1、絞股藍丹膠囊質量標準研究【關鍵詞】絞股藍丹膠囊；,制備工藝；,質量標準；,絞股藍總皂苷；,原兒茶醛；,薄層色譜法；,分光光度法摘要：目的介紹絞股藍丹膠囊的制備及成品的質量標準。方法以該制劑中絞股藍和丹參兩味主藥中的指標成分絞股藍總皂苷和丹參水溶性物質總酚酸類成分進展定性鑒別和定量測定。結果應用薄層色譜法定性分析，兩種色譜均別離明晰，重現性好；以分光光度法測定絞股藍總皂苷和丹參總酚酸類成分含量，方法穩定、可靠、實在可行。結論其定性、定量方法準確、專屬性強、重現性好，可供制定質量標準使用。關鍵詞：絞股藍丹膠囊；制備工藝；質量標準；絞股藍總皂苷；原兒茶醛；薄層色譜法；分光光度法絞股藍丹膠囊是我院根據

2、臨床需要和理論經歷，以補氣益氣和活血化瘀的中醫理論為根據，研制的由絞股藍、丹參、黃芪組成的中藥制劑。經藥理、藥效學研究，本膠囊有明顯抑制血栓形成1、抗自由基及保護腦缺血再灌注腦損傷的作用2。因此，對缺血性腦卒中有一定的預防和治療作用。為保證制劑的質量和臨床療效，筆者以方劑中君、臣二藥絞股藍和丹參中的絞股藍總皂苷和丹參水溶性物質總酚酸類成分為指標成分，進展定性鑒別和定量測定?，F報道如下。1器材1.1儀器與器材TU1901雙光束紫外可見反光光度計北京普析通用儀器，旋轉蒸發儀德國HEidlph)，恒溫水浴，層析柱1.015)，蠕動泵。1.2試劑與試藥人參皂苷Rb1和原兒茶醛標準品均購自中國藥品生物制

3、品檢定所，D101大孔樹脂安徽三星樹脂，薄層層析硅膠青島海洋化工，香草醛SIGA)，高氯酸、冰乙酸、NaN2、Al(N3)3等均為分析純試劑。2藥物及制備2.1處方組成絞股藍、丹參、黃芪。2.2藥材來源絞股藍為葫蘆科植物絞股藍的枯燥全草，由湖北神龍架林區科技開發公司提供；丹參為唇形科鼠尾草屬植物枯燥根,丹參飲片購自河北安國藥材市場；黃芪為豆科植物,以枯燥根入藥,黃芪飲片為內蒙黃芪，購自河北安國藥材市常2.3制法將3味藥用水浸泡2h，加熱煎煮3次。第1次加10倍量水，煎煮1h；第2次加8倍量水，煎煮45in；第3次加6倍量水，煎煮30in。每次煎煮后過濾，合并濾液，加熱濃縮至相對密度1.101.

4、20g/l，進展噴霧枯燥成粉劑。加輔料后混勻，充填于1號膠囊內，包裝0.3g/粒，密封包裝。3絞股藍的定性鑒別和含量測定35，9以絞股藍中的絞股藍總皂苷為指標成分進展定性鑒別和含量測定。以人參皂苷Rb1為標準，采用薄層色譜法進展定性分析，以分光光度法測定進展定量分析。3.1樣品制備3.1.1絞股藍對照藥材樣品制備精細稱取絞股藍生藥粉2.0g，置帶塞錐形瓶中，參加乙醚50l振搖脫脂脫色，棄乙醚，藥渣揮干；加水飽和正丁醇100l，萃取密塞，充分振搖，超聲波處理30in，放置過夜。濾紙過濾，棄初濾液，精細汲取續濾液50l，置旋轉蒸發儀減壓回收正丁醇。殘留物加3l蒸餾水溶解后，將樣品上已預處理好的D1

5、01大孔樹脂柱內徑1.0高15。先用蒸餾水約100l洗柱，再用20%乙醇去雜洗滌，洗至流出液無色約100l棄去，最后用75%乙醇洗脫流速1l/in,充分洗脫。搜集洗脫液約60l，減壓濃縮洗脫液，揮干，回收乙醇。殘渣加甲醇溶解，轉移定容至2l容量瓶中。4冰箱保存，待用。3.1.2供試品制備取本品10粒，去膠囊取出藥粉。倒入帶塞錐形瓶中，參加甲醇浸提2次30l2，密塞，充分振搖，超聲波處理30in合并浸提液，濾紙過濾，置旋轉蒸發儀減壓回收甲醇；殘留物加水飽和正丁醇60l溶解，用正丁醇飽和過的氫氧化鈉溶液洗2次30l2，密塞，放置過夜。棄氫氧化鈉溶液，精細汲取正丁醇萃取液30l，減壓回收正丁醇；殘留

6、物加3l蒸餾水溶解后，將樣品上已預處理好的D101大孔樹脂柱內徑1.0高15。先用蒸餾水約100l洗柱，再用20%乙醇去雜洗滌，洗至流出液無色約100l棄去，最后用75%乙醇洗脫，流速1l/in,充分洗脫。搜集洗脫液約60l。減壓濃縮洗脫液，揮干，回收乙醇。殘渣加甲醇溶解，轉移定容至2l容量瓶中。4冰箱保存，待用。3.1.3人參皂苷Rb1對照品配制精稱人參皂苷Rb110.0g，加甲醇溶解。定容至5l容量瓶中。配制成2g/l標準液。3.2薄層層析定性分析汲取上述3種溶液各5l。分別點于同一硅膠G0.5%Na薄層板上，以正丁醇醋酸乙酯水415飽和后取上層為展開劑，展開。取出后晾干。噴以10%硫酸乙

7、醇溶液顯色劑，晾干。在105加熱至斑點顯色。結果本供試品色譜中，與標準對照品和對照藥材在相應Rf值位置顯一樣的紫紅色斑點。與對照藥材色譜的其他位置斑點也完全一樣。結果見圖1。于365n紫外燈下觀察，在相應位置有熒光斑點。3.3絞股藍總皂苷含量測定3.3.1標準曲線制備精細汲取上述人參皂苷Rb12g/l對照溶液0，25，50，100，150，200l，于具塞試管中。用熱氣揮干溶劑，各加5%香草醛冰醋酸溶液新穎配制0.2l，高氯酸0.8l，混勻。密塞，置60水浴中保溫15in，取出后立即放入冰水浴中冷卻。再加冰醋酸5l，混勻。于分光光度計550n處測定吸光值。所測含量在0400g范圍內具有良好線性

8、關系。得回歸方程y=0.0035x0.0399，r=0.9988。3.3.2供試品含量測定準確汲取上述精制供試品及生藥對照品溶液各20l，置具塞試管內，以下操作同標準曲線，于550n處測定其吸光值，代入回歸方程，求得各樣品絞股藍總皂苷含量。轉貼于論文聯盟.ll.3.4含量測定方法學考察3.4.1穩定性實驗將上述3.3.2項內供試品于550n處每隔10in測1次吸收值，結果見表1。從表1中可看出，在60in內吸收值僅下降1%，說明本測定方法穩定性良好。3.4.2回收實驗精細稱取含量的絞股藍丹藥粉5份，每份1.0g，倒入帶塞錐形瓶中，每瓶中各參加人參皂苷Rb12g/l標準溶液0.5l,其余操作同上

9、述供試品制備3.1.2及含量測定3.3.2，計算加樣回收率。結果見表2。4丹參的定性鑒別和含量測定6，7以丹參水溶性物質總酚酸類成分為指標成分，以原兒茶醛為標準，采用薄層色譜法進展定性分析，以分光光度法測定進展定量分析。表1穩定性實驗結果略表2回收實驗結果略4.1樣品制備4.1.1藥材對照品樣品制備稱取丹參生藥粉2.0g，加水120l浸泡2h，于100水浴中熱提2h；冷卻靜置后,用鹽酸調pH至2，充分振搖，放置過夜。濾紙過濾，取半量濾液至帶塞燒瓶中，加50l水飽和乙醚萃取密塞，充分振搖，超聲波處理30in，放置過夜。精細量取乙醚萃取液25l，置蒸發皿中蒸干，殘渣加雙蒸水溶解，轉移至容量瓶中定容

10、至5l，4保存，用于定量測定；再汲取乙醚萃取液16l(因分液面表層不易汲取)，置蒸發皿中蒸干，殘渣加0.8l甲醇溶解。4保存，用于薄層層析。4.1.2供試品樣品制備取絞股藍丹膠囊10粒，翻開膠囊取出藥粉，加水100l用鹽酸調pH至2，浸泡。中間充分振搖，放置過夜。用濾紙過濾，棄初濾液。精細汲取續濾液50l置帶塞燒瓶中，加水飽和乙醚50l萃齲其余操作同上。4.2薄層層析定性分析4.2.1TL標準液配制精稱原兒茶醛5.0g，加甲醇定容至5l,制成1g/l的溶液。作為標準對照品。4.2.2TL分析汲取上述3種溶液標準對照品，生藥對照品及本品樣品制備液各5l。分別點于同一硅膠G0.5%Na薄層板上，以

11、氯仿醋酸乙酯苯甲酸2.4210.6為展開劑，展開。展距15，取出晾干，噴以2%三氯化鐵1%鐵氰化鉀11混合溶液顯色。結果：供試品色譜中在與對照藥材和對照品色譜相應位置上顯一樣的普魯士藍色斑點。結果見圖12。圖1自左至右：標準Rb1、絞股藍生藥材對照品、絞股藍丹樣品略圖2自左至右：原兒茶醛、丹參生藥材對照品及絞股藍丹樣品略4.3丹參中水溶性酚酸類成分含量測定采用鄰苯二羥基絡合顯色法進展分光光度法測定。4.3.1標準液配制精細稱取原兒茶醛3，4二羥基苯甲醛5.0g，加水溶解，并稀釋至50l容量瓶，制成0.1g/l溶液，作為標準對照品。4.3.2標準曲線制備精細汲取原兒茶醛標準液0.1g/l0，0.

12、2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0l于試管中，加水補至2l，分別參加5%NaN20.5l,混勻；室溫放置5in，參加10%Al(N3)30.5l，混勻，放置5in；各管再參加0.5l/LNaH溶液5.0l混勻；室溫放置10in后，以0管為空白，在分光光度計520n處測得吸光值。以吸光值為縱坐標，濃度為橫坐標，得回歸方程為Y=0.0041X0.0030,r=0.9999。結果，原兒茶醛含量在0200g間有良好線性關系。4.3.3丹參生藥材及本供試品含量測定將已制備的丹參生藥及本品樣品制備液，各精細汲取0.2l，按標準曲線法操作，于520n處讀吸光值n=2。取平均值，根據回歸方程式，計算出

13、丹參生藥及本品中丹參水溶性酚酸類成分含量。4.3.4穩定性實驗將上述項內供試品于520n處每隔10in測1次吸收值，結果在60in內吸收值下降1%，說明本測定方法穩定性良好。5討論5.1絞股藍含有10余種皂苷，它們具有與人參皂苷相似的四環三萜的根本構造，其中4種與人參皂苷Rb1，Rb2，Rd及F2構造一樣9。因此，選定以人參皂苷Rb1為標準品，參照人參皂苷的檢測方法，對制劑中絞股藍總皂苷進展定性鑒別和含量測定，作為質控標準。5.2由于本制劑同時含絞股藍與黃芪，黃芪甲苷對絞股藍總皂苷的含量測定有干擾。參考文獻9，用氫氧化鈉溶液洗滌和大孔樹脂D101凈化，根本消除了黃芪中皂苷的干擾。5.3丹參的主

14、要有效成分包括脂溶性成分和水溶性成分兩局部。前者以丹參酮A為代表的醌類化合物，具有明顯抗炎作用；后者以丹參素、原兒茶醛為代表的酚酸類成分，均為鄰苯二羥基類化合物。本制劑取丹參水溶性成分，因此，選用原兒茶醛作為指標成分，進展定性、定量測定。采用鄰苯二羥基化合物顯色法的可見分光光度法7進展含量測定，方法簡單、準確，干擾因素少，作為質量標準設定是可行的。5.4在以原兒茶醛為標準品進展TL時，為確保色譜別離明晰、重現性好，對層析時的溫度、相對濕度、展開劑和顯色劑進展了多種探究。結果發現，室內相對濕度對色譜質量影響明顯，當室內相對濕度60%時，已活化時間較長的硅膠板，臨用前最好再次加熱活化，以保證層析質

15、量。關于展開劑，試用多種組合，結果以氯仿醋酸乙酯苯甲酸2.4210.66配制的展開劑別離效果最好。在顯色劑的選用方面，有關文獻均未提及使用顯色劑，但展開后色譜不夠明晰，采用鐵氰化鉀三氯化鐵顯色法10，根據酚羥基的復原性，使鐵氰化鉀三氯化鐵試液生成普魯士藍沉淀的原理，用于原兒茶醛類TL的顯色。顯色效果極好，靈敏度高，重復性好，值得推廣。參考文獻：1池明宇，張澄波，鄭貴元，等.絞股藍丹對大鼠實驗性體內血栓形成的抑制作用研究J.實用中醫藥雜志，2022，19(11)：563.2池明宇，梅學文，鄭貴元，等.絞股藍丹對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的腦保護作用J.中醫研究，2022，16(4)：18.3國家藥典委員會.中國藥典，部S.北京：化學工業出版社，2022：附錄VIB，7.4田其學，唐正平.絞股藍口服液中絞股藍總苷的含量測定J.湖南中醫雜志，2001，173：52.5馬筱荷，吳迎輝.絞股藍袋泡劑工藝條件優選及質量控制J.中國中藥雜志，1992，1712：733.6