1、緒論復習題及參考答案一、填空: 1、根據培養的材料，植物組織培養分：愈傷組織培養、器官培養、細胞培養、原生質體培養、懸浮培養等類型。2、植物組織培養的發展分為三個階段：萌芽階段、奠基階段和快速發展和應用階段。3、 1902年，Haberlandt提出了植物細胞“全能性”學說，1934年，White出版了植物組織培養手冊從而使植物組織培養為一門新興學科。二、名詞解釋：1、植物組織培養（plant tissue culture）：是指通過無菌和人工控制的環境條件下，利用適當的培養基，對離體的植物 器官、組織、細胞及原生質體進行培養，使其再生細胞或完整植株的技術。由于培養材料巳脫離了母體，又稱為植物

2、離體 培養（Plant culture in vitro）。2、脫分化（dedifferentiation）：由高度分化的植物器官、組織或細胞產生愈傷組織的過程，稱為植物細胞的脫分化。3、再分化（redifferentiation）：脫分化產生的愈傷組織繼續進行培養又可以重新分化成根或芽等器官，這一過程稱為植 物細胞的再分化。4、外植體（explant）：由活體（in vivo）植物體上切取下來的，用于組織培養的各種接種材料。包括各種器官、組織、細 胞或原生質體等5、愈傷組織（callus）：原指植物在受傷之后于傷口表面形成的一團薄壁細胞，在組培中則指在離體培養過程中形成的具 有分生能力的一團

3、不規則的薄壁細胞，多在植物體切面上產生。三、問答題：1、簡述植物組織培養的理論依據？植物組織培養的理論依據是細胞全能性學說，即植物體的每一個細胞都攜帶有一套完整的基因組，并具有發育成為完整 植株的潛在能力。2、植物組織培養有哪些特點？（1）培養條件可以人為控制（2）生長周期短，繁殖率高：（3）管理方便，利于工廠化生產和自動化控制：3、植物組織培養的分類？（1）根據培養對象不同：組織培養、器官培養、胚胎培養、細胞培養、原生質體培養等；（2）根據培養物培養過程：初代培養、繼代培養；（3）根據培養基的物理狀態：固體培養、液體培養。4、植物組織培養主要應用于哪些方面？（1）快速繁殖運用組織培養的途徑，

4、一個單株一年可以繁殖幾萬到幾百萬個植株；（2）種苗脫毒針對病毒對農作物造成的嚴重危害，通過組織培養可以有效地培育出大量的無病毒種苗；（3）培育和創制新品種利用組織培養可以使難度很大的遠緣雜交取得成功，從而育成一些罕見的新物種；（4）大量生產次生代謝物質 通過植物細胞培養獲得的生物堿、維生素、色素、抗生素以及抗腫瘤藥物不下50多個大類， 其中巳有30多種次生物質的含量在人工培養時巳達到或超過親本植物的水平。植物細胞次生物質的研制與生產碩果累累，后 來居上。（5）植物種質資源的離體保存植物組織培養結合超低溫保存技術，可以給植物種質保存帶來一次大的飛躍。因為保存一個 細胞就相當于保存一粒種子，但所占

5、的空間僅為原來的幾萬分之一，而且在-193度的液氮中可以長時間保存，不像種子那樣 需要年年更新或經常更新。（6）人工種子 人工種子便于貯藏和運輸，適合機械化播種；繁殖速度快，不受季節和環境限制，利于工廠化生產；體細 胞胚由無性繁殖體系產生，可以固定雜種優勢。第1章 實驗室及基本操作復習題及參考答案一、填空：1、組織培養實驗室必要的設備有超凈丁作臺、高壓滅菌器、空調機、天平、顯微鏡、蒸餾水發生器、酸度計 等。2、培養基成分主要包括無機營養成分、 、碳水化合物、其它物質。3、 培養基最常用的碳源是蔗糖，使用濃度在1%-5%常用3%。4、糖在植物組織培養中是不可缺少的，它不但作為離體組織賴以生長的碳

6、源，而且還能維持培養基滲透壓。5、在固體培養時瓊脂是使用最方便、最好的凝固劑和支持物，一般用量為6-10g/L之間。6、馴化的目的：在于提高試管苗對外界環境條件的適應性，提高其光合作用的能力，促使試健壯，提高苗的移裁成活率。7、生長素/細胞分裂素的高低決定著外植體的發育方向，其比值高：有利于一的形成；低：有利于的形成。8、培養基滅菌一般在口8iEa的壓力下，鍋內溫度達121 ，維持 min。9、選擇外植體時應選擇選擇優良的種質、選健壯的植株、選最適的時期和選取適宜的大小。10、 誘導胚狀體比誘導芽的優點：(1)數量多、(2)速度快、(3)結構完整。11、試管苗的生態環境：高溫且恒溫、高濕、弱光

7、、無菌。12、 培養基中加入活性炭的目的：利用其吸附能力，減少一些有害物質的影響。13、篩選培養基的方法：單因子試驗法、多因子試驗法、光譜實驗法14、植物培養技術：滅菌、接種、培養、馴化四個環節15、試管苗的馴化注意：基質、溫、光、水、肥、氣的綜合管理二、名詞解釋：1、MS培養基(MS culture medium)：它是1962年由Murashige和Skoog為培養煙草細胞而設計的。是目前應用最廣泛的 培養基。特點是無機鹽離子濃度較高，有高含量的N、K，硝酸鹽量大，營養豐富。2、母液：是欲配制液的濃縮液。配成比所需濃度高10-100倍。母液配制時可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機 物

8、和激素類等。好處：保證各物質成分的準確性配制時的快速移取便于低溫保藏。3、褐變：是指外植體在培養中體內的多酚氧化酶被激活，使細胞里的酚類物質氧化成棕褐色的醌類物質，有時使整個培養基 變褐，從而抑制其他酶的活性，影響材料的培養。4、玻璃化現象(vitrification phenomenon):在長期的離體培養繁殖時，有些試管苗的嫩莖、葉片呈現半透明水漬狀，這種 現象稱為玻璃化。5、消毒：指殺死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再發生危害作用。6、滅菌：是指用物理或化學的方法，殺死物體表面和孔隙內的一切微生物或生物體，即把所有生命的物質全部殺死。7、接種：在無菌條件下，用灼燒過的鑷子將外植體放到

9、培養基上的操作過程。三、問答題1、一般組織培養的操作工序：、培養器皿的清洗；、培養基的配制、分裝和高壓滅菌；、無菌操作材料的表面滅菌和接種；、將培養物放到培養室培養；、試管苗的馴化、移栽和初期管理。2、論述植物生長調節物質在組織培養中的作用？并列舉常見的種類生長素類：主要被用于誘導愈傷組織形成，促進細胞脫分化；促進細胞伸長；誘導根的分化，促進生根。如：IAA (吲 哚乙酸)；NAA(萘乙酸)；IBA(吲哚丁酸)；2,4D(2,4二氯苯氧乙酸)細胞分裂素類：誘導芽的分化促進側芽萌發生長。促進細胞分裂與擴大。抑制根的分化。抑制衰老，減少葉 綠素分解，有保鮮效果。如：包括6BA(6芐基腺嘌吟)、Kt

10、 (激動素)、Zt (玉米素)等。3、常用的培養基有哪些？說明其特點MS培養基：1962年由Murashige和Skoog為培養煙草細胞而設計的。是目前應用最廣泛的培養基。特點是無機鹽離 子濃度較高white培養基：無機鹽濃度較低，適于生根培養。N6培養基：KNO3和(NH4) 2SO4含量高，不含鑰。廣泛應用于禾谷類植物的花粉和花藥培養。B5培養基：主要特點是含有較低的銨鹽，較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素。適宜雙子葉植物特別是木本植物的培養4、如何配制MS培養基？配制母液：一般母液配成比所需濃度高10-100倍的濃縮液，配制時可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物和激素類等。(2)配制方法：將

11、母液按順序擺放取適量的蒸餾水加入配制容器中按需要量依次取母液及生長調節物質加入蔗糖(30g/L)溶解定容調pH值加瓊脂(6-10g/L)，完全融化后，分裝至培養瓶中，封口高壓滅菌5、如何對外植體進行表面消毒？將需要的材料用水洗干凈。表面滅菌：用70%酒精浸30-60S左右。滅菌劑處理：0.1%升汞10分鐘、或在2%次氯酸鈉液中浸泡20-25分鐘。用無菌水沖洗3-5次左右6、接種后離體培養物對光、溫、濕等環境條件的要求？光照：愈傷組織的誘導不需光照或弱光，器官分化需要光照，一般1216h/d，光照度1000-5000lxo溫度：一般 252C濕度：培養室內的濕度要求保持70%80%的相對濕度。7

12、、論述離體培養污染產生的原因及防治措施。污染：污染原因從病源分面主要有細菌和真菌和兩大類。原因：(1)外植體材料消毒不徹底培養基滅菌不徹底操作環境不潔凈操作人員操作不規范、不熟練。預防措施：(1)減少或防止材料帶菌外植體滅菌要徹底培養基滅菌要徹底玻璃器皿和金屬器皿的滅菌要徹底無菌室的消毒操作人員一定要嚴格按照無菌操作的程序進行接種。8、固體培養基與液體培養基相比有何特點？優點:操作簡便，通氣問題易于解決，便于經常觀察研究.缺點:培養物與培養基的接觸(即吸收)面積小，各種養分在瓊脂中擴散較慢，影響養分的充分利用，同時培養物排出的一些 代謝廢物，聚集在吸收表面，對組織產生毒害作用。9、在培養基中加

13、入活性炭有什么作用？主要是利用其吸附作用，減少一些有害物質的影響活性炭使培養基變黑，有利于某些植物生根對形態發生和器官形成有良好的效應10、植物組織培養技術主要包括哪些環節？各環節的主要工作內容？培養基的配制及滅菌外植體的選擇及滅菌外植體的接種及培養試管苗的馴化與移栽11、組織培養中常用的滅菌方法？分為物理的和化學的兩類，物理方法如干熱(烘燒和灼燒)、濕熱(常壓或高壓蒸煮)、射線處理(紫外線、超聲波、微波、過濾和大量無菌水沖洗等措施；化學方法是使用升汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇兒、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學藥品處理。12、怎樣進行培養基的高壓濕熱滅菌？方法是：關閉放氣閥，通電后，

14、待壓力上升到49kPa時，打開放氣閥，放出空氣(注意完全排除鍋內空氣，使鍋內全部 是水蒸氣，滅菌才能徹底)，待壓力表指針歸零后，再關閉放氣閥。當壓力表上升達到108kPa時，鍋內溫度達121。(在 此蒸氣溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽抱)，維持20-30min。13、無菌操作時應注意哪些事項？在接種4h前用甲醛熏蒸接種室；在接種前15-20min，打開超凈工作臺的風機以及臺上的紫外燈；接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實驗服，并換穿拖鞋等；上工作臺后，用酒精棉球擦拭雙手，特別是指甲處。然后70%酒精噴霧降塵，并擦拭工作臺面；接種工具蘸95%酒精，灼燒；接種時將試管斜著，使試管口在

15、酒精燈火焰上轉動，灼燒數秒鐘。接完種后，將管口在火焰上再灼燒數秒鐘。接種時，接種員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動和咳嗽等；接種完畢后要清理干凈并用酒精擦工作臺。14、在植物組織培養中，通過哪些途徑可以得到完整的植株？外植體一愈傷組織一根、芽一試管苗同時長芽和根先長芽，再長根先長根，再長芽外植體一胚狀體一試管苗外植體一根、芽一試管苗。15、與常規苗相比，試管苗具有哪些特點？生長細弱；光合作用差葉片氣孔數目少，活性差根的吸收功能弱對逆境的適應和抵抗能力差16、如何提高試管苗移栽的成活率？試管苗的生理狀況 應選擇壯苗，以提高移栽后的成活率加入植物生長調節物質如生長素降低無機鹽的濃度加入少量活性炭

16、，尤其是用酸、堿和有機溶劑洗過的活性炭環境因子適當的環境條件能提高移栽的成活率移栽過程中讓試管苗從無菌向有菌逐漸過渡17、接種程序：植物材料表面的消毒切割外植體將外植體移入培養基第2章基本原理復習題及參考答案一、填空：1、絕大多數培養植物再生植株時都先經過愈傷組織階段。2、愈傷組織形成大致經歷誘導期、分裂期和分化期 三個時期。3、使用植物生長調節物質時要注意：種類和濃度生長素和細胞分裂素的比值4、愈傷組織的形態發生方式主要有不定芽方式和胚狀體方式。5、組織培養細胞再分化包括四個水平：細胞水平的再分化、組織水平的再分化、器官水平的再分化（器官發生）和植株水平 的分化二、名詞解釋：1、愈傷組織培養

17、（callus culture）:是指將母體植株上的外植體，接種到無菌的培養基上，進行愈傷組織誘導、生長和發 育的一門技術。2、繼代培養（subculture）:愈傷組織在培養基上生長一段時間以后，由于營養物質枯竭，水分散失，以及代謝產物的積 累，必須轉移到新鮮培養基上培養。這個過程叫做繼代培養3、體細胞胚（somatic embryo）又稱胚狀體（embryoid）:指在組織培養中，由一個非合子細胞（體細胞），經過胚胎發生和 胚胎發育過程（經過原胚、球形胚、心形胚、魚雷胚和子葉胚5個時期），形成的具有雙極性的胚狀結構。4、體細胞胚胎發生：植物組織培養細胞產生胚狀體的過程，稱為體細胞胚胎發生。

18、5、細胞全能性（cell totipotency）：每一個植物細胞具有該植物的全部遺傳信息，在適當條件下可表達出該細胞的所有遺傳信 息，分化出植物有機體所有不同類型細胞，形成不同類型的器官甚至胚狀體，直至形成完整再生植株6、形態建成：外植體細胞在適宜的培養條件下發生脫分化、再分化，產生芽和根，或者形成胚狀體，發育成苗或完整植株。三、問答題1、愈傷組織細胞的分化一般分幾個時期？各有何特點？（1）誘導期（起動期）：是細胞準備分裂的時期。細胞大小幾不變，內部發生生理生化變化，迅速合成蛋白質和核酸。（2）分裂期：外層細胞分裂，中間細胞常不分裂，形成小芯。細胞分裂快，結構疏松，缺少結構，淺而透明。在原培

19、養基上， 細胞必分化，及時轉移，其可無限制地進行細胞分裂，維持不分化狀態。（3）分化期：細胞在形態和生理功能上的分化，出現形態和功能各異的細胞。2、優良的愈傷組織必須具備哪4個特性？（1）高度的胚性或再分化能力，以便從這些愈傷組織得到再生植物（2）容易散碎，以便用這些愈傷組織建立優良的懸浮系，并且在需要時能從中分離出全能性的原生質體（3）旺盛的自我增殖能力，以便用這些愈傷組織建立大規模的愈傷組織無性系。（4）經過長期繼代保存而不喪失胚性，便有可能對它們進行各種遺傳操作。3、愈傷組織的形態發生有哪些情況？（1）愈傷組織僅有根或芽器官的分別形成，即無根的芽或無芽的根；（2）先形成芽，再在芽伸長后，

20、在其莖的基部長出根而形成小植株，多數植物屬這種情況；（3）先產生根，再從根基部分化出芽而形成小植株。這種情況較難誘導芽的形成，尤其對于單子葉植物；（4）先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結合起來形成一株小植株。少見。單子葉植物：與雙子葉植物誘導發生過程類似，只是在形態上無魚雷形胚等階段，成熟體胚上有盾片、胚芽鞘和胚根等 結構。4、簡述細胞脫分化過程。細胞的脫分化過程可分為3個階段：第一階段為啟動階段，表現為細胞質增生，并開始向細胞中央伸出細胞質絲，液泡蛋白體出現；第二階段為演變階段，此時細胞核開始向中央移動，質體演變成原質體；5、影響植物離體形態發生的因素有哪些？（不是重點）（

21、1）植物種類和基因型（2）培養材料的生理狀態發育年齡：一般幼態比老態組織形態發生能力高；培養器官或組織類型：細胞分裂旺盛的器官較好；培養時間和細胞倍性：一般取處于旺盛生長期的愈傷來誘導器官形成。（3）培養基a營養成分： 一般認為，培養基中的銨態氮和K+有利于胚狀體形成，提高無機磷的含量可促進器官發生；莖尖培養和芽 誘導培養基主要是MS及其修改的培養和B5培養基；碳水化合物種類及濃度對胚狀體發育有重要作用，缺糖或低糖無法形成胚狀體。b植物激素及生長調節劑（起主導作用，通過影響內源激素的平衡起作用c培養基的性質：愈傷組織誘導：在固體培養基上；細胞和胚狀體的誘導在液體培養基上（4）培養條件：光照；溫

22、度；氣體；濕度等6、分裂期愈傷組織的共同特征：細胞分裂快，結構疏松，缺少有組織的結構，維持其不分化的狀態，顏色淺而透明。7、胚狀體發生途徑與器官發生途徑形成植株的區別：胚狀體具有兩極性，即在發育的早期階段，從其方向相反的兩端分化出莖端和根端；而不定芽和不定根都為單向 極性。胚狀體的維管組織與外植體的維管組織無解剖結構上的聯系。而不定芽或不定根往往總是與愈傷組織的維管組織 相聯系。胚狀體維管組織的分布是獨立的“ Y”字形。而不定芽的維管組織無此現象。8、器官發生形成小苗的方式（1）愈傷組織僅有根或芽器官的分別形成，即無根的芽或無芽的根；（2）先長芽，后長根，多數情況；（3）先長根，再從根的基部長

23、芽。這種情況較難誘導芽的形成，尤其對于單子葉植物；（4）先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結合起來形成一株植株。第3章 器官和組織培養復習題及參考答案一、填空：1、植物器官培養主要是指植物的根、莖、葉、花器和幼小果實的無菌培養。2、莖尖培養根據培養目的和取材大小分為莖尖分生組織培養和普通莖尖培養兩種類型。前者主要是對莖尖長度不超過 0.1mm，最小只有幾十微米的莖尖進行培養，目的是獲得無病毒植株；后者是對幾毫米乃至幾十毫米長的莖尖、芽尖 及側芽的培養，目的是離體快繁。3、不定芽產生的途徑：一是從外植體上直接產生二是從由外植體誘導產生的愈傷組織上產生。4、離體葉培養是指包括葉原基

24、、葉柄、葉鞘、葉片、子葉等葉組織的無菌培養。5、在離體葉培養中，6-BA和KT利于芽的形成；2心利于愈傷組織的形成二、名詞解釋：1、植物器官培養（Organ Culture）：是指對植物某一器官的全部或部分或器官原基進行離體培養的技術。分為營養器 官（根、莖、葉）和繁殖器官（果實、種子、花器官）培養。2、花器官培養：是指對植物的整朵花或花的組成部分（包括花托、花瓣、花絲、花藥、子房、胚珠）進行離體培養的技 術。三：問答題：1、離體葉組織中再生植株發生途徑有哪些？在離體葉組織脫分化和再分化培養中，莖和芽分化的4個途徑：（1）直接產生不定芽（2） 離體葉愈傷組織不定芽（3） 離體葉愈傷組織胚狀體不

25、定芽（4）離體葉 -小鱗莖或球狀體愈傷組織/3、離體根培養的一般方法：（1）100ml三角瓶，裝4050ml培養液；液體培養，反復繼代培養，流動式7、莖尖培養的類型：莖尖分生組織培養：對長度0.1mm左右，含1-2個葉原基的莖尖進行培養，即微莖尖培養；目的是獲得無病毒精株普通莖尖培養：對幾毫米至幾十毫米長的莖尖、芽尖及側芽的培養，目的是快速繁殖和用于植物開花生理的研究。8、莖段的培養材料的選擇、處理和培養基的調整選擇：取生長健壯無病蟲的幼嫩枝條或鱗莖盤，若是木本，取當年生嫩枝或一年生枝條，剪去葉片，剪成34cm的小 段。處理：在自來水中沖洗13h，在無菌條件下用75%酒精滅菌3060s，再用濃

26、度為0.1%升汞浸泡38min，或用飽 和漂白粉浸泡1020min，因材料老嫩和蠟質多少而定時間。最后用無菌水沖洗數次，以備接種。培養基的調整：最常用的基本培養基為MS培養基，加入3%蔗糖，用0.7%的瓊脂固化。9莖尖微繁過程有哪幾個階段莖尖微繁殖過程一般包括五個階段：1無菌培養的建立。2芽的增殖。3中間繁殖體的增殖。4誘導生提。5試萱苗的 移栽第4章胚胎培養及離體授粉復習題及參考答案一、填空：1、胚胎培養包括幼胚培養、成熟胚培養、胚乳培養、胚珠培養以及子房培養。2、離體胚的培養分為二種類型：培養和培養。3、胚珠培養分二類：受精胚珠的培養和未受精胚珠的培養。受精胚珠培養目的一是打破種子的休眠;

27、 二是挽救胚的 發育,以獲得雜交種。未受精胚珠培養的目的是獲得單倍體植株。4、子房培養分授粉子房 培養和未授粉子房的培養。前者培養的目的是挽救雜種胚，后者培養的目的是獲得單倍體植株。6、離體胚培養方法：成熟胚和幼胚培養7、胚珠培養的培養基：Nitsch或N5典5,MS，子房培養的培養基：N6,MS二、名詞解釋：1、胚胎培養(embryo culture)：指對植物的胚、子房、胚珠和胚乳進行離體培養，使其發育成完整植物的技術。包括幼 胚培養、成熟胚培養、胚乳培養、胚珠培養以及子房培養。2、胚培養(embryo culture)：采用人工的方法將胚從種子、子房或胚珠中分離出來，再放在無菌的條件下，

28、讓其進一步 生長發育，以至形成幼苗的過程。3、胚乳培養(endosperm culture)：是指將胚乳從母體上分離出來，放在無菌的人工環境條件下，讓其進一步生長發育， 以至形成幼苗的過程。4、胚珠培養(ovule culture)：是指將胚珠從母體上分離出來，在無菌的人工環境條件下培養，使其生長發育形成幼苗的過 程。5、子房培養(ovary culture)：是指將子房從母體上分離出來，在無菌的人工環境條件下培養，使其生長發育形成幼苗的過 程。6、植物離體授粉：指將未授粉的胚珠或子房從母體上分離下來，進行無菌培養，并以一定的方式授以無菌花粉，使之在試管 內實現受精的技術。三、問答題：1、胚培

29、養的作用有哪些？在遠緣雜交育種中的應用:克服雜種胚不能正常發育克服珠心胚的干擾,提高育種效率縮短育種周期測定休眠種子的萌發率5）理論研究中的應用3、胚胎培養的操作步驟。取子房常規表面消毒解剖鏡下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。固體培養4、幼胚的發育方式：1）胚性發育：繼續進行正常的胚胎發育2）早熟發育：迅速萌發成幼苗3）產生愈傷組織：再分化形成多個胚狀體或芽原基。5、胚胎培養的意義、克服遠緣雜種的不育性、使胚胎發育不完全的植株獲得后代、縮短育種年限，提高育種效率6、胚乳培養過程胚乳外植體制備:種子消毒-取出胚乳培養:White或MS誘導培養基-加入2, 4-D或NAA0.52.0mg/L, B

30、A 0.11.0mg / L 25-27C-暗或弱光發育:約6lOd胚乳開始膨大，再誘導形成愈傷組織-轉到分化培養基上培養，分化培養基可加入0.53.0mg/L 的BA及少量的NAA。待愈傷組織長出芽后，切下不定芽，插入生根培養基中，光下培養1015d，切口處可長出 白色的不定根。8、胚珠培養的基本過程1）、首先從花中取出子房進行表面消毒，2）、然后在無菌的條件下進行解剖，取出胚珠，放在培養基上進行培養，將胚珠培養成植株的關鍵是選擇胚的發育時期，實驗證明發育到球形胚期的胚珠較易培養成功，另外為了培養成功，可 取用帶胎座甚至帶部分子房的胚珠進行培養。9、子房培養的培養過程1、制備外植體：在開花前

31、后適宜時期取子房或幼花，消毒2、子房培養：固體或液體培養均可10、子房的發育的發育途徑。口 性細胞（卵細胞、助細胞、極核、反足細胞）-胚狀體或愈傷組織-單倍體植株；口 體細胞（珠被、子房壁）-胚狀體或愈傷組織-二倍體植株；11、胚珠的發育途徑。1）、受精胚珠：一是形成種子；二是形成愈傷組織2）、未受精胚珠：形成單倍體植株。第5章 花藥和花粉培養復習題及參考答案一、填空：1、花藥和花粉培養的共同特點是利用花粉0孢子）染色體數目的單倍性，培育出單倍體植株。2、花藥和花粉培養時，花粉發育的最適宜時期是單核中、晚期（單核靠邊期）。3、MS和B培養基適合雙子葉植物花藥培養；q培養基適合豆科和十字花科花藥

32、培養；*培養基適合禾谷類作物的花藥 培養。4、花藥培養前的預處理:低溫冷藏是最常用的方法。5、壓片染色法是檢測花粉發育時期的簡便有效方法，常用染色劑為醋酸洋紅。6、花藥培養包括：選擇材料-消毒-接種培養-愈合組織生成-分化出單倍體植株.7、花粉的四大發育途徑包括：營養細胞發育、生殖細胞發育、營養和生殖細胞同時發育及花粉均等分裂發育8、花粉培養大致過程包括：花粉的分離-預處理-培養過程9、花藥培養一般選擇花粉的單核期進行接種10、花藥培養是器官培養，花粉培養屬細胞培養11、就濃度蔗糖可誘導花粉形成愈傷組織；較低濃度蔗糖可使愈傷組織分化成苗二、名詞解釋：1、花藥培養（anther culture）

33、:是將花粉發育至一定階段的花藥接種到人工培養基上進行培養，以形成花粉胚或愈傷 組織進而分化成植株的技術。2、花粉培養（pollen culture）:是將花粉從花藥中分離出來進行離體培養的過程。三、問答題：2、比較花粉培養與花藥培養相同點：（1）利用小抱子染色體數目的單倍性，培育出單倍體植株。（2）成苗途徑相同，即有 胚狀體成苗和 愈傷組織再分化成苗兩條途徑。不同點：（1）花藥培養屬于器官培養；而花粉培養屬于細胞培養。（2）花粉培養沒有藥壁組織干擾；可計數小抱子產胚率；可觀察雄核發育的全過程；單倍體產量高。但技術更復雜。3、簡述花粉分離方法（1） 自然散落法（漂浮培養散落小抱子收集法）將花藥接

34、種在預處理液或液體培養基上，待花粉自動散落后，收集 培養。（2）擠壓法 在燒杯或研缽中擠壓花藥，將花粉擠出后收集培養。（3）機械游離A磁攪拌法用磁力攪拌器攪拌培養液中的花藥，使花粉游離出來；B超速旋切法通過攪拌器中的高速旋轉刀具破碎花蕾、穗子、花藥，使小抱子游離出來4、花藥培養的大致過程1）預處理:低溫冷藏是最常用的方法，另有離心、低劑量輻射、化學試劑處理2）表面消毒：因為未開放的花蕾中的花藥為花被包裹，本身處于無菌狀態，可僅用70%酒精棉球將花的表面擦洗即可。也 可按對其他器官消毒處理方法進行，先用70%的酒精浸一下后，在飽和漂白粉溶液中浸1020min，或用0.1%升汞液消毒7 lOmin

35、，然后用無菌水洗35次。將花蕾剪下放入水中，在冰箱45C下保持34d。3）接種：接種時把花蕾用解剖刀、鑷子小心剝開花蕾，取出花藥，注意去掉花絲，然后散落接種到培養基上，一個10ml的 試管可接種20個花藥。培養溫度在2328C左右，每天1116h的光照，光照強度20004000Lx。脫分化培養時，可用 MS + 2,4-D的培養基，或N6+2,4-D的培養基，經1030d，可誘導生成愈傷組織，或少數生成胚狀體。4）培養：一種植物的花藥可以在一種培養基上長幼苗，而在另一種培養基上則形成愈傷組織。如水稻通常在含有生長素的培 養基上誘導出愈傷組織，而在不含任何激素的N6培養基上長出胚狀體。但在辣椒的

36、花藥培養中，只要培養基合適，甚至可 以在同一花藥上一部分花粉形成胚狀體，而另一部分只形成愈傷組織。5）植株的誘導誘導愈傷組織分化芽或根，需將其轉入分化培養基和生根培養基花粉-愈傷組織-苗花粉-胚狀體-苗第6章 細胞培養復習題及參考答案一、填空：1、一般平板培養要求細胞密度每毫升為1X103S 100 x103個。2、條件培養基是懸浮培養過一段時間組織或細胞的液體培養基。3、細胞懸浮培養主要應用于植物有用物質的生產、誘發和篩選突變體、原生質體培養和細胞器分離、食品生產等。4、由植物葉片分離單細胞的方法有機械法和酶解法。5、細胞懸浮培養方法：成批培養；連續培養6、連續培養的種類：（1）半連續培養；

37、（2）連續培養7、連續培養的方法：（1）濁度恒定法；（2）化學恒定法二、名詞：1、看護培養法（nurse culture）:是指用一塊活躍生長的愈傷組織塊來看護單個細胞，并使其生長和增殖的方法。2、平板培養法（plante culture）:是把單細胞懸浮液與融化的瓊脂培養基均勻混合，平鋪一薄層在培養基底上的培養 方法。3、細胞懸浮培養（suspension culture）：是指將單個游離細胞或小細胞團在液體培養基中進行培養增殖的技術。4、初始植板密度（inital planting density）：單細胞固體平板培養時，細胞懸浮液接種到瓊脂培養基上最初細胞密度。5、臨界密度（critic

38、al density）：單細胞培養時，初始植板密度低于某值培養細胞就不能進行分裂和發育成細胞團，則該值 就是臨界密度。（課件沒有）6、植物細胞培養（plant cell culture）：是指對植物器官或愈傷組織上分離出的單細胞（或小細胞團）進行離體培養，形 成單細胞無性系或再生植株的技術。7、條件培養基：曾懸浮培養過一段時間組織或細胞的液體培養基。8、植板率：是指巳形成細胞團的單細胞與接種總細胞數的百分數三、問答題：1、如何得到單細胞無性系？在細胞培養中，常由分散性較好的愈傷組織或懸浮培養物來制備單細胞，也可以用機械法和酶解法從植物器官直接制備單 細胞。由分離的單細胞經看護培養法、微室培養法

39、或平板培養法，即可得到單細胞無性系2、單細胞培養有哪些方法？各有何含義及特點單細胞培養：看護培養；微室培養；平板培養（1）看護培養法：指用一塊活躍生長的愈傷組織塊來看護單個細胞，并使其生長和增殖的方法。特點：優點：簡便易行。效果好，易于成功。缺點：不能在顯微鏡下直接觀察細胞的生長過程。用途：誘導形成單細胞系。（2）微室培養：即將細胞培養在很少量的培養基中。特點：優點：在培養過程中，可以連續進行顯微觀察一個細胞的生長、分裂和形成細胞團的全部過程缺點：培養時間較短用途:主要用來觀察細胞生長、分裂、形成細胞團的過程。（3）平板培養法：把單細胞懸浮液與融化的瓊脂培養基均勻混合，平鋪一薄層在培養基底上的

40、培養方法。特點：優點：可以定點觀察；分離單細胞系容易；缺點：培養細胞氣體交換不暢。用途:分離單細胞無性系，研究其生理、生化、遺傳上的差異而設計的一種單細胞培養技術。廣泛應用于細胞、原生質 體及融合產物的培養。3、什么是植板率？小細胞團的計數方法有哪幾種？植板率是指巳形成細胞團的單細胞與接種總細胞數的百分數。小細胞團計數方法：低倍顯微鏡直接計算；細胞團顯影法4、什么是細胞懸浮培養？簡述成批培養和連續培養的的特點？細胞懸浮培養：是使離體的植物細胞懸浮在液體培養基中進行的無菌培養。（1）成批培養的特點：細胞生長在固定體積的培養基上，直至養分耗盡用攪拌的方法使細胞團和細胞均勻分布細胞數目呈現慢一快一慢

41、一停止生長的變化，但必須更換新鮮培養基才能進行下一批培養（2）連續培養的特點：由于不斷加入新鮮培養基，保證了養分的充分供應，不會出現懸浮培養物發生營養不足的現象可在培養期間使細胞保持在對數生長期中。細胞增殖速度快適于大規模工業化生產5、影響單細胞培養的因子/ 1、條件培養基：條件培養基可有利于單細胞的生長與分裂/ 2、細胞密度（臨界密度）：臨界密度：單細胞培養時，初始植板密度低于某值培養細胞就不能進行分裂和發育成細 胞團，則該值就是臨界密度。初始植板密度應根據培養基的營養狀況而改變，培養基越復雜則植板細胞的臨界密度越低，反之則相反。一般要求每毫升在 1000個細胞以上。/ 3、生長激素：生長激

42、素加1種細胞分裂素和幾種氨基酸（如：丙氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺）。臨界密度只 需25-30細胞/毫升。/ 4、pH：偏酸。/ 5、CO2:可誘導細胞分裂。6、細胞懸浮培養主要應用1）、植物有用物質的生產：在植物組織培養研究中，發現培養細胞中含有各種特殊的代謝產物。2）、誘發和篩選突變體：在細胞培養過程中會產生一些突變體，常采用不同培養基來進行選擇，也就是把懸浮細胞培養 于缺少某種營養物質或生長因子，或是添加某種抑制劑的培養基里，使突變細胞和正常細胞區別開來3）、原生質體培養和細胞分離：利用細胞懸浮培養方法，對細胞原生質進行分離，在適宜的培養基上進行培養，使之生 成完整植株，或對原生體的

43、生理特性進行觀察、研究。4）、食品生產：通過對許多食用植物培養組織的細胞團生產的研究。7、平板培養的基本技術a （1）單細胞懸浮液的制備枝（2）懸浮細胞密度的調制晏 （3）瓊脂培養基配制:0.7 %瓊脂條件培養基。朝 （4）平板制作枝（5）培養第7章原生質體培養和細胞融合復習題及參考答案一、填空： 1、原生質體的分離方法有機械分離法和酶如分離法。2、原生質體培養基常用的滲透劑是甘露醇和山梨醇。3、原生質體的純化方法有：沉降法、漂浮法和界面法4、原生質體活力的測定：形態識別；染色識別。5、原生質體培養方法：液體淺層培養；平板法培養；懸滴法培養；雙層培養法；飼喂層培養6、原生質體融合的方法：無機鹽

44、誘導融合；高pH高鈣離子法；PEG法；聚乙一醇與高pH高鈣相結合的誘導融合；電融 合技術7、雜種細胞的篩選與鑒定：互補選擇；機械分離雜種細胞法；雙熒光標記選擇法8、雜種植株的鑒定：形態學鑒定；細胞學觀察;DNA內切圖譜分析；同工酶分析二、名詞解釋：1、原生質體融合（protoplast fusion）:也稱體細胞雜交（somatic hybridization），就是使分離下來的不同親本的原生 質體，在離體條件下通過誘導發生的質膜融合進而細胞核融合，像性細胞受精作用那樣互相融合成一體的現象。2、原生質體（protoplast）：是指除去了細胞壁后的裸露的植物細胞。三、問答題:1、簡述原生質體作

45、為遺傳操作和生理生化研究的材料有何特點？沒有細胞壁，有利于體細胞融合、體細胞雜交、基因轉移和單細胞培養。原生質體能比較容易攝取外來的遺傳物質。2、酶法分離原生質體時使用的酶的種類有哪些？纖維素酶類半纖維素酶類果膠酶類崩潰酶3、簡述一步酶法分離原生質體的方法一步分離法：把一定量纖維素酶和果膠酶組成混合酶液，對材料進行一次性處理而分離出原生質體。處理溫度25-30C, 處理的時間根據材料及酶濃度的不同而不同，可為2-24h。4、如何純化分離的植物原生質體并鑒定其活力？原生質體的純化沉降法：應用原生質體的比重大于溶液的性質而使原生質體沉于底部。漂浮法：應用滲透劑含量較高的洗滌液使原生質體漂浮于液體表

46、面。梯度離心法：選兩種不同滲透濃度的溶液，其中一種溶液密度大于原生質體的密度，另一種溶液小于原生質體的密度。原生質體活力的測定形態識別：形態上完整，呈圓形，含有飽滿的細胞質，顏色鮮艷的即為存活的原生質體。染色識別0.1%酚番紅或Evans藍染色：有活力的不被染色，死亡的被染上色。雙醋酸鹽熒光素(FDA)染色法：在熒光顯微鏡下有熒光的即為有活性的原生質體。5、原生質體培養的方法有哪些？液體淺層培養平板法培養微懸滴法培養雙層培養法飼養層培養6、原生質體融合有哪幾種主要方法？(1)化學法誘導融合；(2)高PH-高鈣離子法；(3) PEG法；(4) PEG結合高鈣-高pH誘導法；(3)電融合技術7、原

47、生質體培養的意義8、酶的種類及特點。纖維素酶類(Cellulase)：纖維素酶是從綠色木霉中提取的一種復合酶制劑，可降解纖維素，得到裸露的原生質體。果膠酶類(Pectolyase)：果膠酶是從根霉中提取的，使細胞間的果膠質降解，把細胞從組織內分離出來。半纖維素酶類(Hemicellulase)：降解半纖維素為單糖或單糖衍生物。崩潰酶：一種粗制酶。蝸牛酶：主要用于分離小抱子(花粉母細胞和四分體細胞)的原生質體第8章植物離體快繁和人工種子復習題及參考答案一、填空：1、原球莖發生型是蘭科植物特有的一種快繁方式。2、離體快繁商業化生產應注意的問題是快繁苗的污染、玻璃化、褐化和黃化。3、根據繁殖體的類型

48、人工種子可分為兩類：一類是體細胞胚人工種子；另一類是非體細胞胚人工種子。4、人工種子包裹方法離子交換法；干燥法；冷卻法.二、名詞解釋：1、離體繁殖(in vitipropagation)：微型繁殖(micropropagation)，指利用植物組織培養技術對外植體進行離體培養，使其在 短期內獲得遺傳性一致的大量再生植株的方法。是工廠化育苗的技術基礎。2、人工種子（artificial seeds）：亦稱體細胞種子，任何一種經人工種皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖體均可 稱之為人工種子。三、問答題：1、植物快繁的器官再生主要類型？短枝發生型；叢生芽發生型；不定芽發生型；胚狀體發生型；原球莖發生型2、植物快繁的程序。（1）無菌（或初代）培養的建立（2）繁殖體增殖（3）芽苗生根（4）小植株的移栽馴化3、人工種子的優點。（1）使自然條件下不易結實或種子昂貴的材料能快速繁殖和保存；（2）繁殖速度快；（3）為基因工程技術應用于生產提供橋梁；（4）固定雜種優勢；（5）提高植物抗逆性；（6）取代天然種子，節約糧食。三、問答題：1、植物脫毒的主要方法有哪些？其主要原理是什么？（1）莖尖培養脫毒：病毒在植物體內的分布并不均勻