1、關于診斷酶學第五版第一張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月第一節 概 述（一）酶的組成、結構和功能 酶的本質-絕大部分的酶是蛋白質，有些酶是核酸 和酶蛋白組成的復合體，極少數酶的本質是核酸。 酶的特性-極高的催化效率、高度的特異性 (specificity)以及催化作用的可調節性一、酶的概念與特征 第二張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月酶的結構和功能 酶是蛋白質，具有一、二、三級結構，有些酶還具 有四級結構。 單體酶(monomeric enzyme)-只由一條多肽鏈構成 寡聚酶 (oligomeric enzyme)-由多個相同或不同 亞基以非共價鍵連接的酶 多酶體系(mult

2、ienzyme system)-由幾種不同功能 的酶彼此聚合而成的多酶復合物 酶的必需基團(essential group)-與酶的活性密 切相關的基團 酶的活性中心(active center)-組成具有能與底 物結合并起催化反應的特定空間結構區域第三張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月（二）酶的催化作用機制酶主要通過與底物形成一種或多種中 間復合物來降低反應的活化能。 在酶促反應中，酶與底物結合時，底物首先和酶分子上的活性中心相結合，形成酶底物中間復合物（ES），降低反應的活化能，顯著提高了反應速度。第四張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月（三）酶的命名、分類與編號 酶的命名-

3、習慣命名法、系統命名法 酶的分類-可分為六大類 氧化還原酶(oxido-reductases)、轉移酶(transferases)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂合酶)(lyases)、異構酶(isomerases)、合成酶(或連接酶)(synthetases或ligases) 酶的編號-用4個數字加以系統編號 第一個數字表示酶的類別，第二個表示亞類， 第三個表示亞-亞類，第四個表示酶的編號序數。 酶的命名-習慣命名法、系統命名法（四）酶分類與編號第五張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月 習慣用名 英文縮寫 EC編號 系統名乳酸脫氫酶 LD（LDH） 1.1.1.27 L乳

4、酸：NAD+氧化還原酶單胺氧化酶 MAO 1.4.3.4 單胺：氧化還原酶-谷氨酰轉移酶 -GT/GGT 2.3.2.2 -谷氨酰肽：氨基酸-谷氨酰轉移酶門冬氨酸氨基轉移酶 AST 2.6.1.1 L-門冬氨酸：-酮戊二酸氨基轉移酶（谷草轉氨酶） (GOT)丙氨酸氨基轉移酶 ALT 2.6.1.2 L-丙氨酸：-酮戊二酸氨基轉移酶（谷丙轉氨酶） (GPT)肌酸激酶 CK 2.7.3.2 三磷酸腺苷：肌酸轉磷酸酶堿性磷酸酶 ALP(AKP) 3.1.3.1 正磷酸單酯磷酸水解酶臨床酶學分析中常用酶的名稱與編號第六張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月二、同工酶的概念與特征同工酶是指催化相同化

5、學反應，但酶蛋白的分子結構、理化性質乃至免疫學性質不同的一組酶。根據同工酶的來源和結構不同，從基因角度可將其分為單基因決定的同工酶、復等位基因同工酶、多基因決定的同工酶和修飾同工酶四類。 第七張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月第八張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月三、工具酶通常把酶學分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶稱為工具酶。常用工具酶多為氧化還原酶類。 第九張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月1偶聯H2O2的工具酶及其指示反應 利用葡萄糖氧化酶等工具酶使相應底物被氧化生成H2O2。在POD的直接催化下，H2O2氧化芳香族胺色素原生成有色的色素 ,再進行比

6、色測定。 2NAD(P)+或NAD(P)H偶聯的脫氫酶及其指示反應 作為工具酶的脫氫酶如LD將底物的氫原子去除后傳遞給NAD(P)+而形成NAD(P)H。因NAD(P)H在340nm有特征性光吸收，可借此用分光光度法進行檢測。 （一）工具酶參與的指示反應 第十張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月第十一張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月（二）酶循環法 （405nm）第十二張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月（三）代謝物濃度的酶法測定技術 直接法 1終點法 酶偶聯法 2動力學法 第十三張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月第二節 酶測定技術酶活性測定主要利用酶有加速化學反應

7、（催化）的特性，通過測定被加速化學反應的反應速率，根據酶促反應中底物的減少量或產物的生成量來計算酶活性濃度的高低。 第十四張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月酶促反應動力學 酶促反應 第十五張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月 酶促反應進程第十六張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月一、酶活性測定 （一）定時法測定酶活性 終點法是在酶促反應平衡期（S或P不變）任何一點進行測定，故不需終止反應。 第十七張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月1直接法 是在不終止酶促反應條件下，直接通過測定反應體系中底物或產物理化特性的變化如吸光度、熒光、旋光性、pH、電導率、粘度等，從而計算出

8、酶活性濃度。 2間接法 在原反應體系中加入另一些酶試劑，所進行的酶促反應和被測酶反應偶聯起來。 連續測定酶反應過程中某一反應產物或底物的濃度隨時間變化的多點數據，求出酶反應初速度，間接計算酶活性濃度的方法。 （二）連續監測法測定酶活性 第十八張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月酶偶聯反應 A B C D 酶學分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶 Ei指示酶Ea輔助酶ExEiEa工具酶第十九張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月L-丙氨酸 -酮戊二酸 -丙酮酸 L-谷氨酸丙酮酸 NADH H+ 乳酸 NAD+ALT（樣品）LD（試劑）酶耦聯法測定ALT340nmA/min-

9、酮酸標本中GLDH標本中試劑1試劑2第二十張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月第二十一張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月酶耦聯法測定舉例第二十二張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月第二十三張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月第二十四張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月(三)干擾因素 1其他酶和物質的干擾 2酶的污染 3非酶反應 4分析容器的污染 5沉淀形成 第二十五張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月 （四）血清酶活性濃度測定條件的優化 (1)方法選擇 (2)儀器和設備 (3)試劑 (4)儀器參數的設置 1方法類型 2波長 3樣品量與試劑量 4. 稀釋水量

10、 5反應時間 6孵育時間 7. 延遲時間 8. 監測時間 9. 試劑吸光度上、下 限 10. 底物耗盡限額 11. 線性度 12. 試劑空 白速率 13. 線性范圍 14. 計算因子F值 (五)部分分析前因素對酶活性測定的干擾 1溶血 2抗凝劑 3標本儲存溫度第二十六張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月（六）酶活性濃度的單位 1. 酶活性單位 （1）慣用單位 （2）國際單位-在特定的條件下，一分鐘內使底 物轉變一微摩爾的酶量為一個國際單位。 （3）Katal單位-在規定條件下，每秒鐘催化轉化 一摩爾底物的酶量。1katal60106U 第二十七張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月

11、2. 酶活性濃度單位 以每單位體積所含的酶活性單位數表示。 （1）表示方法-UL （2）酶活性濃度單位的計算-用連續監測法測 定時，根據摩爾消光系數計算。第二十八張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月3. 參考值和正常上限倍數的應用 （1）參考區間 （2）正常上限倍數的應用 正常上限(upper limits of normal， ULN)倍數作為酶活性濃度的表示法， 就是測定值除以正常上限值。第二十九張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月（七）系數K值的計算與應用1. 系數K值的意義與設置2. 系數K值的類型與計算第三十張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月（八）臨床酶學測定的標

12、準化 1. 標準化途徑 1使用推薦方法和參考方法 2使用公認的酶校正物或酶參考物 2. 酶活性濃度測定的參考系統 1建立原級參考方法 2制備原級參考物 3建立參考實驗室網絡第三十一張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月（一）測定原理（二）免疫化學測定的優缺點 優點主要有：靈敏度高特異性高 能用于一些不表現酶活性的酶蛋白 特別適用于同工酶的測定 局限性主要有：制備足夠量的提純酶作為抗原和 具有免疫化學性質的抗血清較困難 測定步驟多，操作繁瑣 測定成本高二、酶質量測定第三十二張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月三、同工酶檢測 第三十三張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月 (一)電泳

13、法-瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰 胺凝膠電泳、等電聚焦電泳、 毛細管電泳 用電泳法進行同工酶分析時，如顯示的 區帶數與同工酶數不一致時，要特別注意 巨分子酶的存在。 (二)層析法第三十四張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月血 清 LD 電 泳 圖 譜 分 析第三十五張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月正常和病理狀況時血清CK同工酶譜第三十六張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月(三)免疫分析法 免疫抑制法 利用同工酶的一種亞基與相應的抗體結合后，酶活性受到抑制，測定加與不加抗體前后樣品中酶活性的變化，可以計算出該型同工酶的活性。 不加抗CK-MM血清時樣品的CK活性：CK-MM和C

14、K-MB活性； 加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性：50CK-MB的活性； 加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性2：CK-MB活性； 所測CK-MM和CK-MB之總活性CK-MB活性CK-MM活性。第三十七張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月 (四)動力學分析法 1底物特異性分析法 2抑制劑分析法 3pH分析法 4熱失活分析法 (五)蛋白酶水解法第三十八張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月第三節 常用酶及同工酶測定的臨床應用 一、血清酶血清酶活性升高的原因：組織器官受損造成細胞破壞或細胞膜通透性增高，細胞內的某些酶大量釋放入血；細胞的轉換率增高或細胞的增殖加快，其特異的標志酶釋放

15、入血；細胞內酶的合成或誘導增強；酶的清除受阻。第三十九張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月1、血清酶的來源 （1）血漿特異酶 （2）非血漿特異酶 外分泌酶 細胞酶2、血清酶的去路 （1）血清酶的半壽期 （2）血清酶的失活和排泄（一）血清酶的來源與去路 第四十張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月（二）血清酶的生理差異 1性別 2年齡 3進食 4運動 5妊娠 6其他第四十一張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月 常用的酶譜：(1)心肌酶譜-AST、LD、CK、CK-MB、CK- MB亞型或CK-MM亞型(2)肌酶譜-LD、AST及其同工酶、CK-MM亞型(3)肝酶譜-ALT、LD、

16、-GT、ALP、ChE、MAO(4)腫瘤酶譜-ACP及其同工酶、ALP及其同工酶、 -GT及其同工酶、AFU、AMY及其同工酶、LPS(5)胰酶譜-AMY及其同工酶、LPS、彈力蛋白酶-1、 磷脂酶A2（三）血清酶的臨床應用 第四十二張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月第四十三張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月二、尿液酶三、漿膜腔積液酶 四、腦脊液酶 第四十四張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月五、同工酶的診斷價值 LD同工酶心肌梗死、肝功能損傷和惡性腫瘤 CK同工酶心肌梗死、肌肉疾病和神經系統疾病 AST同工酶肝臟、心肌等細胞損傷程度的判斷 GP同工酶急性心肌梗死 ARS

17、同工酶膀胱癌 ALD同工酶肝臟疾病、心肌梗死、神經肌肉系 統疾病和惡性腫瘤 -GT同工酶肝臟占位性病變 AMS同工酶急性胰腺炎、腮腺炎 ALP同工酶肝膽疾病、骨骼疾病 ACP同工酶前列腺疾病 GST 同工酶肝臟疾病、肺癌 第四十五張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月1、轉氨酶及其同工酶DeRitis比值（ASTALT）對于急、慢性肝炎的診 斷、鑒別診斷以及判斷轉歸也有特別價值。急 性肝炎時比值1，肝硬化時比值2，肝癌時 比值3。“酶膽分離”現象重癥肝炎時由于大量肝細胞壞死， 血中ALT逐漸下降，而膽紅素卻進行性升高，常 是肝壞死的前兆。第四十六張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月2

18、、-谷氨酰轉移酶及其同工酶-GT同工酶分為-GT1、-GT2、-GT3和-GT4四種，正常人只見-GT2和-GT3。重癥肝膽疾病和肝癌時常有-GT1出現，乙醇性肝壞死和膽總管結石時常有-GT2增加，-GT4與膽紅素增高密切相關。第四十七張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月3、肌酸激酶及其同工酶和亞型 在細胞質內存在3種同工酶，即CK-BB(CK1)，CK-MB(CK2)和CK-MM(CK3)。在細胞線粒體內還存在另一CK同工酶，即所謂線粒體CK(CK-Mt)，也稱CK4。CK-MM亞型測定對早期AMI的檢出更為敏感，一般以CK-MM3CK-MMl10作為診斷 AMI的標準CK-MB2亞型

19、在AMI早期診斷和判斷有無再灌注上有很高的靈敏度和特異性。一般CK-MB219UL或CK-MB2CK-MB115可作為AMI的診斷標準之一。第四十八張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月4、乳酸脫氫酶及其同工酶 AMI時，LD由于分子量較大，在常用心肌酶中升高最遲，通常在梗死8-18h升高，48-144h達峰值，可顯著升高(5ULN)，因其半壽期較長，增高持續時間可達5-10d，此時其他酶已恢復正常，在亞急性心肌梗死診斷上有一定價值。 測定血清及胸腹水中LD含量常用來鑒別其為漏出液抑或滲出液，若胸水LD血清LD0.6、腹水LD血清LD0.4為滲出液，反之為漏出液。 骨骼肌和肝細胞損傷時常出

20、現LD5LD4。急性肝炎時LD1和LD2相對下降，LD5升高；慢性肝炎時LD5升高，且LDlLD3；肝硬化時僅表現LD2下降和LD5升高；肝癌時LD5升高，但LD1LD3。惡性腫瘤如轉移到肝臟往往伴有LD4、LD5升高。第四十九張，PPT共五十五頁，創作于2022年6月5、堿性磷酸酶及其同工酶 人體各組織ALP同工酶可分為3大類，即胎盤ALP、腸ALP和肝骨腎ALP同工酶。 肝硬化、膽石癥和腫瘤引起的膽汁淤積，ALP增高達ULN的520倍。90以上的肝外膽道阻塞患者血清ALP升高，升高的程度常和阻塞程度及病程成正比。 胃腸道腫瘤；肺癌等惡性腫瘤時出現類腸型ALP，稱為Kasahara同工酶和類胎盤同工酶稱為Regan或Nagao同工酶。第五十張