1、課題2土壤中分解尿素細菌分離與計數土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第1頁土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第2頁【自主預習】一、研究培養基對微生物選擇作用1.篩選菌株：(1)自然界中目標菌株篩選。原理：依據目標菌對_要求，到對應環境中去尋找。生存環境土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第3頁實例：能產生耐高溫TaqDNA聚合酶_就是從熱泉中篩選出來。(2)試驗室中目標菌株篩選。原理：人為提供有利于_生長條件(包含營養、溫度、pH等)，同時_其它微生物生長。實例：從土壤中篩選能分解尿素細菌。方法：利用_培養基進行微生物篩選。Taq細菌目菌株抑制或阻止選擇土壤中

2、分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第4頁2.選擇培養基：(1)概念：允許_種類微生物生長，同時_其它種類微生物生長培養基。(2)舉例：篩選土壤中分解尿素細菌選擇培養基特點是以_為唯一氮源，按物理性質歸類為固體培養基。特定抑制或阻止尿素土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第5頁二、進行微生物數量測定1.統計菌落數目：(1)方法：_法和_法。活菌計數顯微鏡直接計數土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第6頁(2)活菌計數法。方法：_法。原理：當樣品稀釋度足夠高時，培養基表面生長一個菌落，起源于_。通過統計平板上_，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。稀釋涂布平板樣品稀釋液中一

3、個活菌菌落數土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第7頁活菌計數標準：在同一稀釋度下涂布3個平板，并選擇菌落數在_平板進行計數。樣品中活菌數計算公式：每克樣品中菌株數=_其中，C代表某一稀釋度下平板上生長平均菌落數，V代表涂布平板時所用稀釋液體積(mL)，M代表稀釋倍數。30300(CV)M土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第8頁2.增加試驗說服力辦法：方法設置重復設置對照方法培養過程中設置重復組，同一稀釋度下應涂布_個平板，才能增加試驗說服力與準確性設置空白對照，觀察培養物中是否有雜菌污染；設置完全培養基，觀察選擇培養基是否含有選擇作用意義排除偶然性原因對試驗結果影響排除

4、試驗組中_對試驗結果影響，提升試驗結果可信度3非測試因素土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第9頁3.試驗操作流程：無菌水涂布平板土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第10頁4.試驗操作注意事項：(1)土壤取樣。土壤取樣時普通要鏟去表層土，因為細菌適宜在_潮濕土壤中生長。取樣時用鏟子和盛土樣信封在使用前都需要_。取樣時選擇富含_土壤。酸堿度靠近中性滅菌有機質土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第11頁(2)樣品稀釋。稱取土壤要在火焰旁，并在火焰附近將稱好土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。稀釋土壤溶液過程，每一步都要在_旁操作。火焰土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課

5、一等獎第12頁篩選微生物種類不一樣，樣品稀釋度也不一樣。如：篩選微生物種類稀釋倍數細菌_放線菌_真菌_104、105、106103、104、105102、103、104土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第13頁(3)微生物培養與觀察。連線：土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第14頁觀察指標：觀察菌落_、大小、隆起程度和_等方面。(4)菌種判定。原理：細菌合成_能夠將尿素分解成氨，使培養基中pH_。方法：加入_，假如指示劑變紅，則可以初步判定該細菌為尿素分解菌。形狀顏色脲酶升高酚紅指示劑土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第15頁【判斷正誤】1.只要培養基中有尿

6、素即可篩選出分解尿素細菌。( )【分析】只有以尿素為唯一氮源培養基，才能篩選出分解尿素細菌。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第16頁2.選擇培養基篩選出微生物只有一個。( )【分析】只要能利用選擇培養基中特定營養物質微生物都可在培養基上生長，從而被一同選出。3.對照試驗能夠提升試驗結果可信度。( )【分析】設置對照能排除試驗組中非測試原因對試驗結果影響，使試驗結果愈加可信。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第17頁4.統計樣品中活菌數目普通使用平板劃線法。( )【分析】使用平板劃線法能分離微生物，但不能對微生物進行計數。5.顯微鏡直接計數法統計都是活菌。( )【分析】

7、顯微鏡直接計數法統計是活菌和死菌。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第18頁6.土壤中微生物大多生活在富含有機質土壤表層。( )【分析】土壤是微生物天然培養基，在富含有機質土壤表層，有更多微生物生長。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第19頁7.土壤樣品稀釋時不一樣微生物應該選擇不一樣稀釋度。( )【分析】土壤中不一樣微生物數量不一樣，應該選擇不同、適當稀釋度，以得到菌落數在30300平板。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第20頁8.伊紅美藍培養基可用來判定大腸桿菌。( )【分析】大腸桿菌在伊紅美藍培養基上菌落展現黑色，能夠此來判定大腸桿菌。土壤中分解尿素

8、的細菌的分離與計數省公開課一等獎第21頁主題1研究培養基對微生物選擇作用【互動探究】1.篩選分解尿素細菌選擇培養基：教材P22左上方側欄是本課題使用培養基配方，請分析：土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第22頁(1)在培養基配方中，為微生物生長提供碳源和氮源分別是什么物質？提醒：碳源是葡萄糖，氮源是尿素。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第23頁(2)分離分解尿素細菌選擇培養基是怎樣進行選擇？提醒：該選擇培養基配方中，尿素是培養基中唯一氮源，所以，只有能夠利用尿素微生物才能夠生長。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第24頁(3)為何只有能分解尿素微生物才能在

9、該培養基上生長？提醒：分解尿素微生物能合成脲酶，而脲酶可將尿素分解成氨，從而為微生物提供氮源。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第25頁2.設計對照試驗：(1)怎樣驗證該選擇培養基確實篩選到了能分解尿素細菌？提醒：增設牛肉膏蛋白胨基礎培養基并進行涂布平板操作，假如牛肉膏蛋白胨培養基上菌落數顯著多于選擇培養基上菌落數，則說明選擇培養基確實起到了篩選能分解尿素細菌作用。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第26頁(2)怎樣驗證所用選擇培養基沒有受到污染？提醒：設置一個未涂布平板能篩選分解尿素細菌選擇培養基。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第27頁【探究總結】1.

10、培養基中有沒有雜菌污染判斷方法：(1)若對照培養皿中無菌落生長，說明未被雜菌污染。(2)若培養基中菌落數偏高，說明被雜菌污染。(3)若菌落形態多樣，菌落數偏高，說明培養基中混入其它雜菌。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第28頁2.選擇培養基篩選作用：若牛肉膏蛋白胨培養基上菌落數目大于選擇培養基上數目，說明選擇培養基含有篩選作用。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第29頁主題2進行微生物數量測定【互動探究】1.統計菌落數目：甲、乙兩位同學用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中細菌數。在對應稀釋倍數為106培養基中，得到以下兩種統計結果。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開

11、課一等獎第30頁(1)甲同學在該濃度下涂布了一個平板，統計菌落數為230，該同學統計結果是否真實可靠？為何？提醒：不真實。為增加試驗說服力與準確性，應設置重復試驗，在同一稀釋度下涂布3個平板，統計結果后計算平均值。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第31頁(2)乙同學在該濃度下涂布了3個平板，統計菌落數分別為21、212、256，該同學將21舍去，然后取平均值。該同學對試驗結果處理是否合理？為何？提醒：不合理。微生物計數時，假如試驗中出現重復試驗結果不一致情況，應分析試驗過程中可能影響原因，找出差異原因，需重新試驗，而不能簡單地舍棄后進行計數。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開

12、課一等獎第32頁(3)某同學在三種稀釋度下吸收0.1 mL菌液涂布平板，統計菌落數，得到了以下數據，試計算1 g樣品活菌數。平板稀釋度平板1平板2平板3104320360356105212234287106212318土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第33頁提醒：105稀釋度下取0.1 mL涂布三個平板上菌落數在30300，計算其平均值為(212+234+287)/3244。深入能夠換算出1 g樣品中活菌數為(2440.1)105=2.44108。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第34頁(4)統計菌落數比活菌實際數目低，原因是_。當兩個或多個細胞在一起時，平板上觀察

13、到只是一個菌落土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第35頁2.對照試驗設計分析：分析“設置對照”中實例，探討以下問題：(1)在A同學確定自己操作無誤情況下，A同學得出菌落數多于其它同學原因可能有哪些？提醒：可能是他選擇土壤樣品不一樣于其它同學；可能是培養基受到了污染。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第36頁(2)怎樣設計對照試驗幫助A同學排除上述兩個可能影響試驗結果原因：提醒：其它同學取與A同學一樣土壤進行試驗，假如統計結果與A同學一致，則能夠確定是土壤樣品不一樣于其它同學；將A同學配制培養基在不加土樣情況下培養作為空白對照，以判斷培養基是否受到污染。土壤中分解尿素的細

14、菌的分離與計數省公開課一等獎第37頁3.微生物數量測定試驗設計：(1)分離不一樣微生物要采取不一樣稀釋度，原因是：_。土壤中各種微生物數量是不一樣，為取得不一樣類型微生物，就需要按不一樣稀釋度進行分離土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第38頁(2)怎樣依據結果判斷樣品稀釋操作是否成功？提醒：若得到了2個或2個以上菌落數目在30300平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落計數。(3)本試驗中應怎樣統計培養基上生長菌落數？提醒：每隔24 h統計一次菌落數目，選取菌落數目穩定時統計作為結果。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第39頁【探究總結】稀釋涂布平板法三個易錯提醒

15、(1)稀釋涂布平板法所選擇倒平板稀釋度很主要，普通以3個稀釋度中第二個稀釋度倒平板所出現平均菌落數在50個左右最好。(2)在設計試驗時，一定要涂布最少3個平板作為重復組。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第40頁(3)在分析結果時，一定要考慮所設置重復組結果是否一致，假如差異過大，則意味著操作有誤，需要重新試驗。土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第41頁二者比較以下:內容直接計數法間接計數法主要用具顯微鏡、細菌計數板培養基計數依據菌株本身培養基上菌落數優點計數方便、操作簡單計數是活菌土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第42頁內容直接計數法間接計數法缺點死菌、

16、活菌都計算在內操作較復雜,且有一定誤差計算公式每毫升原液含菌株數=4001 000每小格平均菌株數稀釋倍數每毫升原液含菌株數= 稀釋倍數土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第43頁2.試驗結果分析:內容現象結論有沒有雜菌污染判斷對照培養皿中無菌落生長未被雜菌污染培養基中菌落數偏高被雜菌污染菌落形態多樣,菌落數偏高培養基中混入其它雜菌選擇培養基篩選作用牛肉膏蛋白胨培養基上菌落數目大于選擇培養基上數目選擇培養基含有篩選作用土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第44頁內容現象結論樣品稀釋操作得到3個或3個以上菌落數目在30300平板操作成功重復組結果若選取同一個土樣,統計結果應靠近土壤中分解尿素的細菌的分離與計數省公開課一等獎第45頁2(全國卷)一些土壤細菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答以下問題：(1)有些細菌能分解尿素，有些細菌則不能，原因是前者能產生_。能分解尿素細菌不能以尿素分解產物CO2作為碳源，原因是_，但可用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內葡萄糖主要作用是_ (答出兩點即可)。脲酶分解尿素細菌是異養生物，不能利用CO2合成有機物為細胞生命活動提供能量，為其它