1、高原嚴重燒傷延遲復蘇大鼠腦損傷與興奮性氨基酸程度變化【摘要】目的：觀察高原嚴重燒傷延遲復蘇后早期大鼠腦損傷及興奮性氨基酸含量的變化.方法：130只雄性istar大鼠隨機分為燒傷即時復蘇組(n=60)、燒傷延遲復蘇組(n=50)和正常對照組(高原地區正常對照組n=10和蘭州地區正常對照組n=10).前兩組動物被制成高原海拔3800燒傷實驗動物模型TBSA30，度.運用高效毛細管電泳法檢測腦組織中興奮性氨基酸谷氨酸，Glu含量，采用干、濕重比重法測定腦組織含水量，原位末端標記TUNEL觀察腦皮質神經細胞凋亡.結果：從蘭州地區急進高原后，大鼠腦組織Glu含量、腦組織含水量、腦皮質中TUNEL陽性細胞

2、數均未發生明顯改變P0.05；高原嚴重燒傷后腦組織Glu程度于傷后1h即顯著降低，持續至傷后24h，于傷后72h恢復至正常程度P0.05；延遲復蘇組腦組織Glu程度在觀察時限內均低于上述兩正常對照組，延遲復蘇組與即時復蘇組相比除在傷后12h時相點無統計學差異外，其余時相點均低于即時復蘇組P0.05.而腦組織含水量于傷后6h開場升高，于24h達頂峰，于傷后7d降至正常程度；高原燒傷延復組變化趨勢同高原燒傷即復組，但傷后7d仍未恢復.腦皮質TUNEL陽性細胞在傷后1h即增多，也于傷后24h達頂峰，傷后7d仍高于正常程度.結論：由蘭州地區急進到高原地區，并缺乏以導致大鼠腦組織中興奮性氨基酸含量發生變

3、化及大鼠腦水腫的發生和腦皮質凋亡細胞數的增加；高原嚴重燒傷及延遲復蘇后，細胞外興奮性氨基酸減少，同時伴有受傷大鼠迅速出現腦水腫，腦皮質凋亡細胞顯著增加.【關鍵詞】燒傷；延遲復蘇；興奮性氨基酸類；腦水腫；細胞凋亡；大鼠0引言嚴重燒傷引起的腦損傷及腦水腫在平時和戰時均很常見，已有大量文獻報道1-3.大量研究顯示興奮性氨基酸exitatryainaids,EAAs的大量釋放而產生的毒性作用，在加重繼發性腦損傷中起重要作用.本研究利用大鼠嚴重燒傷后即時復蘇與延遲復蘇模型，初步觀察高原嚴重燒傷延遲復蘇后早期大鼠腦組織中興奮性氨基酸含量變化及與腦損傷的關系.1材料和方法1.1材料1.2方法致傷前1k，置室

4、溫1925.實驗前24h用電推推去背部被毛，單籠飼養.實驗前12h禁食、水.用含10g/L的戊巴比妥鈉ip注射麻醉40g/kg后，除正常對照組外，于大鼠背部建立30%度燙傷模型病理證實.致傷條件為90，20s.正常對照組：模擬燙傷37水浴，20s.動物隨機分為4組：高原燒傷即時復蘇組高傷即復，n=60，傷后立即腹腔注射等滲鹽水按Parkland公式4L/kg；設立觀察與檢測時間點：1hPB1h，6hPB6h，12hPB12h，24hPB24h，72hPB72h，7dPB7d；高原燒傷延遲復蘇組高傷延復，n=50，傷后6h開場補液；設立觀察與檢測時間點：PB6h，PB12h，PB24h，PB72

5、h，PB7d；高原正常對照組高正常，n=10，不補液.蘭州地區正常對照組蘭正常，n=10，海拔1517，不補液.高傷即復組大鼠于傷后1，6，12，24，72h，7d6個時相點，高傷延復組大鼠于傷后6，12，24，72h，7d5個時相點分別取材，每個時相點各取10只動物，固定于實驗臺，于各時相點抽血后，將大鼠斷頭，迅速取腦，置0冰鹽水沖洗，去除血液、大血管等結締組織，吸干；用0.1l/L磷酸緩沖液沖洗后，用雙面刀片于腦正中線將腦組織縱形剖開，將大腦左半球切取完好的薄片約0.5后置于40g/L的中性甲醛混合固定液，放于4冰箱，用于光鏡檢查及免疫組織化學檢測.將上述剩余腦組織大腦皮質，用電子天平稱重

6、后置于80烤箱36h再稱重，利用組織干濕重比值，觀察腦組織含水量，以檢測腦水腫的變化.將大腦右半球迅速放置于凍存管中置于液氮中保存，用于興奮性氨基酸的檢測.谷氨酸含量采用高效毛細管電泳法4檢測腦組織中谷氨酸含量.所得結果用l/g表示.腦組織含水量采用干濕比重法測定5：腦組織含水量=濕重-干重/濕重100%.細胞凋亡實驗步驟按文獻6及說明書并稍作改良進展.DAB顯色，顯微鏡下觀察，細胞核中出現棕黃色顆粒者為TUNEL陽性細胞，即凋亡細胞.統計學處理：所得數據以xs表示，采用SPSS統計軟件對組間差異進展單因素方差分析及兩兩比擬，P0.05為有統計學意義.2結果2.1谷氨酸濃度變化急進高原高正常后

7、腦組織Glu程度較蘭正常組稍降低，但統計學無差異P0.05；高原嚴重燒傷后，高傷即復組Glu程度于傷后1h即顯著低于上述兩正常對照組，于傷后6h開場上升，于12h再次下降，傷后24h又升高，傷后72h恢復至正常程度P0.05；高傷延復組腦組織Glu程度在觀察時限內均低于上述兩正常對照組，高傷延復組與高傷即復組相比除在傷后12h時相點無統計學差異外，其余時相點均低于高傷即復組P0.05,圖1.P0.05.高原嚴重燒傷后，高傷即復組于傷后6h腦組織含水量開場升高，傷后24h達頂峰，隨后下降，傷后7d降至正常程度；高傷延復組變化趨勢同高傷即復組，也于傷后24h達頂峰，但傷后7d仍高于上述兩正常對照組

8、，且兩組間對應時相點相差無統計學意義P0.05,圖2.2.3細胞凋亡蘭正常組腦皮質中只檢測到很少的TUNEL陽性細胞2個/高倍視野，高正常組腦皮質中TUNEL陽性細胞數較蘭正常組稍增高3.67個/高倍視野，但兩者無統計學差異；而高傷即復組腦皮質在各時相點均檢測到的TUNEL陽性細胞較上述兩正常對照組明顯增多P0.01，隨著受傷時間的延長，標本TUNEL陽性細胞逐漸增多，于傷后24h達頂峰233.67個/高倍視野，此后TUNEL陽性細胞數那么呈現下降趨勢，傷后7d仍顯著高于上述兩正常對照組.高傷延復組腦皮質中TUNEL陽性細胞數變化趨勢根本與高傷即復組一樣，于傷后6h顯著升高，但于12h有一個下

9、降過程，隨后開場增加，也于24h達峰值(216個/高倍視野,圖3)；但高傷即復組及高傷延復組在上述各時相點所檢測到的凋亡細胞數無統計學差異P0.05).TUNEL標記陽性的細胞核被染成棕褐色，胞漿復染為淡藍色.3討論海拔3000，大多數人在靜息狀態下可出現不同程度的高原反響，隨著海拔高度的增高，高原病的發病率逐漸增加7.腦組織對氧的需求量高，對缺氧的耐受性差，是機體對缺氧最敏感的組織8.腦缺血再灌注損傷的機制非常復雜，能量代謝、細胞內鈣、細胞凋亡、興奮性氨基酸毒性、細胞因子、氧自由基RS產生和炎癥反響等可能與再灌注損傷有關9.本研究在高原海拔3800實地環境條件下研究高原大鼠嚴重燒傷延遲復蘇后腦組織興奮性氨基酸含量動態改變及與腦損傷的關系.黎海濤等10報道犬嚴重燒傷早期即有腦水腫形成，傷后12h已十清楚確.本研究結果顯示，由蘭州地區1517飼養的大鼠通過急進高原地區38