1、激活血管內皮細胞乙酰膽堿作用靶標的抗血栓作用及其分子機制臨床147班一、提出問題二、做出假設三、設計實驗四、實驗結果五、得出結論六、交流討論 一、提出問題EC（內皮細胞）在剛提出之時，人們對EC功能的認識僅限于它襯在血管內壁及起物質交換的屏障的作用。隨著分子生物學等先進技術的應用，已證明，EC與血栓形成密切相關。生理狀態下，EC的非粘附的、抗凝的、纖溶的管腔內表面使其具有抗血栓形成特性。1980年Furchgott等在Nature上首此報道，在兔離體胸主動脈上，外源性給予Ach（乙酰膽堿）所產生的血管舒張反應依賴于完整內皮存在，提示血管內皮細胞上存在可被Ach激活的血管內皮細胞乙酰膽堿靶標。弗

2、奇哥特（Robert F.Furchgott）的發現研究 Ach 血管內表皮完整 血管擴張推測Ach 血管內皮細胞 新信使分子（EDRF） 血管平滑肌 血管舒張由此，弗奇哥特推測：內皮細胞在乙酰膽堿的作用下產生了一種新的信使分子，這種信使分子作用與平滑肌細胞，使血管平滑肌細胞舒張，從而擴大血管。 一、提出問題在角叉菜膠誘發的小鼠尾動脈血栓模型上，研究激活血管內皮細胞乙酰膽堿作用靶標對血栓形成的影響和可能的分子機制。實驗是在生理學研究的什么水平進行？1、細胞和分子水平2、器官和系統水平二、作出假設t-PA(組織型纖溶酶原激活物)血管內皮細胞ETA(乙酰膽堿作用靶標)PAI-1(纖溶酶原激活抑制劑

3、)PGI2(前列環素)NO(一氧化氮)TXA2(血栓素A2)引起平滑肌舒張抑制血小板的聚集抗血栓作用纖溶系統促進釋放促進釋放激活抑制釋放抑制釋放激活影響發揮三、設計實驗方法：1、比較既可激活血管內皮乙酰膽堿作用靶標,又可激活M 受體的檳榔堿和僅可激活M 受體的毛果蕓香堿對成栓率和血栓長度影響的差異。2、分析激活內皮乙酰膽堿作用靶標對血栓的影響;通過測定血小板最大聚集率;凝血酶原時間( PT) 、活化部分凝血活酶時間( KPTT) 和凝血酶時間( TT) ;血漿中組織型纖溶酶原激活物(t2PA) 的含量和纖溶酶原激活物抑制劑( PAI21) 的活性;血漿血栓素A2 ( TXA2) 和前列環素(

4、PGI2 ) 含量。四、實驗結果1、阿司匹林（Aspirin）、檳榔堿（Arecoline）、毛果云香堿（Pilo）對血栓形成的影響四、實驗結果檳榔堿對內皮細胞分泌的t-PA（組織型纖溶酶原激活物）含量的影響四、實驗結果檳榔堿對內皮細胞分泌的PAI-1（纖溶酶原激活抑制劑） 活性的影響四、實驗結果檳榔堿對TXA2（血栓素A2 ）生成量的影響四、實驗結果檳榔堿對PGI2（前列環素）生成量的影響該研究論文用哪些實驗方法？1、控制變量法2、等效替代法3、對照法五、得出結論1、檳榔堿在高劑量下，其抗血栓強度是阿司匹林的250500倍。2、毛果蕓香堿充分激活M受體后，仍無抗血栓形成作用。而檳榔堿既激活乙

5、酰膽堿靶標作用又激活M受體，因此,檳榔堿的抗血栓作用是激活血管內皮細胞乙酰膽堿靶標的結果,而不能用激活M 受體來解釋。3、檳榔堿可促進內皮細胞釋放PGI2 ,通過一些途徑抑制血栓形成。五、得出結論4、 檳榔堿可促進內皮細胞釋放t2PA , 抑制PAI21 的活性,通過一些環節發揮抗血栓作用。5、檳榔堿可通過上述途徑抑制血栓時TXA2 的生成,增加EC 釋放PGI2 ,從而發揮抗血栓作用。六、交流討論該研究論文的結果后對所學的生理學相關知識有哪些幫助?該研究論文通過什么信號轉導途徑開展研究？研究內容是在相關信號轉導途徑的哪個環節產生作用？生理學相關知識檳榔堿通過激活血管內皮細胞乙酰膽堿作用靶標而產生抗血栓作用，機制如下：1、促EC釋放PGI2等物質2、促EC釋放t-PA,抑制PAI-1的活性3、抑制EC合成TXA2生理學相關知識促EC釋放PGI2等物質作用機理：1、舒張血管2、抑制血小板聚集3、加快瘀滯的血流生理學相關知識促EC釋放t-PA,抑制PAI-1的活性激活纖溶系統類比：止血栓的溶解生理學相關知識抑制CE合成TXA21、抑制血管收縮2、抑制血小板聚集 化學門控通道依據：Ach乙酰膽堿與ETA（乙酰