1、血小板活化標(biāo)志物GPVI、CD62P檢測(cè)在缺血性腦卒中的應(yīng)用價(jià)值龔道元1 陳家強(qiáng)2 王曉娟1*（1佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院 2佛山市第三人民醫(yī)院 廣東 佛山市 528000）通信作者：王曉娟，免疫學(xué)教授，E-mail：gdy281468721【摘要】 目的：探討缺血性腦卒中治療 HYPERLINK /qianhouxue_10423/ o 前后血 醫(yī)學(xué)百科 t _blank 前后血小板活化標(biāo)記物GPVI、CD62P的表達(dá)及其臨床應(yīng)用價(jià)值。方法：采用流式 HYPERLINK /xibao_40744/ o 細(xì)胞 醫(yī)學(xué)百科 t _blank 細(xì)胞儀（FCM）檢測(cè)治療 HYPERLINK /qianh

2、ou_10427/ o 前后 醫(yī)學(xué)百科 t _blank 前后GPVI和CD62P的表達(dá)。結(jié)果：缺血性腦卒中患者治療前血小板活化標(biāo)志物GPVI和CD62P分別為20.52士5.80和47.6514.27，較正常對(duì)照組GPVI（6.18士1.12）、CD62P（8.432.16）有顯著升高（P0.01）；治療后GPVI（15.85士4.37）、CD62P（28.188.27）較治療前有顯著下降（P0.01），但仍高于正常對(duì)照組（P0.01）。結(jié)論：血小板活化在缺血性腦卒中的發(fā)病過程中起重要作用，其標(biāo)志物GPVI、CD62P對(duì)缺血性腦卒中患者的診斷具有重要價(jià)值，為臨床癥狀緩解后長(zhǎng)期 HYPERLI

3、NK /yaowu_3979/ o 藥物 醫(yī)學(xué)百科 t _blank 藥物預(yù)防提供了理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：缺血性腦卒中；血小板糖蛋白；CD62P HYPERLINK /Cl_47190/ o Cl 醫(yī)學(xué)百科 t _blank Clinical significane on detection of platelet activation biomarkers GPVI and CD62P in patients with ischemic stroke【Abstract】 Objective:To explore expression of platelet activation biomarke

4、rs GPVI，CD62P and clinical significance in ischemic stroke before and after treatment.Methods:Detection of GPVI and CD62P was used by technique of flow cytometry（FCM）.Results:Before treatment the platelet activation biomarkers GPVI and CD62P in patients with ischemic stroke were 20.52士5.80 and 47.65

5、14.27 respectively,which were significantly higher than normal control GPVI（6.18士1.12）,CD62P（8.432.16）(P0.01）.After treatment GPVI（15.85士4.37）and CD62P（28.188.27）declined significantly than before treatment（P0.01），but also higher than normal control（P0.05)。1.2 樣本采集及制備 患者及正常對(duì)照均用 HYPERLINK /gouyuansua

6、nna_30553/ o 枸櫞酸鈉 醫(yī)學(xué)百科 t _blank 枸櫞酸鈉抗凝采血管采集血樣。不扎 HYPERLINK /zhixue_5426/ o 止血 醫(yī)學(xué)百科 t _blank 止血帶，棄去前2ml混有組織液的血液，將剩余樣本用 HYPERLINK /gouyuansuan_24199/ o 枸櫞酸 醫(yī)學(xué)百科 t _blank 枸櫞酸鈉抗凝，輕輕混勻，備用。缺血性腦卒中患者在入院期間經(jīng)系統(tǒng)治療，臨床癥狀明顯緩解后再取血進(jìn)行測(cè)定。1.3 血小板GPVI和CD62P測(cè)定：1.3.1免疫熒光標(biāo)記: 取兩只試管一只加入5l全血，再加入血小板陰性對(duì)照IgG1-FITC、IgM-PE和CD61 Pe

7、rCP各10l；另一只試管加入5l 全血及GPVI-FITC、CD62P-PE和CD61 PerCP McAb各lOl，混勻后室溫避光孵育30分鐘,加入 FCM檢測(cè):樣品測(cè)試前,用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球調(diào)整熒光檢測(cè)CV值在2以下,并設(shè)定血小板光散射的最佳閾值,消除其他細(xì)胞和噪聲干擾,熒光檢測(cè)經(jīng)對(duì)數(shù)放大，收集300001.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)以s表示，資料比較采用t檢驗(yàn)，以P0.05為差異有顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。2結(jié)果2.1 病例組血小板GPVI含量的變化缺血性腦卒中患者組與正常對(duì)照組血小板表達(dá)GPVI的量見表1,病例組血小板表面GPVI的表達(dá)為20.52士5.80,而正常對(duì)照組為6.18士1.12, 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

8、顯示,二者之間差別具有顯著性(P0.01)。表1 病例組與對(duì)照組血小板表達(dá)GPVI的量比較 ( 士s)分 組 例數(shù) GPVI 病例組 50 20.525.80 對(duì)照組 50 6.181.12 p* 0.01 p*:與對(duì)照組相比2.2 病例組血小板CD62P含量的變化缺血性腦卒中患者組與正常對(duì)照組血小板表達(dá)CD62P的量見表2,病例組血小板表面CD62P的表達(dá)為47.6514.27,而正常對(duì)照組為8.432.16, 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,二者之間差別具有顯著性(P0.01)。表2 病例組與對(duì)照組血小板表達(dá)CD62P的量比較 (士s)分 組 例數(shù) CD62P 病例組 50 47.6514.27 對(duì)照組

9、50 8.432.16 p* 0.01 p*:與對(duì)照組相比2.3 治療前后血小板GPVI含量的變化藥物治療后較治療前血小板GPVI含量有明顯下降（P0.01），但仍高于正常對(duì)照（P0.01），見表3。表3 治療前后血小板表達(dá)GPVI的量比較 ( 士s)分 組 例數(shù) GPVI 治療前 50 20.525.80 治療后 50 15.854.37 對(duì)照組 50 6.181.12 2.4治療前后血小板CD62P含量的變化藥物治療后較治療前血小板CD62P含量有明顯下降（P0.01），但仍高于正常對(duì)照（P0.01），見表4。表4 治療前后血小板表達(dá)CD62P的量比較 ( 士s)分 組 例數(shù) CD62P

10、治療前 50 47.6514.27 治療后 50 28.188.27 對(duì)照組 50 8.432.16 3 討論血栓性腦血管疾病與 HYPERLINK /dongmai_16656/ o 動(dòng)脈 醫(yī)學(xué)百科 t _blank 動(dòng)脈硬化的發(fā)生密切相關(guān)，由于動(dòng)脈硬化的發(fā)生，使血管 HYPERLINK /neipi_142/ o 內(nèi)皮 醫(yī)學(xué)百科 t _blank 內(nèi)皮細(xì)胞損傷，膠原暴露，促使血小板粘附，同時(shí)腦血管內(nèi)的脂質(zhì)斑塊造成局部血流動(dòng)力學(xué)改變，產(chǎn)生高切變力激活血小板，而且脂質(zhì)斑塊易發(fā)生潰破，脂質(zhì)暴露于血液也可引起血小板活化。血小板活化后，顆粒膜蛋白在質(zhì)膜上高水平表達(dá)，引起GPVI、GPb/a、CD62

11、P的顯著性改變。血小板GP是新發(fā)現(xiàn)的膠原受體之一。GPVI在介導(dǎo)血小板與膠原黏附、快速信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、血小板活化及促凝活性表達(dá)等復(fù)雜過程中處中心位置，抑制GPVI功能可在體外高切應(yīng)力下顯著抑制膠原誘導(dǎo)的血小板黏附、聚集和血小板血栓形成1。近年來，對(duì)血小板及膠原相互做用以及在啟動(dòng)止血及血栓做用的研究取得很大進(jìn)展。血小板活化后，顆粒膜蛋白在質(zhì)膜上高水平表達(dá)，引起血小板表面很多膜分子的顯著性改變，GPVI是血小板表面的表達(dá)一種血小板活化的特異性標(biāo)志物之一2。CD62P是一種跨膜糖蛋白，存在于內(nèi)皮細(xì)胞Welbel Palade小體和血小板顆粒中。當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞、血小板受組織胺、凝血酶等刺激后，胞漿內(nèi)Welbel

12、 Palade小體和顆粒與胞膜融合，在細(xì)胞表面迅速表達(dá)CD62P。目前認(rèn)為,正常人血液循環(huán)中CD62P有低水平表達(dá)是機(jī)體為維持止血-纖溶系統(tǒng)功能平衡而存在的生理現(xiàn)象。血小板表面CD62P是目前反映血小板活化最具有特異性的分子標(biāo)記物之一,被認(rèn)為是反映血小板活化的“金標(biāo)準(zhǔn)”。研究表明CD62P可為血小板活化程度及血栓形成的特異性標(biāo)志3。本研究運(yùn)用FCM測(cè)定缺血性腦卒中患者血小板活化標(biāo)志物GPVI和CD62P，結(jié)果為GPVI和CD62P的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組，表明在腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展過程中血小板活化起重要促進(jìn)作用。治療后臨床癥狀緩解，血小板活化水平與治療前相比明顯降低，但仍高于正常對(duì)照組，其機(jī)制

13、是由于動(dòng)脈粥樣斑塊的形成，造成促使血小板活化的因素?zé)o法逆轉(zhuǎn)，使得血小板長(zhǎng)期處于活化狀態(tài)，臨床抗凝治療能一定程度的降低血小板的活化，但不能完全消除致活化因素的作用，因此需要長(zhǎng)期抗凝治療預(yù)防血栓形成。血小板活化作為腦血管內(nèi)血栓形成和梗塞的早期因素4,5，準(zhǔn)確測(cè)定其活化標(biāo)志物GPVI和CD62P對(duì)缺血性腦卒中疾病發(fā)生的診斷、預(yù)防、治療效果、監(jiān)測(cè)都有著重要意義，采用FCM和熒光標(biāo)記的活化血小板單克隆抗體可直接敏感的反映病理狀態(tài)下人體內(nèi)血小板活化的程度，為臨床癥狀緩解后進(jìn)一步抗血小板治療提供了理論依據(jù)。參考文獻(xiàn)1 Jung SM, Moroi M. HYPERLINK /pubmed/19065783?

14、ordinalpos=54&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DefaultReportPanel.Pubmed_RVDocSum Platelet glycoprotein VI.Adv Exp Med Biol,2008,640:53-63.2 Best D,Senis YA,Jarvis GE,et a1.GPVI levels in platelets:relationship to platelet function at high shear.Blood,2003,102:2811-2818.3 Reiner A P,Kumar P M,Schwartz S M,et al.Genetic varitants of platelet glycoprotein receptors and risk of stroke in young women.Stroke,2000,31:1628-1633.4 Lar