1、現(xiàn)代分子生物學(xué)試題及答案現(xiàn)代分子生物學(xué)習(xí)題及答案一、填空題1.基因工程是70年代發(fā)展起來的遺傳學(xué)的一個(gè)分支學(xué)科。基因工程的兩個(gè)基本特點(diǎn)是：（1）分子水平上的操作，（2）細(xì)胞水平上的表達(dá)基因克隆中三個(gè)基本要點(diǎn)是：克隆基因的類型；受體的選擇；載體的選擇通過比較用不同組合的限制性內(nèi)切核酸酶處理某一特定基因區(qū)域所得到的不同大小的片段，可以構(gòu)建顯示該區(qū)域各限制性內(nèi)切核酸酶切點(diǎn)相互位置的限制性酶切圖譜。限制性內(nèi)切核酸酶是按屬名和種名相結(jié)合的原則命名的，第一個(gè)大寫字母取自屬名的第一個(gè)字母，第二、三兩個(gè)字母取自種名的前兩個(gè)字母，第四個(gè)字母則用株名表示。部分酶切可采取的措施有：（1）減少酶量；（2）縮短反應(yīng)時(shí)間

2、；（3）增大反應(yīng)體積等。第一個(gè)分離的限制性內(nèi)切核酸酶是EcoK；而第一個(gè)用于構(gòu)建重組體的限制性內(nèi)切核酸酶是_EcoRl。&限制性內(nèi)切核酸酶BsuRI和Hae川的來源不同，但識(shí)別的序列都是GGCC，它們屬于異源同工酶。DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_枯草桿菌蛋白酶切割DNA聚合酶I得到的分子量為76kDa的大片段，具有兩種酶活性：（1）5-3合成酶的活性；（2）3-5外切核酸酶的活性。為了防止DNA的自身環(huán)化，可用堿性磷酸酶去雙鏈DNA_5端的磷酸基團(tuán)。EGTA是_Ca2+_離子螯合劑。12.測(cè)序酶是修飾了的T7DNA聚合酶，它只有_5-3合成酶的活性，而沒有3-5外切酶的活性。切口移位

3、（nicktranslation）法標(biāo)記DNA的基本原理在于利用DNA聚合酶I的_5一3外切核酸酶和5一3合成酶的作用。欲將某一具有突出單鏈末端的雙鏈DNA分子轉(zhuǎn)變成平末端的雙鏈形式，通常可采用S1核酸酶切割或DNA聚合酶補(bǔ)平。反轉(zhuǎn)錄酶除了催化DNA的合成外，還具有_核酸水解酶H的作用，可以將DNA-RNA雜種雙鏈中的_RNA_水解掉。16.基因工程中有3種主要類型的載體：質(zhì)粒DNA，病毒DNA，質(zhì)粒和病毒DNA雜合體。就克隆一個(gè)基因（DNA片段）來說，最簡(jiǎn)單的質(zhì)粒載體也必需包括三個(gè)部分：_復(fù)制區(qū)：含有復(fù)制起點(diǎn)；選擇標(biāo)記：主要是抗性基因；克隆位點(diǎn)：便于外源DNA的插入。另外，一個(gè)理想的質(zhì)粒載體

4、必須具有低分子量。個(gè)帶有質(zhì)粒的細(xì)菌在有EB的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時(shí)間后，一部分細(xì)胞中已測(cè)不出質(zhì)粒，這種現(xiàn)象叫質(zhì)粒消除（或治愈）_。19.pBR322是一種改造型的質(zhì)粒，它的復(fù)制子來源于pMBI一它的四環(huán)素抗性基因來自于pSCI01，它的氨芐青霉素抗性基因來自于pSF2124（R質(zhì)粒）。YAC的最大容載能力是1000kb,BAC載體的最大容載能力是300kb。pSCI01是一種緊復(fù)制的質(zhì)粒。pUCI8質(zhì)粒是目前使用較為廣泛的載體。pUC系列的載體是通過pBR322和M13兩種質(zhì)粒改造而來。它的復(fù)制子來自pMBl,Amp抗性基因則是來自轉(zhuǎn)座子。噬菌體之所以被選為基因工程載體，主要有兩方面的原因：一是它

5、在細(xì)菌中能夠大量繁殖，這樣有利于外源DNA的擴(kuò)增；二是對(duì)某些噬菌體（如噬菌）的遺傳結(jié)構(gòu)和功能研究得比較清楚，其大腸桿菌宿主系統(tǒng)的遺傳也研究得比較詳盡。野生型的M13不適合用作基因工程載體，主要原因是沒有合適的限制性內(nèi)切核酸酶識(shí)別位點(diǎn)和選擇標(biāo)記。黏粒（cosmid）是質(zhì)粒一噬菌體雜合載體，它的復(fù)制子來自質(zhì)粒、cos位點(diǎn)序列來自噬菌體，最大的克隆片段達(dá)到45_kb。野生型的噬菌體DNA不宜作為基因工程載體，原因是：（1）分子量大，（2）酶的多切點(diǎn)，（3）無選擇標(biāo)記噬菌粒是由質(zhì)粒和噬菌體DNA共同構(gòu)成的，其中來自質(zhì)粒的主要結(jié)構(gòu)是復(fù)制區(qū)，而來自噬菌體的主要結(jié)構(gòu)是IG區(qū)。噬菌體載體由于受到包裝的限制，插

6、入外源DNA片段后，總的長(zhǎng)度應(yīng)在噬菌體基因組的_75%105%_的范圍內(nèi)。在分離DNA時(shí)要使用金屬離子螯合劑，如EDTA和檸檬酸鈉等，其目的是螯合Mg2+離子，抑制核酸酶的活性用乙醇沉淀DNA時(shí)，通常要在DNA溶液中加人單價(jià)的陽離子，女口NaCl和NaAc,其目的是_中和DNA分子的負(fù)電荷，增加DNA分子間的凝聚力。31.引物在基因工程中至少有4個(gè)方面的用途：合成探針；合成cDNA;用于PCR反應(yīng)；（4）進(jìn)行序列分析Clark發(fā)現(xiàn)用TaqDNA聚合酶得到的PCR反應(yīng)產(chǎn)物不是平末端，而是有一個(gè)突出堿基末端的雙鏈DNA分子。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)設(shè)計(jì)了克隆PCR產(chǎn)物的T載體。在cDNA的合成中要用到S1核酸

7、酶，其作用是切除在第二鏈合成時(shí)形成的發(fā)夾環(huán)乙醇沉淀DNA的原理是乙醇使DNA分子脫水。假定克隆一個(gè)編碼某種蛋白質(zhì)的基因，必須考慮其表達(dá)的三個(gè)基本條件：（1）保持正確的可讀框（2）能夠使其轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子（3）具有翻譯的起始和終止信號(hào)受體細(xì)胞的感受態(tài)是接受外源DNA的生理狀態(tài)_。DNA重組連接的方法大致分為四種：（1）黏性末端連接；（2）平末端連接；（3）同聚物接尾連接；（4）接頭連接法。將含有外源基因組一個(gè)酶切片段的質(zhì)粒稱之為含有一個(gè)基因組DNA克隆_，各種此類質(zhì)粒的集合體稱之為構(gòu)建了一個(gè)基因組DNA文庫。將含有一個(gè)mRNA的DNA拷貝的克隆稱作一個(gè)_cDNA克隆，源于同一批RNA制備物的克隆群則

8、構(gòu)建了一個(gè)_cDNA文庫_。只要知道基因組中某一特定區(qū)域的部分核苷酸組成，用_聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)可以將這段DNA進(jìn)行百萬倍的擴(kuò)增。人工感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞在溫度為0C時(shí)吸附DNA,42C_時(shí)攝人DNA。目前，怎重組體的篩選中，已經(jīng)發(fā)展了許多構(gòu)思巧妙、具有極高準(zhǔn)確性的篩選方法。大致可以分為：遺傳學(xué)方法；物理篩選法；核酸雜交法；(4)表達(dá)產(chǎn)物分析法等。PCR擴(kuò)增篩選重組體是比較簡(jiǎn)便的篩選方法，它適合于插入外源片段的種類較多，大小又極為相似的重組體的篩選。核酸雜交探針可分為兩大類：DNA探針和RNA探針。其中DNA探針又分為基因組DNA探針和cDNA探針。如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割雙鏈DNA產(chǎn)

9、生5突出的黏性末端，則可以用_Klenow酶填補(bǔ)的方法進(jìn)行3末端標(biāo)記。如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割DNA產(chǎn)生的是3突出的黏性末端，可以用_T4DNA聚合酶進(jìn)行3末端標(biāo)記。單鏈DNA探針的標(biāo)記可以采用下列方法：(1)用M13噬菌體載體合成單鏈DNA探針；(2)從mRNA反轉(zhuǎn)錄合成單鏈cDNA探針；(3)用不對(duì)稱PCR合成單鏈DNA探針。根據(jù)Northern雜交的結(jié)果可以說明：外源基因是否進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄_。差示雜交(differentialhybridization)技術(shù)需要_兩種不同的細(xì)胞群體能夠表達(dá)不同的基因，即在一個(gè)群體中能夠表達(dá)一些基因，而在另一個(gè)細(xì)胞群體中不能表達(dá)這些基因RNA分子經(jīng)凝膠電泳后

10、按大小不同分開，然后被轉(zhuǎn)移到一張硝酸纖維素膜(尼龍膜)上，同一放射DNA探針雜交的技術(shù)稱_Northern印跡O在Southern印跡_技術(shù)中，DNA限制性片段經(jīng)凝膠電泳分離后，被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(或尼龍膜)上，然后與放射性的DNA探針雜交。可用T4DNA聚合酶進(jìn)行平末端的DNA標(biāo)記，因?yàn)檫@種酶具有_53合成酶_和_35外切核酸酶_的活性。根據(jù)外源片段提供的遺傳表型篩選重組體，必需考慮三種因素：(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表達(dá)載體；(3)不含內(nèi)含子。Northern印跡和Southern印跡有兩點(diǎn)根本的區(qū)別：(1)印跡的對(duì)象不同：Northern是RNA,Southern是DNA

11、;(2)電泳條件不同，前者是變性條件，后者是非變性條件。放射免疫篩選的原理基于以下三點(diǎn)：(1)抗體能夠被吸附到固體支持物上；(2)同一個(gè)抗原可以同幾種抗體結(jié)合；(3)抗體能夠被標(biāo)記二、選擇題(單選或多選)1.因研究重組DNA技術(shù)而獲得諾貝爾獎(jiǎng)的科學(xué)家是()A.Kornberg(b)W.Gilbert(c)P.Berg(d)B.McClintock第一個(gè)作為重組DNA載體的質(zhì)粒是()pBR322(b)ColEI(c)pSCI01(d)pUCI8關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有()不太恰當(dāng)。由作用于同一DNA序列的兩種酶構(gòu)成這一系統(tǒng)中的核酸酶都是口類限制性內(nèi)切核酸酶這一系統(tǒng)中的修飾

12、酶主要是通過甲基化作用對(duì)DNA進(jìn)行修飾不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制-修飾系統(tǒng)n型限制性內(nèi)切核酸酶：()有內(nèi)切核酸酶和甲基化酶活性且經(jīng)常識(shí)別回文序列僅有內(nèi)切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供限制性識(shí)別非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性僅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供下面有關(guān)限制酶的敘述哪些是正確的?()限制酶是外切酶而不是內(nèi)切酶限制酶在特異序列(識(shí)別位點(diǎn))對(duì)DNA進(jìn)行切割同一種限制酶切割DNA時(shí)留下的末端序列總是相同的一些限制酶在識(shí)別位點(diǎn)內(nèi)稍有不同的點(diǎn)切割雙鏈DNA，產(chǎn)生黏末端一些限制酶在識(shí)別位點(diǎn)內(nèi)相同的位置切割雙鏈DNA，產(chǎn)生平末端TOC o 1-5 h

13、 z第一個(gè)被分離的類酶是：()EcoK(b)Hind川(c)Hindn(d)EcoB7.在下列進(jìn)行DNA部分酶切的條件中，控制那一項(xiàng)最好?()反應(yīng)時(shí)間(b)酶量(c)反應(yīng)體積(d)酶反應(yīng)的溫度&在下列試劑中，那一種可以螯合Ca2+離子?()EDTA(b)檸檬酸鈉(c)SDS(d)EGTA在下列工具酶中，那一種可以被EGTA抑制活性?()S1單鏈核酸酶(b)末端轉(zhuǎn)移酶(c)堿性磷酸酶Bal31核酸酶限制性內(nèi)切核酸酶可以特異性地識(shí)別：()雙鏈DNA的特定堿基對(duì)(b)雙鏈DNA的特定堿基序列(c)特定的三聯(lián)密碼(d)以上都正確下列關(guān)于限制性內(nèi)切核酸酶的表示方法中，正確一項(xiàng)的是()。(a)Sau3AI

14、(b)E.coRI(c)hindIII(d)Sau3A1限制性內(nèi)切核酸酶的星號(hào)活性是指：()(a)在非常規(guī)條件下，識(shí)別和切割序列發(fā)生變化的活性。活性大大提高切割速度大大加快(d)識(shí)別序列與原來的完全不同13.下面哪一種不是產(chǎn)生星號(hào)活性的主要原因?()(a)甘油含量過高(b)反應(yīng)體系中含有有機(jī)溶劑(c)含有非Mg2+的二價(jià)陽離子(d)酶切反應(yīng)時(shí)酶濃度過低關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有()不太恰當(dāng)由作用于同一DNA序列的兩種酶構(gòu)成這一系統(tǒng)中的核酸酶都是口類限制性內(nèi)切核酸酶這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對(duì)DNA進(jìn)行修飾不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制-修飾系統(tǒng)在長(zhǎng)模板鏈的指導(dǎo)下

15、引物延伸合成長(zhǎng)的DNA互補(bǔ)鏈時(shí)應(yīng)選用()(a)T4DNA聚合酶(b)Klenow酶.(c)大腸桿菌DNA聚合酶I(d)T7DNA聚合酶末端轉(zhuǎn)移酶是合成酶類，()作用時(shí)不需要模板DNADNA在Ca2+的存在下，可以在突出的3,末端延長(zhǎng)鏈在Ca2+的存在下，可以在隱蔽的3,末端延長(zhǎng)上述說法有兩種是正確的在基因工程中，可用堿性磷酸酶()(a)防止DNA的自身環(huán)化(b)同多核苷酸激酶一起進(jìn)行DNA的5,末端標(biāo)記制備突出的3,末端(d)上述說法都正確下列酶中，除()外都具有磷酸酶的活性入核酸外切酶(b)外切酶川(c)單核苷酸激酶堿性磷酸酶下列哪一種酶作用時(shí)需要引物？()(a)限制酶(b)末端轉(zhuǎn)移酶(c)

16、反轉(zhuǎn)錄酶(d)DNA連接酶S1核酸酶的功能是()(a)切割雙鏈的DNA(b)切割單鏈的RNA(c)切割發(fā)夾環(huán)(d)以上有兩項(xiàng)是正確的Klenow酶與DNA聚合酶相比，前者喪失了()的活性。(a)5,-3,合成酶，(b)3,-5,外切酶(c)5,-3,外切酶(d)轉(zhuǎn)移酶下面關(guān)于松弛型質(zhì)粒(relaxedplasmid)性質(zhì)的描述中，()是不正確的質(zhì)粒的復(fù)制只受本身的遺傳結(jié)構(gòu)的控制，而不受染色體復(fù)制機(jī)制的制約，因而有較多的拷貝數(shù)可以在氯霉素作用下進(jìn)行擴(kuò)增(c)通常帶有抗藥性標(biāo)記同嚴(yán)緊型質(zhì)粒融合后，雜合質(zhì)粒優(yōu)先使用松弛型質(zhì)粒的復(fù)制子基因工程中所用的質(zhì)粒載體大多是改造過的，真正的天然質(zhì)粒載體很少，在下

17、列載體中只有()被視為用作基因工程載體的天然質(zhì)粒載體(a)pBR322(b)pSCIO1(c)pUBIIO(d)pUCI8下列哪種克隆載體對(duì)外源DNA的容載量最大?()(a)質(zhì)粒(b)黏粒(c)酵母人工染色體(YAC)(d)噬菌體(e)cDNA表達(dá)載體松弛型質(zhì)粒：()在寄主細(xì)胞中拷貝數(shù)較多(b)可用氯霉素?cái)U(kuò)增一般沒有選擇標(biāo)記(d)上述(a)、(b)兩項(xiàng)正確ColEl是惟一用作基因工程載體的自然質(zhì)粒，這種質(zhì)粒：()是松弛復(fù)制型(b)具有，四環(huán)素抗性(c)能被氯霉素?cái)U(kuò)增(d)能產(chǎn)生腸桿菌素同一種質(zhì)粒DNA，以三種不同的形式存在，電泳時(shí)，它們的遷移速率是：()(a)OCDNASCDNALDNASCD

18、NALDNAOCDNALDNAOCDNASCDNASCDNAOCDNALDNApBR322是一種改造型的質(zhì)粒，含有兩個(gè)抗性基因，其中四環(huán)素抗性基因來自：()(a)ColEl(b)Ri質(zhì)粒(c)pSCI01(d)pUCI8關(guān)于穿梭質(zhì)粒載體，下面哪一種說法最正確?()在不同的宿主中具有不同的復(fù)制機(jī)制在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制起點(diǎn)在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制酶在不同的宿主細(xì)胞中具有不同的復(fù)制速率能夠用來克隆32kb以下大小的外源片段的質(zhì)粒載體是()(a)charomid(b)plasmid(C)cosmid(d)phagemid31.第一個(gè)作為重組DNA載體的質(zhì)粒是()(a)pBR322(

19、b)ColEl(c)pSCI01(d)pUCl832.Ti質(zhì)粒：()(a)可從農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)到植物細(xì)胞中(b)作為雙鏈DNA被轉(zhuǎn)移(c)在植物中導(dǎo)致腫瘤(d)介導(dǎo)冠癭堿的合成，作為細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)物和植物的生長(zhǎng)激素需要細(xì)菌的vir基因幫助轉(zhuǎn)移在植物細(xì)胞中作為染色體外質(zhì)粒33.黏粒(cosmid)是一種人工建造的載體，()它具有COS位點(diǎn)，因而可進(jìn)行體外包裝(b)它具有質(zhì)粒DNA的復(fù)制特性(c)進(jìn)入受體細(xì)胞后，可引起裂解反應(yīng)(d)進(jìn)入受體細(xì)胞后，可引起溶源化反應(yīng)有兩種確定核酸中核苷酸序列的方法：化學(xué)序列分析法(Maxam-GIbert)和酶學(xué)序列分析法(Sanger)。酶學(xué)測(cè)序法的基本原理/優(yōu)點(diǎn)是：()堿基

20、與特殊染料間不同的相互作用一個(gè)合成引物的延伸和DNA修復(fù)合成的可靠終止限制性位點(diǎn)與DNA末端標(biāo)記的相關(guān)性可同時(shí)對(duì)DNA雙螺旋的兩條鏈進(jìn)行測(cè)序反應(yīng)是DNA特異的，RNA不會(huì)帶來干擾。這樣既減少純化步驟，也節(jié)約了開支。TOC o 1-5 h z關(guān)于cDNA的最正確的說法是：()(a)同mRNA互補(bǔ)的單鏈DNA(b)同mRNA互補(bǔ)的雙鏈DNA(c)以mRNA為模板合成的雙鏈DNA(d)以上都正確用堿法分離質(zhì)粒DNA時(shí)，染色體DNA之所以可以被除去，是因?yàn)椋?)(b)染色體DNA分子量(d)染色體未同蛋白質(zhì)下面哪一種說法不正(b)溶液的作用是(a)染色體DNA斷成了碎片大，而不能釋放(c)染色體變性后

21、來不及復(fù)性分開而沉淀關(guān)于堿解法分離質(zhì)粒DNA,確?()(a)溶液I的作用是懸浮菌體使DNA變性溶液川的作用是使DNA復(fù)性質(zhì)粒DNA分子小，所以沒有變性，染色體變性后不能復(fù)性Clark做了一個(gè)有趣的實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在雙鏈DNA的末端加一個(gè)堿基，主要是加().(a)dGTP(b)dATP(c)dCTP(d)dTTP根據(jù)構(gòu)建方法的不同，基因文庫分為基因組文庫、cDNA文庫等。在下列文庫中，()屬cDNA文庫(a)YAC文庫(b)MAC文庫(c)扣減文庫(d)BAC文庫下面關(guān)于多克隆位點(diǎn)(multipleclonesite,MCS)的描TOC o 1-5 h z述，不正確的

22、一句是()(a)僅位于質(zhì)粒載體中(b)具有多種酶的識(shí)別序列(c)不同酶的識(shí)別序列可以有重疊(d)般是人工合成后添加到載體中在cDNA技術(shù)中，所形成的發(fā)夾環(huán)可用()(a)限制性內(nèi)切核酸酶切除(b)用31外切核酸酶切除(c)用S1核酸酶切除(d)用51外切核酸酶切除在DNA的酶切反應(yīng)系統(tǒng)中，通常：()用SSC緩沖液(b)加入Mg2+作輔助因子(c)加入BSA等保護(hù)劑(d)上述說法中，有兩項(xiàng)是正確的黏性末端連接法，不僅操作方便，而且()(a)產(chǎn)生新切點(diǎn)(b)易于回收外源片段(c)載體不易環(huán)化(d)影響外源基因的表達(dá)在下列表型中，()是基因工程上理想的受體菌表型(a)r+m+rec*(b)r-m-re

23、c-(C)r-m-rec+(d)r+m+rec-關(guān)于DNA接頭在基因工程中的作用，下列說法中哪一項(xiàng)不正確?()給外源DNA添加適當(dāng)?shù)那悬c(diǎn)(b)人工構(gòu)建載體(c)調(diào)整外源基因的可讀框(d)增加調(diào)控元件cDNA文庫包括該種生物的()(a)某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因(b)所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基(c)所有結(jié)構(gòu)基因(d)內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)47.下列關(guān)于建立cDNA文庫的敘述中，哪一項(xiàng)是錯(cuò)誤的?()從特定組織或細(xì)胞中提取DNA或RNA用反轉(zhuǎn)錄酶合成mRNA的對(duì)應(yīng)單鏈DNA以新合成的單鏈DNA為模板合成雙鏈DNA新合成的雙鏈DNA甲基化48.下列對(duì)黏性末端連接法的評(píng)價(jià)中，哪一項(xiàng)是不正確的?()(a)操作方便(b)易于回收

24、片段(c)易于定向重組(d)載體易于自身環(huán)化，降低重組率49.關(guān)于感受態(tài)細(xì)胞性質(zhì)的描述，下面哪一種說法不正確?()(功具有可誘導(dǎo)性(b)具有可轉(zhuǎn)移性(c)細(xì)菌生長(zhǎng)的任何時(shí)期都可以出現(xiàn)(d)不同細(xì)菌出現(xiàn)感受態(tài)的比例是不同的下面關(guān)于用T4多核苷酸激酶標(biāo)記5端制備探針的描述中()是不正確的。(a)既能標(biāo)記DNA,又能標(biāo)記RNA(b)既能標(biāo)記雙鏈DNA又能標(biāo)記單鏈DNA只能標(biāo)記突出的5端不能標(biāo)記其他類型末端DNA或RNA必須有5-OH的存在Southem印跡的DNA探針()雜交。(a)只與完全相同的片段(b)可與任何含有相同序列的DNA片段可與任何含有互補(bǔ)序列的DNA片段.可與用某些限制性內(nèi)切核酸酶切

25、成的DNA片段以上都是用下列方法進(jìn)行重組體的篩選，只有()說明外源基因進(jìn)行了表達(dá)。(a)Southem印跡雜交(b)Northem印跡雜交(c)Western印跡(d)原位菌落雜交下列哪一個(gè)不是Southern印跡法的步驟？()用限制酶消化DNADNA與載體的連接(c)用凝膠電泳分離DNA片段(d)DNA片段轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上用一個(gè)標(biāo)記的探針與膜雜交報(bào)告基因()以其易于分析的編碼序列代替感興趣基因的編碼序列以其易于分析的啟動(dòng)子區(qū)代替感興趣基因的啟動(dòng)子區(qū)能用于檢測(cè)啟動(dòng)子的活性(d)能用于確定啟動(dòng)子何時(shí)何處有活性在利用lacZ失活的顯色反應(yīng)篩選法中，IPTG的作用是()(a)誘導(dǎo)宿主的a肽的合成

26、(b)誘導(dǎo)宿主的3肽的合成(c)作為酶的作用底物(d)作為顯色反應(yīng)的指示劑56.切口移位是指在()作用下，使()帶上放射性標(biāo)記。(a)DNA聚合酶1,RNA(b)DNA聚合酶1,DNA(c)DNA聚合酶川，RNA(d)DNA聚合酶川，DNA57.用于核酸分子雜交的探針可以是放射性標(biāo)記的()(a)DNA(b)RNA(c)抗體(d)抗原58.Southern印跡是用DNA探針檢測(cè)DNA片段，而Northern印跡則是：()(a)用RNA探針檢測(cè)DNA片段(b)用RNA探針檢測(cè)RNA片段(c)用DNA探針檢測(cè)RNA片段(d)用DNA探針檢測(cè)蛋白質(zhì)片段59.用免疫化學(xué)法篩選重組體的原理是()(a)根據(jù)

27、外源基因的表達(dá)(b)根據(jù)載體基因的表達(dá)(c)根據(jù)mRNA同DNA的雜交(d)根據(jù)DNA同DNA的雜交60.隨機(jī)引物標(biāo)記探針，下列各項(xiàng)中哪一項(xiàng)是不正確的?()(a)雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA都是可以標(biāo)記的不需要用DnaseI預(yù)處理反應(yīng)時(shí)可用Klenow酶(d)反應(yīng)時(shí)可用DNA聚合酶1在切口移位標(biāo)記DNA探針時(shí)只能使用()(a)Klenow酶(b)DNA聚合酶I(c)DNA聚合酶H(d)DNA聚合酶川要對(duì)一雙鏈的DNA分子進(jìn)行31末端標(biāo)記，可用(a)Klenow酶(b)DNA聚合酶IT4DNA聚合酶(d)T7DNA聚合酶答案1.c;2.c;3.b;4.b5.b,C,d,e;6.c;7.b;8.

28、d;9.d;10.B;11.d;12.a;13.d;14.b15.d;16.c;17.a,b；18.a;19.c;20.d;21.c;22.C;23.b;24.C;25.d;26.a,C,d;27.b);28.c;29.b;30.a;31.c;32.a,c,d,e,33.a,b,c;34.b;35.c;36.c;37.d;38.b;39.c;40.a;41.c;42.a,b,c;43.b;44.b;45.d;46.a;47.a;48.c;49.c;50.b;51.c;52.c;53.b;54.a,c,d;55.a;56.b;57.a,b;58.c;59.a;60.d;61.b;62.c;二、簡(jiǎn)

29、答題說明SangerDNA測(cè)序法的原理。SangerDNA測(cè)序法是建立在兩個(gè)基本原理之上：（1）核酸是依賴于模板在聚合酶的作用下由5端向3端聚合（DNA聚合酶參與了細(xì)菌修復(fù)DNA合成過程）；（2）可延伸的引物必須能提供游離的3羥基末端，雙脫氧核苷酸由于缺少游離的3羥基末端，因此會(huì)終止聚合反應(yīng)的進(jìn)行。如果分別用4種雙脫氧核苷酸終止反應(yīng)，則會(huì)獲得4組長(zhǎng)度不同的DNA片段。通過比較所有DNA片段的長(zhǎng)度可以得知核苷酸的序列。某學(xué)生在用EcoRI切割外源DNA片段時(shí)，出現(xiàn)了星號(hào)活性，請(qǐng)分析可能的原因？鹽離子濃度不對(duì)，溫度不對(duì)，甘油濃度過高。在序列5-CGAACATATGGAGT-3中含有一個(gè)6bp的H類

30、限制性內(nèi)切核酸酶的識(shí)別序列，該位點(diǎn)的序列可能是什么？回文序列是：5-CATATG-3,下面幾種序列中你認(rèn)為哪一個(gè)（哪些）最有可能是H類酶的識(shí)別序列：GAATCG,AAATTT,GATATC,ACGGCA?為什么?GATATC;AAATTT，因?yàn)樗鼈兪腔匚男蛄小?.當(dāng)兩種限制性內(nèi)切核酸酶的作用條件不同時(shí)，若要進(jìn)行雙酶切，應(yīng)采取什么措施？為什么？注意星活性，先低鹽，后高鹽；先低溫酶，后高溫酶；并且可以直接在換酶前將第一種酶失活，再加第二種酶，否則，易產(chǎn)生星活性。或使用通用緩沖液。6.7.為什么反轉(zhuǎn)錄酶在聚合反應(yīng)中會(huì)出錯(cuò)？由于反轉(zhuǎn)錄酶缺少在E.coliDNA聚合酶中起校正作用的3-5外切核酸酶活性，

31、所以聚合反應(yīng)往往會(huì)出錯(cuò)，在高濃度的dNTP和Mg2+下，每500個(gè)堿基中可能有一個(gè)錯(cuò)配。什么是測(cè)序酶(sequenaseTM)?8.mapping)?S1核酸酶作圖是一種對(duì)RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的末端和剪接位點(diǎn)進(jìn)行作圖的方法9YAC載體具有什么樣的功能性DNA序列?為什么在克隆大片段時(shí)，YAC具有優(yōu)越性？所謂測(cè)序酶即是修飾了的T7DNA聚合酶，是采用缺失的方法，從外切核酸酶結(jié)構(gòu)域中除去28個(gè)氨基酸，這樣使T7DNA聚合酶完全失去了3-5的外切核酸酶活性，只有5-3聚合酶的活性，而且聚合能力提高了39倍，測(cè)序時(shí)常用此酶。什么是S1核酸酶作圖(S1nucleaseYAC帶有天然染色體所有的功能元件，包括一

32、個(gè)著絲粒，一個(gè)DNA復(fù)制起點(diǎn)，兩個(gè)端粒。YAC能夠容納長(zhǎng)達(dá)幾百kb的外源DNA,這是質(zhì)粒和黏粒辦不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色體步移中每次允許更大的步移距離，同時(shí)能夠減少完整基因組文庫所需的克隆數(shù)目。10列舉質(zhì)粒載體必須具備的4個(gè)基本特性。獨(dú)立復(fù)制；有選擇標(biāo)記；(3)有獨(dú)特的酶切位點(diǎn)；(4)能轉(zhuǎn)化但不擴(kuò)散。什么叫穿梭載體？含有細(xì)菌質(zhì)粒和克隆的真核生物DNA片段的雜種質(zhì)粒，有兩個(gè)復(fù)制起點(diǎn)和既能在細(xì)菌又能在真核細(xì)胞中進(jìn)行選擇的選擇標(biāo)記，所以，很容易從一宿主轉(zhuǎn)到另一個(gè)宿主(來回穿梭)。如何將野生型的噬菌體改造成為一個(gè)理想的載體？削減分子量(除去非必需區(qū)和整合區(qū))；削減酶切位點(diǎn)；添

33、加選擇標(biāo)記；(4)引入終止突變PCR的基本原理是什么?用PCR擴(kuò)增某一基因，必須預(yù)先得到什么樣的信息？DNA半保留復(fù)制的原理，在體外進(jìn)行DNA的變性、復(fù)性和引物延伸。至少要預(yù)先知道足夠合成一對(duì)引物的靶DNA序列。cDNA克隆與基因組克隆有何不同？基因組克隆包含所有不在cDNA中出現(xiàn)的內(nèi)含子。怎樣將一個(gè)平末端DNA片段插入到EcoRI限制位點(diǎn)中去？化學(xué)合成一些長(zhǎng)為1Obp含有EcoRI識(shí)別位點(diǎn)的短的DNA片段，然后與待克隆片段兩端連接起來，如果用EcoRI切割這種連接片段，就會(huì)產(chǎn)生EcoRI的單鏈末端。這種片段就可以插入到任何EcoRI的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)中簡(jiǎn)述以黏粒為載體構(gòu)建基因文庫的原理。CO

34、S位點(diǎn)可以自身環(huán)化；(2)可以利用COS位點(diǎn)包裝噬菌體顆粒；可以感染寄主細(xì)胞；(4)利用質(zhì)粒復(fù)制子復(fù)制，不整合、不裂解。酵母人工染色體要在酵母細(xì)胞中穩(wěn)定存在，必須有哪些基本的結(jié)構(gòu)？著絲粒；(2)端粒；(3)ARS序列。何謂YAC?主要特性是什么？含有來自其他生物DNA的酵母人工染色體，叫YAC；主要特性是可以克隆較大的外源片段。Muller的PCR反應(yīng)同大腸桿菌體內(nèi)的DNA復(fù)制有哪些不同？你認(rèn)為根本的差別在哪里？PCR用雙引物，體內(nèi)復(fù)制用單引物。欲將一真核生物的結(jié)構(gòu)基因克隆后轉(zhuǎn)移到原核生物（如E.coli）中進(jìn)行表達(dá)，克隆時(shí)應(yīng)注意哪些問題？應(yīng)注意的問題有：?jiǎn)?dòng)子、密碼子、剪接、分泌。假定你分離

35、到一個(gè)E.coli的Thy-突變體，并推測(cè)有可能是ThyA基因突變。請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)方案用PCR從染色體DNA擴(kuò)增突變的ThyA基因，測(cè)定突變的序列。（注：E.coli野生型的ThyA基因的序列是已知的）為了擴(kuò)增突變體的thyA基因，先設(shè)計(jì)一對(duì)引物，其中一個(gè)引物的序列與thyA基因的5端相同，另一個(gè)引物同該基因的3端互補(bǔ)。在引物的5端加上合適H類限制性內(nèi)切核酸酶的識(shí)別序列，以便于后來的克隆。將染色體DNA同引物混合后，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。然后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，純化擴(kuò)增片段，可以直接測(cè)序或克隆到合適的載體再測(cè)序。22.你在做Southern印跡分析，并且剛完成了凝膠電泳這一步。根據(jù)方案，下面一步驟是用N

36、aOH溶液浸泡凝膠，使DNA變性為單鏈。為了節(jié)省時(shí)間，你略過了這一步，直接將DNA從凝膠轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上。然后用標(biāo)記探針雜交，最后發(fā)現(xiàn)放射自顯影片是空白。錯(cuò)在哪里？如果你的雜交探針是雙鏈的，可能因?yàn)樵诩尤穗s交混合物之前忘記將探針變性而得到空白的放射自顯影結(jié)果。23切口移位(nicktranslation)標(biāo)記探針的主要步驟有哪些？DNasel造成切口；DNA聚合酶Ill的53外切核酸酶進(jìn)行切割；DNA聚合酶川的53合成酶進(jìn)行修補(bǔ)；在修補(bǔ)過程中，隨著切口(nick)的移動(dòng)，將放射性的底物摻人到雙鏈DNA中。用EcoRI和Hind川分別切割同一來源的染色體DNA，并進(jìn)行克隆，在前者的克隆中篩選到A基因，但在后者的克隆中未篩選到A基因，請(qǐng)說明原因。原因是：Hind川的切點(diǎn)在A基因內(nèi)。什么是Western印跡？它與Southern印跡有什么不同？Western印跡是將蛋白質(zhì)經(jīng)電泳分離后從凝膠中轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然后用特異性的抗體