1、精品文檔水質五日生化需氧量（BOD5）的測定稀釋與接種法HJ505-2009.適用范圍本方法適用于地表水、工業廢水和生活污水中五日生化需氧量（ BOD5）的測定。本方法的檢出限為0.5mg/L,方法的測定下限為2 mg/L ,非稀釋法和非稀釋接種法的測 定上限為6mg/L ,稀釋與接種法的測定上限為 6000mg/L。.術語和定義五日生化需氧量是指在規定條件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物質，特別是分解有機物所進行的生物化學過程中消耗溶解氧的量。條件為（201） C培養5天，分別測定樣品培養前后的溶解氧，兩者之差即為BOD5值，以氧的毫克/升表示。.方法原理將水樣充滿完全密閉的溶解氧瓶中，

2、在（20+） C的暗處培養5d4h或（2+5） d4 先在04 c的暗處培養2d,接著在（20+） C的暗處培養5d,即培養（2+5） d,分別測定培養 前后水樣中溶解氧的質量濃度，由培養前后溶解氧的質量濃度之差，計算每升樣品消耗的溶解氧量。若樣品中的有機物含量較多，BOD5的質量濃度大于6mg/L,樣品需適當稀釋后測定；對不含或含微生物少的工業廢水，如酸性廢水、堿性廢水、高溫廢水、冷凍保存的廢水或經過氯化出力等的廢水，在測定BOD5時應進行接種，以引進能分解廢水中有機物的微生物。當廢水中存在難以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有機物或含有劇毒物質 是，應將馴化后的微生物引入水樣中進

3、行接種。 4.試劑和材料分析時，只采用公認的分析純試劑和蒸儲水或同等純度的水（在全玻璃裝置中蒸儲的水或去離子水），水中含銅不應高于0.01mg/L,并不應有氯、氯胺、苛性堿、有機物和酸類。接種液取POLYSEED膠囊1粒溶于裝有250ml稀釋水的燒杯中。將燒杯置于磁力攪拌器上攪 拌曝氣1h。曝氣結束，放置0.5h后傾出全部清液，將該清液置于磁力攪拌器上攪拌，此接種 液最多能放置二天。其它獲得接種液的途徑見如下。未受工業廢水污染的生活污水：化學需氧量不大于300mg/L ,總有機碳不大于100 mg/L;含有城鎮污水的河水或湖水；污水處理廠的出水；分析含有難降解物質的工業廢水時，在其排污口下游適

4、當處取水樣作為廢水的馴化接 種液。也可取中和或經適當稀釋后的廢水進行連續曝氣，每天加入少量該種廢水，同時加入少量生活污水，使適應該種廢水的微生物大量繁殖。當水中出現大量的絮狀物時，表明微生物已繁殖，可用作接種液。一般馴化過程需38天。鹽溶液磷酸鹽緩沖溶液將8.5g磷酸二氫鉀（KH 2PO4）、16.6g磷酸氫二鉀（K2HP04 3H 2O）、17.7g七水合磷 酸氫二鈉（Na2HPO4）和1.7g氯化鏤（NH4Cl）溶于約500ml水中，稀釋至1000ml并混合均 勻。此緩沖溶液的pH應為7.2。 4.2.2七水合硫酸鎂將22.5g的七水合硫酸鎂（MgS04 7H2。）溶于水中，稀釋至1000

5、ml并混合均勻。氯化鈣將27.5g的無水氯化鈣（CaCl2）溶于水，稀釋至1000ml并混合均勻。六水合氯化鐵將0.25g六水合氯化鐵（FeC13 6H2O）溶解于水中，稀釋至 1000ml并混合均勻。精品文檔精品文檔以上四種鹽溶液在04c可穩定保存6個月。如有沉淀應棄去。稀釋水取上述四種鹽溶液（4.2.1、4.2.2、4.2.3和4.2.4）各1 ml,加入約1L水中，然后曝氣2小時以 上，混合均勻，將此溶液置于 20c下恒溫，確保溶解氧濃度不低于 8mg/L。稀釋水的BOD 5 值不得超過0.5mg/L。接種稀釋水：根據接種液的來源不同，每升稀釋水（4.3）中加入適量接種液（4.1）:城市

6、污水和污水處理廠出水加110ml,河水或湖水加10700ml ,將接種液稀釋水存放在 （201） C的環境中，當天配置當天使用。接種的稀釋水pH值為7.2, BOD5應小于1.5mg/L。鹽酸溶液，c（HCL）=0.5mg/L :將40ml濃鹽酸溶于水中，稀釋至 1000ml。氫氧化鈉溶液，c（NaOH）=0.5mol/L :將20克氫氧化鈉溶于水中，稀釋至 1000ml。亞硫酸鈉溶液（0.025mol/L）：將1.575g亞硫酸鈉溶于水中，稀釋至1000ml。此溶液需現用現配。葡萄糖-谷氨酸標準溶液：將葡萄糖（C6H12。6）和谷氨酸（HOOCH-CH 2-CH2-CHNH 2-COOH ,

7、優級純）在130c干燥1h,各稱取150mg溶于水中，在 1000ml容量瓶中稀釋至標線。此溶液的BOD5為（210 20） mg/L ,現用現配。該溶液也可少量冷凍保存，融化后立即使用。丙烯基硫月尿硝化抑制劑（1.0g/L）溶解0.2g丙烯基硫月尿于200ml水中，4c保存，可穩定保存14天。乙酸溶液，1 + 1碘化鉀溶液（100g/L）,將10g碘化鉀溶于水中，稀釋至 100ml。淀粉溶液（5g/L）:將0.5g淀粉溶于水中，稀釋至 100ml。.儀器和設備培養瓶細口瓶的容量在200ml之間，帶有磨口玻璃塞，并具有供水封用的鐘形口，最好是直 肩的。培養箱：控制20 C。3溶解氧測定儀：YS

8、I-58。.干擾水樣的pH若超出6.57.5范圍時，可用鹽酸或氫氧化鈉稀溶液調節pH近于7,但不要超過水木體積的0.5%。若水樣的酸度或堿度很高，可改用高濃度的酸或堿進行中和。水樣中含有重金屬等有毒物質時，可使用經馴化的微生物接種液的稀釋水進行稀釋，或 提高稀釋倍數以減少毒物的濃度。含有少量游離氯的水樣，一般放置1 2h,游離氯即可消失。對在短時間內不能消失的余氯，可加入適量亞硫酸鈉溶液去除樣品中存在的余氯和結合氯，加入的亞硫酸鈉溶液的量由下述方法確定。取已中和的水樣100ml,加入乙酸溶液10ml、碘化鉀溶液1ml,混勻，暗處靜置 5分鐘。用亞硫酸鈉溶液滴定析出的碘至淡黃色，加入 1ml淀粉

9、溶液呈藍色。再繼續滴定至藍色剛 剛褪去，即為終點，記錄所用亞硫酸鈉溶液體積，由亞硫酸鈉溶液消耗的體積，計算出水樣中應加亞硫酸鈉溶液的體積。一般污水處理廠的水樣，應經過硝化池，含有大量硝化菌，可在每升稀釋樣品中加入 2ml濃度為1.0g/L的烯丙基硫月尿（ATU） （ C4H8N2S）溶液以去除。從水溫較低的水域或富營養的湖泊忠采集的水樣，可遇到含有過飽和溶解氧，此時應將 水樣迅速升溫至20 c左右，在不使滿瓶的情況下，充分振搖，并時時開塞放氣，以趕出過飽和的溶解氧。從水溫較高的水域或廢水排放口取得的水樣，則應迅速使其冷卻至20c左右，精品文檔精品文檔 并充分振搖，使與空氣中氧分壓近平衡。一些氣

10、體和蒸汽如氯、二氧化硫、硫化氫、氨、氟、澳、碘能影響氧電極的測定，從而 使測定含該類物質的水樣的 BOD會形成五天前、后溶解氧倒大，此類干擾無法克服。.樣品采集與保存樣品需充滿并密封于瓶中，置于25c保存到進行分析時。一般應在采樣后6h之內進行檢驗。若需遠距離轉運，在任何情況下貯存皆不得超過24ho試樣的制備 7.2.1 pH值調節若樣品或稀釋后樣品pH值不在6-8范圍內，應用鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液調節其pH值至6-8。余氯和結合氯的去除若樣品中含有少量余氯，一般在采樣后放置1-2h,游離氯即可消失。對在短時間內不能消失的余氯，可加入適量亞硫酸鈉溶液去除樣品中存在的余氯和結合氯。樣品均質化含有

11、大量顆粒物、需要較大稀釋信數的樣品或經冷凍保存的樣品，測定前均需將樣品攪拌均勻。樣品中有藻類若樣品中有大量藻類存在，BOD:的測定結果會偏高。當分析結果精度要求較高時，測定前應用濾孔為1.6科血勺濾膜過濾，檢測報告中注明濾膜濾孔的大小。6.2.5含鹽量低的樣品若樣品含鹽量低，非稀釋樣品的電導率小于125忘/cm時，需加入適量相同體積的四種鹽溶液，使樣品白電導率大于125立/cm。.分析步驟樣品的測定取樣不經稀釋水樣（不接種）如遇到溶解氧含量較高，有機物含量較少的地表水時，可直接將其裝滿于培養瓶中待測。 取樣時注意不可搖動水樣，取上層清液。稀釋水樣稀釋倍數的確定：根據實踐經驗，提出下述計算方法，

12、供稀釋時參考。地表水（不接種）：由測得的高鎰酸鹽指數與一定的系數相乘，即求得稀釋倍數，見下表。高鎰酸鹽指數（mg/L ）系數200.5, 0.7, 1.0工業廢水：由重銘酸鉀法測得的 COD值來確定。稀釋倍數見下表。當不能正確的選擇稀釋 倍數時，一個樣品做23個/、同的稀釋倍數。BOD5的預估值mg/L稀釋倍數6122103052060104012020精品文檔精品文檔10030050200600100400120020010003000500200060001000若試樣中有微生物毒性物質， 應配制幾個不同稀釋倍數的試樣， 選擇與稀釋倍數無關的結果, 并取其平均值。試樣測定結果與稀釋倍數的關

13、系確定如下：當分析結果精度要求較高或存在微生物毒性物質時，一個樣品要做2個以上不同的稀釋倍數，每個試樣每個稀釋倍數做平行雙樣同時進行培養。測定培養過程中每瓶試樣氧的消耗量，并畫出氧消耗量對每一稀釋倍數試樣中原樣品的體積曲線。若此曲線呈線性，則此試樣中不含有任何抑制微生物的物質，即樣品的測定結果與稀釋倍數無關；若曲線僅在低濃度內呈線性，取線性范圍內稀釋比的試樣測定結果計算平均 BOD5 值。將水樣振搖均勻，根據稀釋倍數確定取樣體積。每個樣品中加入2ml接種液，用虹吸法加稀釋水至瓶頸處待測。測定(待測樣品應盡快測定)將電極置于加滿稀釋水的培養瓶中。開啟電極上的攪拌開關，即可測定水樣中溶解氧。測定順

14、序為：空白 一標準樣品一樣品。待顯示的讀數穩定后，該讀數為水樣中的溶解氧值。 測定完畢，旋緊培養瓶塞，確保瓶口有封瓶水，蓋上瓶蓋。培養將培養瓶放于培養箱中， 并在暗中放置5天。達到需要培養的5天時間時，取出培養瓶。5天后溶解氧測定測定剩余溶解氧值，測定順序同8.1.2空白試驗在培養瓶中加入2ml接種液，加稀釋水滿瓶后待測。本試驗同樣品同時進行，其 BOD5 不能大于1.5mg/L。.結果計算被測定溶液若滿足以下條件，則能獲得可靠的測定結果。培養5天后：剩余 DO 2mg/L ;消耗 DO2mg/L。若不能滿足以上條件，一般應舍掉該組結果。9.2計算不經稀釋接種直接培養的水樣BOD5 ( mg/

15、L) =6162式中：C-水樣在培養前的溶解氧濃度，mg/L ;精品文檔精品文檔 TOC o 1-5 h z C2-水樣經5天培養后，剩余溶解氧濃度，mg/Lo經稀釋接種后培養的水樣式中：Bi-稀釋水在培養前的溶解氧，mg/L;B2-稀釋水在培養后的溶解氧，mg/L;fi-稀釋水在培養液中所占比例；f2-水樣在培養液中所占比例。若有幾種稀釋比所得數據皆符合9.1所要求的條件，則幾種稀釋比所得結果皆有效，以其平均值表示檢測結果。.質量保證和質量控制儀器設備測定要在儀器的有效鑒定周期內進行，以保證檢出限、靈敏度、定量測定范圍滿足方法要求。定期進行期間核查報告，以保證測量結果的準確度、精密度等指標符

16、合計量部門要求。實驗環境以上過程須在恒溫狀態下完成，實驗室室內溫度應控制在201C范圍內。方法檢出限在方法正式應用前要按照 環境監測分析方法標準制訂技術導則（HJ/T168）中8.2.1的規定進行方法撿出限的測定，測定值不能大于方法給定的值。空白實驗空白樣品分試劑空白和全程空白，全程空白樣品的濃度測定值不能大于方法檢出限，而且平行雙份測定值的相對差值不應大于50%,每批樣品最少要有2個空白樣。平行樣每批樣品要有10%的平行樣測定結果， 其相對偏差的計算參照 地表水和污水監測技術 規范（HJ/T91-2002） 10.5.2的公式，控制指標式樣品含量和基體不同一般為10%30%。標準樣品在兩個取

17、好標準樣品白培養瓶中各加入2ml接種液，加稀釋水滿瓶后測定。得到 BOD5應在該標準樣品批號范圍之內，否則，應檢查接種稀釋水是否適用以及并應檢查分析人員的技術。本試驗空白與試驗樣品同時進行。數據處理數據的整理和修約及異常值的判斷和處理等按照水和廢水監測分析方法（第四版） 的相關內容進行。.精密度和準確度非稀釋法實驗室間的重現性標準偏差為0.100.22mg/L ,再現性標準偏差為0.260.85mg/L。稀釋法和稀釋接種法的對比測定結果重現性標準偏差為11mg/L ,再現性標準偏差為3.722mg/L。.注意事項水中有機物的生物氧化過程，可分為二個階段。第一階段為有機物中的碳和氫氧化生 成二氧化碳和水，此階段稱為碳化階段。第二階段為含氮物質及部分氨氧化為亞硝酸鹽及硝 酸鹽，稱為硝化階段。一般測定水樣BOD5時，硝化作用很不顯著或根本不發生硝化作用。玻璃器皿（培養瓶）應徹底洗凈。先用自來水和蒸儲水清洗三遍，再將其放入超聲波 清洗器中徹底清洗1h。精品文檔精品文檔在兩個或三個稀釋比的樣品中，凡消耗溶解氧大于2mg/L和剩余溶解氧大于2mg/L時,計算結果時，應取其平均值。若剩余的溶解氧小于1 mg/L,甚至為零時，應加大稀釋比。溶解氧消耗量