1、-全國艾滋病檢測技術規(guī)范(2015年修訂版) 附件1 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修訂版） 中國疾病預防控制中心 二一五年十二月 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修訂版） 中國疾病預防控制中心 二一五年十二月 I 前 言 艾滋病在我國的流行已數(shù)十年，隨著感染者和臨床病人的不斷增加、感染人群的變化，艾滋病檢測工作量逐漸加大，對監(jiān)測和檢測的需求也不斷增加，承擔艾滋病檢測的實驗室已遍及全國各級醫(yī)療、疾病預防控制

2、、采供血、婦幼保健機構(gòu)，出入境檢驗檢疫、軍隊等各個系統(tǒng)。為了盡早發(fā)現(xiàn)HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨詢、治療，同時為適應基層艾滋病檢測工作需求，在新的形勢下，根據(jù)關于艾滋病抗病毒治療管理工作的意見、中國預防與控制艾滋病中長期規(guī)劃（19982010年）、中國遏制與防治艾滋病十二五行動計劃的通知（國辦發(fā)20124號）、“四免一關懷”等國家艾滋病防治重要方針政策和十三五防治工作重點，在廣泛征求各省、市疾病預防控制機構(gòu)和醫(yī)療機構(gòu)意見的基礎上，在中華人民共和國衛(wèi)生和計劃生育委員會艾滋病專家及省級專家的參與下，中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心對全國艾滋病檢測技術規(guī)范（2009年版）進行修改、

3、增補和完善，制定出全國艾滋病檢測技術規(guī)范（2015年版）（以下簡稱規(guī)范），使其既能滿足目前艾滋病檢測工作的實際需求，又能體現(xiàn)檢測技術的發(fā)展。 本次規(guī)范修訂工作立足于我國目前檢測狀況，結(jié)合發(fā)達國家使用的指南，主要對以下幾個方面內(nèi)容進行了修改、增補和完善：（1）完善了不同的檢測策略，并將其整合為獨立的一章；（2）增加了HIV-1新 II 發(fā)感染檢測一章；（3）新增補充試驗概念,其內(nèi)容包括抗體確證試驗（WB，RIBA/LIA等）和核酸試驗（定性和定量試驗）；（4）增加了第4代試劑（抗原抗體聯(lián)合檢測試劑）的檢測流程 ；(5)增加核酸檢測流程；(6)完善了檢測報告。將抗體篩查和復檢報告整合為 HIV抗體

4、篩查檢測報告，增加HIV-1核酸檢測報告和嬰兒艾滋病感染早期診斷檢測報告，取消了流行病檢測HIV抗體檢測報告單、艾滋病病毒抗體檢測數(shù)和陽性人數(shù)統(tǒng)計報表、艾滋病職業(yè)暴露個案登記表和艾滋病防治工作人員職業(yè)暴露事故匯總表；（7） 取消實驗室生物安全一章和艾滋病檢測實驗室質(zhì)量管理一章。 所有附表的檢測報告僅供使用實驗室參考。 本規(guī)范由中國疾病預防控制中心批準,下發(fā)至全國艾滋病檢測實驗室及有關單位。本規(guī)范將為國家、相關部委下發(fā)的艾滋病防治工作各項政策法規(guī)的有效實施提供強有力的技術支持，并具體指導艾滋病實驗室技術人員開展日常工作。 本規(guī)范起草單位：中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心。 本規(guī)范參加編

5、寫單位：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院、上海市疾病預防控制中心、中國醫(yī)科大學、北京出入境檢驗檢疫局、云南省疾病預防控制中心、四川省疾病預防控制中心、浙江省疾病預防控制中心、河南省疾病預防控制中心、北京市紅十字血液中心、衛(wèi)生部臨床檢驗中心、江蘇省疾病預防控制中心、陜西省疾病預防控制中心、安徽省疾病預防控制中心、首都醫(yī)科大學附屬北京佑安醫(yī)院、北京市疾病預防 III 控制中心。 本規(guī)范編寫組人員：蔣巖、汪寧、李敬云、鐘平、尚紅、邵一鳴、肖瑤、朱紅、邢文革、姚均、潘品良、邱茂鋒、馬艷玲、梁姝、郭志宏、王哲、葛紅衛(wèi)、王盈、李金明、徐曉琴、常文輝、吳建軍、張福杰、吳昊、蘇雪麗、廖玲潔。 本規(guī)范參加編寫主要國

6、際機構(gòu)：世界衛(wèi)生組織（Po-lin CHAN、張嵐）。美國疾病預防控制中心GAP項目（ Colin Shepard、郝玲、齊明山）。 本規(guī)范編寫工作聯(lián)系人：肖瑤。 本規(guī)范自發(fā)布之日起實施，同時終止全國艾滋病檢測技術規(guī)范(2009年版)。 本規(guī)范適用于全國艾滋病檢測實驗室。 本規(guī)范解釋權屬于中國疾病預防控制中心。 致謝：感謝蓋茨基金會在規(guī)范修訂過程中給予技術和人力等方面的支持。 IV 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 目 錄 第一章 樣品的采集和處理 . 6 1 范圍 . 6 2 規(guī)范性文件引用 . 6 3 樣品種類及相應的用途 . 7 4 操作步驟 . 7 4.1 采樣前準備. 7 4.2 樣品的采集和

7、處理. 8 4.3 樣品的保存. 10 4.4 樣品的運送. 11 4.5 樣品的接收. 12 第二章 HIV抗體檢測 . 13 1 范圍 . 13 2 規(guī)范性文件引用 . 13 3 HIV抗體檢測實驗室要求 . 13 4 HIV抗體檢測的目的和要點 . 14 4.1 HIV抗體檢測的目的. 14 4.2 HIV抗體檢測的要點. 14 5 常規(guī)HIV抗體檢測方法 . 15 5.1 試劑和樣品. 15 5.2 方法. 15 6 結(jié)果報告 . 17 6.1 篩查報告. 17 6.2 WB及 RIBA/LIA報告. 18 7 質(zhì)量控制 . 18 7.1 酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制. 18 7

8、.2 快速法抗體檢測質(zhì)控. 22 第三章 HIV-1新發(fā)感染檢測 . 24 1 范圍 . 24 2 規(guī)范性文件引用 . 24 3 新發(fā)感染檢測實驗室要求 . 24 4 目的 . 24 1 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 5 新發(fā)感染檢測方法 . 25 5.1 方法學原理. 25 5.2 方法. 25 5.3 樣品的入選標準和排除標準. 26 5.4 結(jié)果處理和解釋. 27 5.5 數(shù)據(jù)分析. 28 6質(zhì)量控制 . 30 6.1 人員培訓. 30 6.2 樣品質(zhì)控. 30 6.3 試劑質(zhì)控. 31 6.4 實驗過程質(zhì)控. 31 第四章 HIV-1抗原檢測 . 32 1 范圍 . 32 2 規(guī)范性文件引用

9、 . 32 3 HIV1P24抗原檢測的意義 . 32 4 實驗室要求 . 32 5 檢測方法及程序 . 33 5.1 試劑. 33 5.2 樣品. 33 5.3 定性檢測. 33 5.4 定量檢測. 35 5.5 結(jié)果報告和解釋. 35 6 質(zhì)量控制 . 36 6.1 定性檢測. 36 6.2 定量檢測. 37 第五章 HIV核酸檢測 . 38 1 范圍 . 38 2 規(guī)范性文件引用 . 38 3 核酸檢測的意義 . 39 3.1 HIV-1感染診斷. 39 3.2 治療效果監(jiān)測. 40 3.3 病程監(jiān)控及預測. 40 3.4 耐藥性監(jiān)測. 40 4 HIV核酸檢測實驗室要求 . 41 2

10、全國艾滋病檢測技術規(guī)范 4.1 實驗室的設計及工作基本原則. 41 4.2 實驗室人員和要求. 41 4.3 實驗室生物安全. 41 5 HIV-1核酸檢測方法及程序 . 41 5.1 HIV-1核酸定性檢測. 41 5.2 HIV核酸定量檢測. 43 5.3 集合核酸定性檢測 . 45 5.4 HIV核酸即時檢測 . 47 6 質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 . 47 6.1 實驗室分區(qū)和環(huán)境. 47 6.2 儀器設備質(zhì)量控制. 48 6.3 檢測過程質(zhì)量控制. 48 6.4 外部質(zhì)量控制. 48 第六章 艾滋病病毒感染實驗室檢測策略 . 49 1 范圍 . 49 2 規(guī)范性文件引用 . 49 3 疫情

11、監(jiān)測相關的檢測策略及結(jié)果報告 . 49 3.1 HIV匿名無關聯(lián)檢測流程. 49 3.2 HIV匿名關聯(lián)檢測流程. 50 4 臨床診斷相關的檢測策略及結(jié)果報告 . 50 4.1 使用抗體檢測試劑的檢測流程. 50 4.2 使用抗原抗體檢測試劑的檢測流程. 51 4.3 補充試驗檢測策略. 53 5 血液篩查相關的檢測策略及結(jié)果報告 . 58 6 嬰兒HIV-1感染早期診斷相關的檢測策略及結(jié)果報告 . 61 6.1 核酸檢測策略（RNA/DNA）. 61 6.2 抗體檢測策略及結(jié)果報告. 63 第七章 HIV-1基因型耐藥檢測 . 65 1 范圍 . 65 2 規(guī)范性文件引用 . 65 3 HI

12、V-1基因型耐藥檢測的意義 . 66 3.1 群體耐藥監(jiān)測. 66 3.2 個體耐藥檢測. 66 4 HIV-1基因型耐藥檢測實驗室要求 . 67 3 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 4.1 實驗室功能分區(qū). 67 4.2 實驗室人員和要求. 67 4.3 設施和設備. 68 5 HIV-1基因型耐藥檢測方法及程序 . 68 5.1 樣品. 68 5.2 檢測原理. 68 5.3 檢測方法. 68 5.4 耐藥分析. 69 6 質(zhì)量保證與質(zhì)量控制 . 70 6.1 室內(nèi)質(zhì)控. 70 6.2 外部質(zhì)控. 71 第八章 CD4+和CD8+T淋巴細胞檢測 . 72 1 范圍 . 72 2 規(guī)范性文件引用 .

13、 72 3 CD4+ 和CD8+T淋巴細胞檢測的意義 . 73 3.1 HIV感染臨床分期. 73 3.2 HIV感染兒童免疫抑制分級和治療輔助指標. 73 3.3 疾病進展監(jiān)測. 73 3.4 機會性感染的風險評估. 73 3.5 抗病毒治療適應癥選擇及療效評價. 73 3.6 CD8+T淋巴細胞為抑制性/細胞毒性T細胞. 74 4 CD4+ 和CD8+T淋巴細胞檢測實驗室要求 . 74 4.1 人員. 74 4.2 功能分區(qū). 74 4.3 設施和設備. 74 5 常規(guī)CD4+ 和CD8+T淋巴細胞檢測的方法和程序 . 75 5.1 樣品采集、運輸和接收. 75 5.2 方法. 76 5.

14、3 試劑. 78 5.4 實驗資料的記錄. 78 5.5 結(jié)果報告. 78 6 質(zhì)量控制 . 79 第九章 HIV-1的分離培養(yǎng) . 81 1 范圍 . 81 4 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 2 規(guī)范性文件引用 . 81 3 HIV-1分離的意義 . 81 3.1 HIV抗體不確定或HIV-1陽性母親所生嬰兒的鑒別診斷及診斷. 81 3.2 HIV表型耐藥檢測及其他HIV生物學特征的研究。. 81 3.3 HIV 感染的輔助診斷HIV-1感染窗口期。. 81 4 實驗室要求 . 81 4.1 實驗室. 81 4.2 設備. 81 4.3 材料. 81 5 HIV-1分離的方法及程序 . 82 5.

15、1 樣本. 82 5.2 靶細胞制備. 82 5.3 建立共培養(yǎng). 82 5.4 監(jiān)測病毒生長. 82 5.5 病毒鑒定。. 82 5.6 判定結(jié)果和解釋. 82 6 質(zhì)量控制 . 83 附表1 HIV抗體篩查檢測報告 . 84 附表2 HIV抗體確證檢測報告 . 85 附表3 HIV-1核酸檢測報告 . 86 附表4 HIV抗體確證檢測報告（特定條件） . 87 附表5 CD4+T淋巴細胞檢測報告 . 88 附表6 HIV-1耐藥基因型檢測報告 . 89 附表7 嬰兒艾滋病感染早期診斷檢測報告 . 90 5 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 第一章 樣品的采集和處理 1 范圍 本章規(guī)定了用于人免疫缺陷

16、病毒（HIV）檢測的全血、血清、血漿、細胞、口腔黏膜滲出液、尿液以及濾紙干血斑（DBS）樣品的采集和處理方法，適用于HIV抗體、抗原、核酸、基因亞型、耐藥檢測、CD4+和CD8+T淋巴細胞數(shù)測定及HIV分離培養(yǎng)。 2 規(guī)范性文件引用 艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準 WS -293有效版本。 艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴細胞檢測質(zhì)量及保證指南（中國疾病預防控制中心，2013年版）。 HIV-1病毒載量測定及質(zhì)量保證指南（中國疾病預防控制中心，2013年版）。 HIV-1基因型耐藥檢測及質(zhì)量保證指南，（中國疾病預防控制中心，2013年版）。 Consolid

17、ated Guidelines on HIV Testing Services. WHO July 2015. 可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定，衛(wèi)生部第45號令,2006年2月1日。 6 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 3 樣品種類及相應的用途 3.1 全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品可用于HIV抗體檢測。 3.2 全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液可用于HIV抗原檢測。 3.3 抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴細胞測定。 3.4 血漿、DBS可用于HIV-1病毒載量、基因型、耐藥檢測。 3.5 淋巴細胞富集液、外周血單核淋巴細胞（PBMC）及全血可

18、用于HIV核酸定性與定量、基因型檢測和HIV-1分離培養(yǎng)。 4 操作步驟 4.1 采樣前準備 根據(jù)檢測項目的具體要求，確定采集樣品的種類、處理、保存及運輸?shù)臅r限和方法，按照臨床采血技術要求操作，遵守生物安全相關要求。檢查所需物品是否已備齊，是否在有效期內(nèi)，有無破損，是否足量，特別應檢查受檢者信息與樣品容器表面的標記是否一致，并注明樣品采集時間及唯一編碼。采集血液樣本宜選擇合適的室內(nèi)（外）采血空間，受檢者坐（臥）于合適的位置，準備采血用具、皮膚消毒用品、采血管及試管架、硬質(zhì)廢棄物容器等。口腔黏膜滲出液樣本應使用試劑盒提供的專用采樣工具，尿液樣本建議使用可保持尿液穩(wěn)定的專用采尿管。 4.1.1 樣

19、品的編碼和記錄 4.1.2 應制定樣品編碼的標準操作程序（SOP），規(guī)定樣品編碼的原則和方法，為樣品制定唯一性編碼（編號），保證其唯一性。 4.1.3 采血前，先對試管或濾紙進行標記，核對后編碼。要將標簽貼在 7 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 試管的側(cè)面，推薦使用預先印制好的、專門用于冷凍儲存的耐低溫標簽。干血斑濾紙應使用具有資質(zhì)的產(chǎn)品。 4.1.4 口腔黏膜滲出液樣本應采集口腔滲出液,不是唾液。 4.1.5 尿液樣本準備好帶有唯一編碼的采尿管，并保留唯一編碼。 4.1.6 應使用專門的樣品記錄本或登記表記錄樣品，同時錄入電腦保存。 4.2 樣品的采集和處理 4.2.1 血液 4.2.1.1 抗凝全

20、血：消毒局部皮膚，用加有抗凝劑（EDTA鈉鹽或鉀鹽、枸櫞酸鈉、肝素鈉）的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中，輕輕顛倒混勻68次，備用。 4.2.1.2 末梢全血：消毒局部皮膚（成人和1歲以上兒童可選擇耳垂、中指、無名指或食指。1歲以下兒童采用足跟部）。用采血針刺破皮膚，用無菌紗布擦掉第一滴血。收集滴出的血液，備用。 4.2.1.3 血漿：將采集的抗凝全血15003000r /min離心15分鐘，上層即為血漿，吸出置于合適的容器中，備用。 4.2.1.4 血清：根據(jù)需要，用不含抗凝劑的真空采血管抽取510ml靜脈血，或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至無抗

21、凝劑的試管中，室溫下自然放置12小時，待血液凝固、血塊收縮后再用15003000r/min離心15分鐘，吸出血清，置于合適的容器中，備用。 4.2.1.5 淋巴細胞富集液：將采集的抗凝全血15003000r/min離心15分鐘，吸取血漿層下的淋巴細胞富集液，置于合適的容器中，備用。 8 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 4.2.1.6 PBMC：使用淋巴細胞分離液，進行密度梯度離心，吸出PBMC層，置于合適的容器中，備用。 4.2.1.7 抗凝劑的選擇：根據(jù)檢測要求選用適當?shù)目鼓齽鏑D4+和CD8+T淋巴細胞測定可選用EDTA鈉鹽或鉀鹽、枸櫞酸鈉、肝素鈉；HIV-1病毒分離、核酸定性/定量檢測可選用

22、EDTA鈉鹽或鉀鹽或枸櫞酸鈉。 4.2.1.8 樣品采集后處理、保存、運輸?shù)臅r限和條件，因不同的檢測項目而異，應參見不同檢測項目要求。 4.2.1.9 采血完成后的穿刺針頭必須丟棄于放置尖銳危險品容器內(nèi)，妥善處理，防止發(fā)生職業(yè)暴露。 4.2.2 濾紙干血斑 4.2.2.1 根據(jù)需要，可將采集的各種血液樣品制備成濾紙干血斑，用于檢測。最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血漿制備濾紙干血斑。 4.2.2.2 用移液器從樣品管中吸取100L抗凝全血（或血漿），對準濾紙印圈的中心處，將樣品滴在濾紙上，或?qū)⒋┐毯笞云つw傷口流出的末梢全血直接滴加在濾紙印圈的中心處。 4.2.2.3 根據(jù)需要，連續(xù)在數(shù)個印圈上

23、滴加樣品。 4.2.2.4 于室溫下自然干燥至少4小時（潮濕氣候下至少干燥24小時），不要加熱或堆疊血斑，勿與其它界面接觸。 4.2.2.5 血斑充分干燥后，將其放入密封袋中，每張干血斑單獨保存，避免血斑之間的相互污染，同時放入干燥劑及濕度指示卡，密封包裝，保存?zhèn)溆谩?4.2.3 尿液和口腔黏膜滲出液 9 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 4.2.3.1 尿液：推薦使用專用采尿管，保持尿液穩(wěn)定。尿液樣品可采集隨機尿，女性經(jīng)期應取中段尿。 4.2.3.2 口腔黏膜滲出液：使用試劑盒提供的容器收集樣品。存放時間和是否凍存以試劑盒說明書為準。口腔黏膜滲出液應采集口腔滲出液,不是唾液。 4.3 樣品的保存 4.

24、3.1 用于抗體和抗原檢測的血清或血漿樣品，短期（1周）內(nèi)進行檢測的可存放于28，一周以上應存放于-20以下。 4.3.2 用于核酸檢測的血漿和血細胞樣品4天內(nèi)進行檢測的可存放于4，3個月以內(nèi)應存放于-20以下。3個月以上應置于-70以下保存。 4.3.3 口腔黏膜滲出液樣品應即刻使用，需要保存應以產(chǎn)品說明書為準。 4.3.4 尿液樣品，使用專用采尿管，室溫下可保存2周，一年之內(nèi)存放宜在28。長期保存（一年以上）的樣本凍存條件、是否添加防腐劑等以產(chǎn)品說明書為準。 4.3.5 用于CD4+T淋巴細胞檢測的全血樣品，室溫保存，時間不超過24小時。如果用CD45設門，樣品保存不超過72小時。 4.3

25、.6 篩查陽性樣品應及時進行補充試驗，篩查陰性樣品，可根據(jù)具體需要決定保存時間，建議至少保存1個月。特殊用途或?qū)ｍ楉椖康臉悠犯鶕?jù)具體要求確定保存時間。補充試驗陽性樣品按照國家生物樣品管理的有關規(guī)定執(zhí)行。 10 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 4.4 樣品的運送 4.4.1 全血、血漿的運送應符合生物安全要求，參照可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定(衛(wèi)生部第45號令,2006年2月1日執(zhí)行)。 4.4.2 血液樣品運送時應采用三層容器對樣品進行包裝，隨樣品應附有與樣品唯一性編碼相對應的送檢單。送檢單應標明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應放置在第二層和第三層容器之間。 4.4.2.

26、1 第一層容器：直接裝樣品，應防滲漏。樣品應置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應有明顯的標記，標明樣品的唯一性編碼或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。 4.4.2.2 第二層容器：容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。要求不易破碎、帶蓋、防滲漏、容器的材料要易于消毒處理。 4.4.2.3 第三層容器：容納并保護第二層容器的運輸用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標簽，注明數(shù)量、收樣和發(fā)件人及聯(lián)系方式，同時要注明“小心輕放、防止日曬、小心水浸、防止重壓”等字樣，還應易于消毒。 4.4.2.4 用于抗體檢測的血清和血漿樣品應在凍存條件下運送用于CD4+和CD8+T淋巴細

27、胞測定的樣品應在室溫下（1825）運送。用于病毒載量檢測的樣品應在-20以下運輸。DBS和尿液樣品應在室溫下（1825）運送，可通過郵寄方式運送。 4.4.2.5 運送樣品必須有記錄。 11 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 4.5 樣品的接收 4.5.1 樣品包裹必須在具有處理感染性材料能力的實驗室內(nèi)、由經(jīng)過培訓的工作人員打開，打開包裹時應穿戴防護衣、戴口罩和防護眼鏡，在生物安全柜中打開，用后的包裹應及時進行消毒。 4.5.2 核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應立即將尚存留的樣品移出，對樣品管和盛器消毒，同時報告實驗室負責人和上一級實驗室技術人員。 4.5.3 檢查樣品的狀況，記

28、錄血液樣品有無嚴重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。記錄干血斑和尿液樣品包裝是否完整，如果污染過重或者不符合接收要求，應將樣品安全廢棄。并立即將樣品情況通知送樣人，要求重新采集樣品。 4.5.4 接收樣品時應填寫樣品接收單。 12 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 第二章 HIV抗體檢測 1 范圍 本章規(guī)定了HIV抗體的檢測方法、結(jié)果報告及質(zhì)量控制。適用于各級各類醫(yī)療、疾病預防控制、檢驗檢疫、采供血及衛(wèi)生保健機構(gòu)。可作為對HIV感染者診斷和監(jiān)測的實驗室依據(jù)。 2 規(guī)范性文件引用 艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準（中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準，WS293-有效版本）。 Consolidated Gui

29、delines on HIV Testing Services. WHO July 2015 Statement from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Office of the Global AIDS Coordinator.26 Nov.2006. Guidelines for using HIV testing technologies in surveillance. UNAIDS/WHO.2009. 艾滋病病毒抗體快速檢測技術手冊（中國疾病預防控制中

30、心，2011年版。 3 HIV抗體檢測實驗室要求 應符合國家對實驗室生物安全的有關要求。 13 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 實驗室的質(zhì)量控制按本規(guī)范相關章節(jié)規(guī)定執(zhí)行。 4 HIV抗體檢測的目的和要點 4.1 HIV抗體檢測的目的 4.1.1 HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。 4.1.2 以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需要進行的體檢等。 4.1.3 以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。 4.1.4 以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢，包括各類高危人群、重點人群和一般人群

31、。 4.2 HIV抗體檢測的要點 4.2.1 根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。 4.2.2 嚴格遵守實驗室標準操作程序（SOP）。 4.2.3 結(jié)果判定以試劑盒說明書為標準。 4.2.4 篩查試驗有反應，須作補充試驗。 補充試驗是通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感染的檢測方法。補充試驗包括抗體確證試驗（免疫印跡試驗，條帶/線性免疫試驗，特定條件*下的替代檢測，免疫層析或免疫滲濾試驗）和核酸試驗（核酸定性和核酸定量試驗）。替代檢測包括三種酶聯(lián)免疫試驗、三種快速試驗或酶聯(lián)免疫加快速試驗* * 特定條件：高流行地區(qū)（流行率大于5%）、高危人群（如男男同性戀，吸毒人群

32、）、三種試劑均經(jīng)過使用地區(qū)中心實驗室評價。 4.2.5 篩查試驗無反應，不應做補充試驗。 14 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 4.2.6 對篩查及補充試驗對象均應做好咨詢工作。 5 常規(guī)HIV抗體檢測方法 5.1 試劑和樣品 必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊批準、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的方法及試劑。 樣品可采用血清、血漿、全血、濾紙干血斑、口腔黏膜滲出液和尿液。 5.2方法 5.2.1 篩查方法 5.2.1.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 這類試驗可使用血液（包含血清、血漿和濾紙干血斑）、尿液樣品，ELISA多為HIV抗體檢測試劑。HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑可

33、同時檢測血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標記的HIV抗原/抗體，加底物顯色，用酶標儀測定結(jié)果。有效試驗的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。 5.2.1.2 化學發(fā)光或免疫熒光試驗（CIA/IFA） 這類試驗采用發(fā)光或熒光底物，可使用血液(包含血清和血漿)、尿液樣品，既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶或熒光標記的HIV抗原/抗體，加發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果。有效試驗的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。 5.2.1.3 快速檢測（RT）及其它試驗 15 全國艾滋病檢測技術

34、規(guī)范 這類試驗可使用血液、口腔黏膜滲出液，操作簡便快速，適用于應急檢測、門診急診檢測、VCT及檢測點等。一般可在1030分鐘內(nèi)得出結(jié)果。 明膠顆粒凝集試驗（PA）：是HIV抗體檢測的一種簡便方法。將HIV抗原致敏的明膠顆粒，與待檢樣品作用。當待檢樣品含有HIV抗體時，明膠顆粒與抗體發(fā)生凝集反應，根據(jù)凝集情況判讀結(jié)果。PA試劑有兩種:同時檢測HIV-1和HIV-2抗體以及分別檢測HIV-1和HIV-2抗體。有效試驗的陰性和陽性對照質(zhì)控，需符合試劑盒的規(guī)定。 免疫滲濾試驗：斑點ELISA和斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗：均以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原點狀或線狀固定在膜上，加待檢樣品，利用微孔

35、濾膜的可濾過性，使抗原抗體反應。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點或條帶。反應時間在10分鐘以內(nèi)。有效試驗的質(zhì)控點必須顯色。 免疫層析試驗：以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原線狀固定在膜上，待檢樣品沿著固相載體遷移，陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗的質(zhì)控帶必須顯色。反應時間在30分鐘以內(nèi)。 5.2.2 抗體確證試驗 5.2.2.1 免疫印跡試驗（WB） WB可使用血清、血漿和濾紙干血斑。WB采用間接法檢測樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的HIV-1蛋白分離開來，然后再把這些分離的不同蛋白帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上（或PVDF膜）。將此膜

36、切割成條狀，每一膜條上均含有經(jīng)電泳分離 16 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 過的HIV抗原。待測樣品經(jīng)適當稀釋后，加至硝酸纖維素膜上，恒溫震蕩，使其充分接觸反應，血清中若含有HIV抗體，就會與膜條上抗原帶相結(jié)合。加入抗人-IgG酶結(jié)合物和底物后，根據(jù)出現(xiàn)條帶情況, 按照試劑盒說明書判定標準，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。 5.2.2.2條帶/線性免疫試驗（RIBA/LIA） RIBA/LIA采用間接法檢測樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。試劑盒的膜條上包被有HIV-1/HIV-2不同的重組抗原片段，加入待測樣品后，其中的相應抗體與抗原發(fā)生特異性的免疫反應；隨后加入抗人IgG（堿性磷酸酶

37、標記）與HIV特異性IgG抗體相結(jié)合；加入顯色底物后，在堿性磷酸酶的催化下，特異性抗體的結(jié)合部位出現(xiàn)肉眼可見的條帶, 按照試劑盒說明書判定標準，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。 5.2.2.3 其他方法： 可用于確證的特定條件下的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗或酶聯(lián)加快速試驗，免疫層析和免疫滲濾試驗。 6 結(jié)果報告 6.1 篩查報告 HIV抗體篩查試驗報告使用附表1（HIV抗體篩查檢測報告）。篩查試驗無反應報告為“HIV抗體陰性”；有反應必須進行復檢，復檢兩次檢測均無反應報告為“HIV抗體陰性”，復檢檢測均有反應或一個有反應一個無反應需進行“補充試驗”；報告為“HIV感染待確定”，不能出具陽性報

38、告。 17 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 HIV抗體篩查報告需由一名檢驗人員和一名審核者簽字。 6.2 確證報告 6.2.1 WB及 RIBA/LIA報告 HIV抗體WB及 RIBA/LIA試驗結(jié)果報告使用附表2（HIV抗體確證檢測報告）。 （1）符合HIV-1抗體陽性判斷標準，報告“HIV-1抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告。符合HIV-2抗體陽性判斷標準，報告“HIV-2抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報告。 （2）符合HIV抗體陰性判斷標準，報告“HIV抗體陰性”。如疑似“窗口期”感染，建議進一步做HIV核酸檢測或2-4周后隨訪，盡早明確診斷。 （3）符合HIV抗體不確定判

39、斷標準，報告“HIV抗體不確定”，在備注中應注明“2-4周后復檢”或盡快做核酸檢測。 （4） HIV抗體確證檢測報告應在收到樣品后的7個工作日內(nèi)發(fā)出。 6.2.2 特定條件的用于確證的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗或酶聯(lián)加快速試驗報告。見附表4。 7 質(zhì)量控制 7.1 酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制 7.1.1 試劑盒內(nèi)部對照 試劑盒內(nèi)部對照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照。試劑盒內(nèi)部對照用于判斷每次實驗的有效性，不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每 18 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 一次檢測臨床樣品時，必須有試劑盒內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。如內(nèi)部對照結(jié)果無效，必須重新試驗。 7.1.

40、2 室內(nèi)質(zhì)控品 為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測的重復性而設置的，質(zhì)控品定值必須為弱陽性。外部質(zhì)控品的作用是判斷該批臨床樣品檢測的可信性。因此，每次實驗必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，出現(xiàn)失控時，必須重新試驗。室內(nèi)質(zhì)控品可以購買或?qū)嶒炇易孕兄苽洹?質(zhì)控品應穩(wěn)定、無菌、且不含有影響試劑反應的防腐劑。 7.1.3 Levey-Jennings質(zhì)控圖 7.1.3.1 質(zhì)控圖參數(shù) 外部質(zhì)控品的均值和標準差應建立在實驗室常規(guī)使用方法對外部質(zhì)控品重復測定的基礎上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做5個批次的檢測，每個批次中不少于4個質(zhì)控血清測定結(jié)果，以建立一個臨時性的

41、均值和標準差，當達到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時性的均值和標準差。 （1）算術平均值（x）：代表一組質(zhì)控品測定S/CO值的均值。為了統(tǒng)計學上有顯著性意義，應該采用至少20次（天）測得的外部對照質(zhì)控品的S/CO值計算平均值。 （2）標準差（s）：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一個指標，是與質(zhì)控品S/CO值均值有關的預期范圍。一組S/CO值的標準差以s表示。 （3）變異系數(shù)（cv）：是反映各次S/CO值相對于均值離散程度的一個指標，可以用來衡量檢測的重復性或精密度。 19 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 （4）控制限：由實驗室根據(jù)對外部質(zhì)控品檢測結(jié)果的均值和標準差來確定。例如，按照12S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部

42、質(zhì)控品S/CO均值加減2 個標準差；按照13S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品S/CO均值加減3個標 準差。 7.1.3.2 質(zhì)控規(guī)則 實驗室在報告結(jié)果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機審核結(jié)果來決定。目前有許多質(zhì)控規(guī)則，常用的是12S和13S規(guī)則。 （1）告警（12S）：當外部質(zhì)控品的S/CO值超出x+2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。若將12S做失控標準，有較高的假失控概率，所以一般不采用。 （2）失控（13S）：當外部質(zhì)控品的S/CO值超出x+3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機誤差或外部質(zhì)控品 穩(wěn)

43、定性下降所致。 7.1.3.3 質(zhì)控圖的分析及失控處理 實驗室應建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理的程序。 當出現(xiàn)失控時， 必須找出發(fā)生問題的原因，找出解除問題的方法，并消除原因。 7.1.4 室內(nèi)質(zhì)控其他方式“即刻法”質(zhì)控 “即刻法”質(zhì)控方法是在對同一批外部質(zhì)控品連續(xù)測定3次后，即可對第3次以后的檢驗結(jié)果進行質(zhì)控。具體計算方法如下： 7.1.4.1 將質(zhì)控品的測定值從小到大排列：x1，x2，x3?xn（x1為最小值，xn為最大值）。 20 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 7.1.4.2 計算x和s。 7.1.4.3 計算SI上限值 和SI下限值。 X最大值-x SI上限= S x-X 最小值 S SI下限= 7.1.4.4 將SI上限、SI下限與SI值表（表1）中的數(shù)字比較。 表1 SI值表 （1）當SI 上限 和SI 下限 n3s值時說明該值已在3s范圍之外， 22 全國艾滋病檢測技術規(guī)范 紙破損或污染；未達到質(zhì)量控制標準 （陽性/陰