N)的影

11、響較大。例如，在谷氨酸生產中，當培養基中的碳源與氮源的比為41時，菌體大量繁殖，而產生的谷氨酸少；當碳源與氮源的比為31時，菌體繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大增。2配制方法(以制備牛肉膏蛋白胨固體培養基為例)培養基組分提供的主要營養物質牛肉膏5.0 g碳源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10.0 g氮源和維生素NaCl 5.0 g無機鹽H2O定容至1 000 mL氫元素、氧元素瓊脂 (1)培養異養菌的牛肉膏蛋白胨固體培養基的營養構成合格的培養基必須滅菌效果好。培養基配制好后，要放在恒溫箱中保溫12 d，若無菌落生長則說明制備的培養基是合格的。提醒4下列為某同學在培養金黃色葡萄球菌實驗中的部分操作步驟，其中

12、正確的是()A培養基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接補充蒸餾水至100 mLB培養基配制完畢可直接使用C加壓至100 kPa之前，要徹底排出鍋內的冷空氣D將接種環放在酒精燈火焰上灼燒，滅菌后立即伸入菌液試管內挑取少量菌種純化大腸桿菌就是為了獲得大腸桿菌的純種菌落，這需在培養時，盡量使菌落中的菌體來自于一個大腸桿菌的分裂，即這個菌落的細菌群體由一個大腸桿菌繁殖而來，這就需接種時盡量接種單個的大腸桿菌。(二)純化大腸桿菌C1微生物接種的方法微生物接種的方法最常用的是_和_兩種。(1)_通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。將_放在酒精燈火焰上灼燒，直到接

13、種環燒紅。在火焰旁冷卻接種環，并打開盛有菌液的試管的_。將試管口通過酒精燈的_。將已冷卻的接種環伸入菌液中，_一環菌液。將試管口通過酒精燈的火焰，并迅速塞上棉塞。_將培養皿皿蓋打開一條縫隙，_將沾有菌種的接種環迅速伸入_，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養基。灼燒接種環，待其冷卻后，從第一區域劃線的末端開始往第二區域內劃線。重復以上操作，在三、四、五區域內劃線。注意不要將_的劃線與_相連。將_，放入培養箱中培養。平板劃線法稀釋涂布平板法平板劃線法接種環棉塞火焰沾取左手右手平板內最后一區第一區平板倒置2注意事項(1)平板劃線法操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進行_，劃線操作結

14、束時，仍需灼燒_。從第二次以后的劃線操作總是從_開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落 (2)稀釋涂布平板法稀釋涂布平板的操作比較復雜，且各個細節均需保證“_”，應特別注意：酒精燈與培養皿的距離要合適。吸管頭不要接觸任何其他物體。吸管要在酒精燈火焰周圍使用。3微生物分離純化培養的結果作出分析與評價(1)培養未接種培養基的作用是對照，若有菌落形成，說明培養基滅菌不徹底。(2)在肉湯培養基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。(3)培養12 h和24 h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是時間越長，菌落中細菌繁殖越多，菌落體積越大，而

15、菌落的位置不動，只是菌落數增多。(4)頻繁使用的菌種利用臨時保藏法保存，長期保存菌種的方法是甘油管藏法。前者利用固體斜面培養基培養后，保存在4冰箱中，第36個月轉種培養一次，缺點是保存時間較短，菌種容易被污染或產生變異；后者將菌種與無菌甘油等量混合后保存在20的冷凍箱中。火焰灼燒滅菌接種環上一次劃線末端無菌4菌種的保存為了保持菌種的純凈，需對菌種進行保藏。對于頻繁使用的菌種，我們可以采用_法；對于需要長期保存的菌種，可以采用_法。將菌種放在低溫環境中保藏的目的是_，但時間長了菌種還是要老化的，因此對臨時保存的菌種_個月后需重新接種。4有關平板劃線操作的敘述，不正確的是()A第一步灼燒接種環是為

16、了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物B每次劃線前，灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上的菌種C在第二區域內劃線時，接種環上的菌種直接來源于菌液D劃線結束后，灼燒接種環，能及時殺死接種環上的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者臨時保藏甘油管藏降低微生物的新陳代謝速率36CC在實驗室中，切不可吃東西、喝水，離開實驗室時一定要洗手，以防止被微生物感染D使用后的培養基丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環境4下列敘述錯誤的是()A右手拿裝有培養基的錐形瓶，左手拔出棉塞，為避免污染需放在酒精燈火焰附近B倒平板整個過程應在火焰旁進行C打開培養皿蓋，右手將錐形瓶中的培養基倒入培養皿，左手立即蓋上培養

17、皿的皿蓋D為避免水滴滴入培養基，平板應倒過來放置5有關稀釋涂布平板法的說法中，錯誤的是()A用移液管把菌液從一支試管轉移到下一支試管后，要用手指輕壓移液管的橡皮頭，吹吸三次，目的是使菌液與水充分混勻B移液管需經過滅菌C試管口與移液管應在離火焰12 cm處D涂布時可轉動涂布器，使菌液涂布均勻CD6以下關于制備牛肉膏蛋白胨固體培養基的操作順序正確的是A計算稱量倒平板溶化滅菌B計算稱量溶化倒平板滅菌C計算稱量溶化滅菌倒平板D計算稱量滅菌溶化倒平板7為了保持菌種的純凈，需要進行菌種的保藏，下列有關敘述不正確的是()A對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法B臨時保藏的菌種一般是接種到試管的斜面培養基

18、上C臨時保藏的菌種容易被污染或產生變異D對于需要長期保存的菌種，可以采用低溫4保藏的方法8有關平板劃線操作的敘述，正確的是()A使用已滅菌的接種環、培養皿，操作過程中不再滅菌B打開含菌種的試管需通過火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞C把皿蓋打開，將沾有菌種的接種環迅速伸入平板內，劃三至五條平行線即可CDDD最后將平板倒置，放入培養箱中培養二、簡答題9某學校打算開辟一塊食用菌栽培基地，以豐富學生的勞動技術課內容。首先對食用菌實驗室進行清掃和消毒處理，準備食用菌栽培所需的各種原料和用具，然后從菌種站購來各種食用菌菌種。請回答下列問題：(1)對買回來的菌種進行擴大培養，首先制備試管培養基，寫出制備牛

19、肉膏蛋白胨固體培養基所需的原料：_、_、_、_、_。其中提供氮源的是_；提供碳源的主要物質是_。(2)微生物在生長過程中對各種成分所需量不同，故配制培養基時各成分要有合適的_。在燒杯中加入瓊脂后要不停地_，防止_。(3)將配制好的培養基分裝到試管中，加棉塞后若干個試管一捆，包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入_中滅菌，壓力_kPa，溫度_，時間_。滅菌完畢拔掉電源，待鍋內壓力自然降到0時，將試管取出。如果棉塞上沾有培養基，此試管_。(4)使用高壓蒸汽滅菌鍋時注意，先向鍋內倒入_，把鍋內水加熱煮沸并將其中原有冷空氣徹底排出后將鍋密閉。(5)從一支試管向另一支試管接種時注意，接種環要在酒精燈_(“內”或“外

20、”)焰滅菌，并且待接種環_后蘸取菌種，試管口不能離開酒精燈火焰附近，將接種的試管放入_冰箱中保藏。牛肉膏牛肉膏蛋白胨水無機鹽瓊脂蛋白胨瓊脂糊底引起燒杯破裂比例攪拌廢棄高壓蒸汽滅菌鍋1001211530 min適量水外冷卻4目標導航1.研究培養基對微生物的選擇作用。 2.進行微生物數量的測定。第2課時土壤中分解尿素細菌的分離與計數一、研究思路1篩選菌株(1)實驗室中微生物篩選的原理人為提供有利于_生長的條件(包括營養、溫度、pH等)，同時_或_其他微生物生長。(2)選擇培養基在微生物學中，將允許_種類的微生物生長，同時_或_其他種類微生物生長的培養基，稱做選擇培養基。目的菌株抑制阻止特定抑制阻止

21、(3)分離分解尿素的細菌的選擇培養基在該培養基配方中，為微生物的生長提供碳源的是_，提供氮源的是_，瓊脂的作用是凝固劑。該培養基對微生物具有選擇作用。其選擇機制是_才能在該培養基上生長。土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們體內能合成_，將尿素分解的反應式是_。Taq細菌能忍受93左右的高溫，是在美國黃石國家公園的一個熱泉中發現的，這說明，在尋找目的菌株時，要根據_。2統計菌落數目的方法(1)稀釋涂布平板法(也叫活菌計數法)原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的_，通過統計平板上的_，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。操作葡萄糖尿素只有能夠以尿素作為氮源

22、的微生物脲酶CO(NH2)2H2O CO22NH3脲酶它對生存環境的要求，到相應的環境中去尋找一個活菌菌落數第一，設置重復組，增強實驗的說服力與準確性。將待測樣品經一系列10倍稀釋，然后選擇_稀釋度的菌液，分別取0.1 mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布整個平板表面，放在適宜的溫度下培養并計算菌落數。為使結果接近真實值，可將同一稀釋度涂布到三個或三個以上的平板上，培養并計算出_。第二，為了保證結果準確，一般選擇菌落數在_的平板進行計數，若設置的重復組中結果相差太遠，意味著操作有誤，需重新實驗。計算公式：每克樣品中的菌株數C/VM，其中C代表_ _ ，V代表_ _(mL)，M

23、代表_。(2)顯微鏡直接計數法原理：此法利用特定的_或_，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數量，但不能區分細菌的死活。計數板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定的面積1 mm2和高0.1 mm的計數室，在1 mm2的面積里又被劃分成25個(或16個)中格，每個中格進一步劃分成16個(或25個)小格，計數室由_個小格組成。三個菌落平均數30300某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數涂布平板時所用的稀釋液的體積稀釋倍數細菌計數板血細胞計數板400操作：將稀釋的樣品滴在計數板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計數45個中格中的細菌數，并求出每個小格所含細菌的平均數，再按公式求出每毫升樣品中所含的細菌數

24、。計數公式：每毫升原液所含細菌數每小格平均細菌數40010 000稀釋倍數。(3)設置重復和對照設置重復：培養過程中應設置重復組，同一稀釋度下應涂布_個平板，才能增強實驗的說服力與準確性。設置對照：實驗中應設置對照，主要目的是_對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。如_對照組，觀察培養物中是否有雜菌污染；設置_培養基，觀察選擇培養基是否具有_作用。二、實驗設計實驗步驟1土壤取樣：從肥沃、濕潤的土壤中，用無菌小鐵鏟鏟去表層土3 cm左右，迅速取土壤并裝入_密封或事先準備好的_中。至少3排除實驗組中非測試因素空白完全篩選無菌信封燒杯2制備培養基：制備_培養基作為對照組，尿素為唯一氮源的培養基作為

25、_，用來判斷選擇培養基是否具有_。放寬稀釋范圍，如稀釋倍數為103107范圍內的要分別涂布，而每個稀釋度下需要_個選擇培養基、_個牛肉膏蛋白胨培養基，因此需要15個選擇培養基和5個牛肉膏蛋白胨培養基。兩種培養基應各有一個作為_對照，此外還需準備8個滅菌的試管和1個滅菌的移液管。3樣品的稀釋與涂布平板：參考下面的實驗流程示意圖，將10 g土樣加入盛有90 mL無菌生理鹽水的錐形瓶中(錐形瓶體積為250 mL)，充分搖勻，吸取上清液1 mL，轉移至盛有_ mL生理鹽水的無菌大試管依次等比稀釋至107稀釋度，并按照由107103稀釋度的順序分別吸取_mL進行平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂布平

26、板，不必更換移液管。牛肉膏蛋白胨實驗組選擇作用31空白90.1說明：圖中的1、2、3平板是_，4為_作對照，判斷選擇培養基是否具篩選作用，還有兩個空白對照，即不涂布稀釋后菌液的選擇培養基和牛肉膏蛋白胨培養基，驗證培養基中是否_。4將涂布好的培養皿放在30溫度下培養，及時觀察和記錄。5挑選選擇培養基上不同形態的菌落接入含_培養基的斜面中，觀察能否產生顏色反應。選擇培養基牛肉膏蛋白胨培養基含有雜菌酚紅指示劑6細菌的計數當菌落數目穩定時，選取菌落數在_的平板進行計數。在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重復計數，然后求出_，并根據平板所對應的稀釋度計算出樣品中細菌的數目。同時仔細觀察所分離到的菌落，并

27、記錄菌落特征。7統計表格表一平板上的菌落數記錄表稀釋倍數1031041051061071234123412341234123412330300平均值表二菌落特征記錄表 菌落種類形狀大小隆起程度顏色123注：一般來說，在一定的培養條件下(相同的培養基、溫度及培養時間)，_表現出_的菌落特征。三、操作提示1取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都要_。2應在_旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入_中，塞好棉塞。3在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在_旁操作。4實驗時要對_做好標記。注明_等。5為了提高效率，在操作時更加有條不紊，應當_。同種微生物穩定.滅菌火焰錐形瓶火焰培養皿培養基類型、培養時間

28、、稀釋度、培養物事先規劃時間內容 結論分析 有無雜菌污染的判斷 對照的培養皿中_菌落生長未被雜菌;污染培養物中菌落數_被雜菌污染菌落形態多樣，菌落數偏高培養物中混入_ 選擇培養基的篩選作用 牛肉膏蛋白胨培養基的菌落數目_選擇培養基的數目選擇培養基具篩選作用，已篩選出一些菌落 樣品的稀釋操作 得到2個或2個以上菌落數目在_的平板操作成功，能進行菌落的計數 重復組的結果 若選取同一種土樣，統計結果應_；如果結果相差太遠，說明實驗操作過程中出現操作失誤，需要找出產生差異的原因 四、結果分析與評價無偏高其他氮源大于30300接近菌落計數規則：選擇平均菌落數在30300間的平板1、只有一個稀釋度符合，以

29、該稀釋度的平均菌落數乘以稀釋倍數報告；2、有兩個稀釋度符合，取決于二者比值（高稀釋度的菌落數除以低稀釋度的菌落數的值） 1）若0.5比值2，以兩稀釋度的菌落數乘稀釋倍數所得的值的均值報告。 2）若2比值或比值 0.5，則取其中較少的菌落總數進行報告。3、若所有稀釋度的菌落平均數均大于300，則按稀釋倍數最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告；4、若所有稀釋度的菌落平均數均小于30，則按稀釋倍數最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告；所有菌落數均不在30300間，以最接近30或300的平均菌落數乘稀釋倍數。例次不同稀釋度的平均菌落數兩個稀釋度菌落數之比菌落總數（個/ml）備注10-110-210-31136

30、51642016400或1.6104兩位以后的數字采取四舍五入的方法去掉22760295461.637750或3.810432890271602.227100或2.71044無法計數1650513513000或5.1105527115270或2.71026無法計數3051230500或3.1104特別注意:測定真菌放線菌與細菌數量時,稀釋度的選擇2.放線菌一般選擇10-3,10-4,10-51.真菌一般選擇10-2,10-3,10-43.細菌一般選擇10-4,10-5,10-6五、課題延伸在細菌分解尿素的化學反應中，細菌合成的_將尿素分解成了_。氨會使培養基的堿性增強，_升高。因此，我們可以通

31、過檢測培養基_來判斷該化學反應是否發生。在以尿素為唯一氮源的培養基中加入_指示劑，培養某種細菌后，如果pH升高，指示劑將_，這樣，我們就可以準確地鑒定該種細菌能夠分解尿素。脲酶氨pHpH的變化酚紅變紅知識點一研究思路1下表為本課題使用的培養基，分析培養基配方，回答下面的問題。KH2PO41.4 gNa2HPO42.1 gMgSO47H2O0.2 g葡萄糖10.0 g尿素1.0 g瓊脂15.0 g用蒸餾水定容到1 000 mL(1)在該培養基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是_。(2)按物理性質劃分該培養基屬于_培養基，理由是培養基中含有_；該類培養基常用于微生物的_等。葡萄糖和尿素

32、固體瓊脂純化、分離、計數(3)由于_，所以該培養基只能用于能夠合成_的微生物的培養。用此培養基培養土壤浸出液能夠從土壤中篩選出_的細菌。(4)在微生物學中，將_的培養基，稱作選擇培養基。2廣東省是我國甘蔗生產區之一。甘蔗是一種高光效的C4植物，單位面積產量很高，種植面積日益擴大，目前已成為南方地區燃料酒精生產的重要原料。利用甘蔗生產燃料酒精的一般工藝流程為：甘蔗榨汁(蔗糖)酵母發酵蒸餾成品(燃料酒精)。(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精發酵菌種，對野生酵母菌進行誘變后通過篩選可以得到具有這些特性的突變菌，誘變及篩選過程如下：步驟1：野生菌液體培養一段時間后接受紫外線照射誘變處理。步

33、驟2：制備選擇培養基。在基本培養基的基礎上，注意 和_，加瓊脂后滅菌，制成固體平板。步驟3：將紫外線照射后的菌液稀釋涂布平板。培養基中只有尿素一種氮源脲酶分解尿素允許特定種類的微生物生長，并能抑制或阻止其他種類微生物生長添加高濃度蔗糖(葡萄糖)調低pH步驟4：根_，篩選出突變菌。(2)上述步驟2、3和4的依據分別是_是否能在選擇培養基上生長提供高糖和酸性的篩選環境；獲得單菌落；能生長的菌落具有耐高糖和耐酸的特性知識點二實驗設計3用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細菌數，在對應稀釋倍數為106的培養基中，得到以下幾種統計結果，正確的是()A涂布了1個平板，統計的菌落數是230B涂布了2個平板，

34、統計的菌落數是215和260，取平均值238C涂布了3個平板，統計的菌落數分別是21、212和256，取平均值163D涂布了3個平板，統計的菌落數分別是210、240和250，取平均值233D4在本實驗操作中對使用的平板和試管要進行標記，以下說法正確的是()A對培養皿僅需注明培養基的種類即可B一般在使用之后進行標記C由于試管用的較多，只需對試管進行標記即可D標記的目的主要是為了防止實驗中平板、試管等的混淆一、選擇題1在缺乏氮源的培養基上，大部分微生物無法生長；在培養基中加入青霉素可以抑制細菌和放線菌的生長；在培養基中加入10%的酚可以抑制細菌和霉菌的生長。利用上述選擇培養基依次能從混雜的微生物

35、群體中分離出()A乳酸菌、金黃色葡萄球菌、放線菌B固氮細菌、大腸桿菌、放線菌C固氮細菌、霉菌、放線菌D固氮細菌、金黃色葡萄球菌、放線菌DC2請選出下列正確的操作步驟()土壤取樣稱取10 g土壤，取出加入盛有90 mL無菌水的錐形瓶中吸取0.1 mL土壤溶液進行平板涂布依次稀釋至101、102、103、104、105、106、107稀釋度ABCD3在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑的目的是()A篩選出能分解尿素的細菌B對分離的菌種作進一步鑒定C作細菌的營養成分D如指示劑變藍就能準確地認定該菌能分解尿素4下面對“從土壤中分離分解尿素的細菌過程中滅菌”的理解，不正確的是()A防止雜菌污染 B消滅全部微生物C稀釋土壤溶液的過程中必須在火焰旁操作D滅菌必須在接種前進行CBB5下列不屬于菌種記數方法的是()A平板劃線法 B稀釋涂布平板法C顯微鏡檢法 D濾膜法6下列有關配制培養基的敘述中，正確的是()A制作固體培養基必須加入瓊脂B加入青霉素可得到乳酸菌C培養自生固氮菌不需要氮源D發酵工程一般用固體培養基7用稀釋涂布平板法來統計樣品中活菌的數目。在某稀釋濃度下某同學做了若干個平板并統計每個平板的菌落數，最接近樣品中菌體數真實值的是()A菌落數最多的平板B菌落數量最少的平板C菌落數量適中的平板D取若干個平板菌落數量的平均值8土壤中分