1、激光共聚焦顯微鏡不雅察人胃癌細(xì)胞的粘附歷程和整合素1的表達(dá)徐遠(yuǎn)義黃允寧馬竟先【摘要】目的探究胃癌細(xì)胞粘附歷程中的形態(tài)學(xué)變革以及與整合素1表達(dá)的干系。要領(lǐng)借助位相差顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡對(duì)胃癌KN1活體細(xì)胞的粘附歷程和整合素1的表達(dá)部位和程度舉行不雅察。效果細(xì)胞通過(guò)伸出偽足附著在造就盤(pán)上，整合素1在細(xì)胞膜和細(xì)胞偽足部門(mén)的表達(dá)加強(qiáng)，并形成集落團(tuán)塊。結(jié)論人胃癌KN1細(xì)胞的粘附歷程和整合素1的表達(dá)有直接干系?！娟P(guān)鍵詞】胃腫瘤粘附整合素1粘附是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的一個(gè)根本歷程。整合素是一個(gè)質(zhì)膜糖卵白的家屬，由非共價(jià)結(jié)合的雜合二聚體構(gòu)成，到場(chǎng)細(xì)胞間質(zhì)及細(xì)胞細(xì)胞間粘附作用，包羅胚胎發(fā)育、止血、血栓形成、創(chuàng)傷愈合

2、、免疫性及非免疫性防范機(jī)制和致癌的轉(zhuǎn)化作用等。整合素1與腫瘤浸潤(rùn)有關(guān)。本實(shí)行利用共聚焦顯微鏡對(duì)胃癌KN1細(xì)胞的粘附歷程舉行了不雅察，同時(shí)對(duì)整合素1在粘附歷程中的作用舉行了研究。1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1重要質(zhì)料人胃癌KN1細(xì)胞株購(gòu)自日本癌研究資源庫(kù)。細(xì)胞保存在含有10%小牛血清(FBS)的RPI?鄄1640造就液中，在37，5%2的條件下造就。利用FIT標(biāo)識(shí)表記標(biāo)幟的抗整合素1抗體。1.2要領(lǐng)位相差顯微鏡不雅察：將KN1細(xì)胞(5104細(xì)胞/孔)造就于4孔造就盤(pán)中30in后用位相差顯微鏡不雅察細(xì)胞的形態(tài)。細(xì)胞整合素1的熒光免疫染色：將KN1細(xì)胞造就于含有FIT標(biāo)識(shí)表記標(biāo)幟的抗整合素1抗體1/50的0.2

3、%牛血清卵白BSA/PBA中90in。用PBS洗3次后，將細(xì)胞置于共聚焦顯微鏡不雅察盒中，用含有10%FBS的造就液造就,在37，5%2條件下舉行不雅察引發(fā)波長(zhǎng)488n，發(fā)射波長(zhǎng)515n。2效果2.1胃癌KN1細(xì)胞形態(tài)變革胃癌KN1細(xì)胞是貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，在置入造就盤(pán)后很快附著在造就盤(pán)壁上，并粘附于造就盤(pán)上。細(xì)胞起首產(chǎn)生形態(tài)變革，由圓形釀成橢圓形，同時(shí)伸出偽足與造就盤(pán)壁相接，使細(xì)胞不變地粘附于造就盤(pán)壁上。細(xì)胞繼承舒展成扁平狀，并通過(guò)偽足與別的細(xì)胞打仗形成單細(xì)胞層，這種布局可以使細(xì)胞不變附著于造就盤(pán)上。造就30i后位相差顯微鏡下即可不雅察到細(xì)胞與造就盤(pán)粘附；4h后可不雅察到細(xì)胞舒展呈扁平狀，外貌形成

4、偽足，細(xì)胞偽足間彼此毗連，使細(xì)胞不變附著于造就盤(pán)上。2.2整合素1整合素1為跨膜卵白，在細(xì)胞膜上表達(dá)。造就5in后即可不雅察到細(xì)胞外貌形成毛刺狀偽足(圖1箭頭所示)，在細(xì)胞膜上可不雅察到較弱的熒光信號(hào)，即整合素1有薄弱表達(dá)。造就2h后細(xì)胞變形并形成偽足，在細(xì)胞底面的細(xì)胞膜上和毛刺狀偽足上可以不雅察到較強(qiáng)的熒光信號(hào)，表白整合素1向細(xì)胞底面和細(xì)胞偽足聚攏。造就4h后，細(xì)胞底面形成宏大偽足，在細(xì)胞偽足上可不雅察到猛烈的熒光信號(hào)，整合素1形成很多宏大的集落團(tuán)塊見(jiàn)圖2。3討論整合素是一種膜鑲嵌糖卵白，由18ix和813兩個(gè)亞單元非共價(jià)形成異二聚體復(fù)合物。亞單元的變異使整合素形成一個(gè)宏大的家屬，有的到場(chǎng)差

5、異細(xì)胞之間的粘附毗連，有的幫助細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)合。整合素通過(guò)胞外區(qū)與配體細(xì)胞外基質(zhì)(extraellularatrix，E)結(jié)合，如纖黏連卵白(fibrnetin，F(xiàn)N)，玻黏卵白(vitrnetin，VN)等，個(gè)體的還能與可溶性的配體如纖維卵白原(fibringen)和一些細(xì)胞外貌分子結(jié)合，從而介導(dǎo)細(xì)胞與E以及細(xì)胞與細(xì)胞之間的粘附1。它通過(guò)胞內(nèi)區(qū)與細(xì)胞內(nèi)的骨架卵白、肌動(dòng)卵白、輔肌動(dòng)卵白、踝卵白、紐卵白等彼此作用3。細(xì)胞經(jīng)整合素介導(dǎo)與E粘附并在其上鋪展，整合素在粘附面的漫衍呈斑點(diǎn)存在，細(xì)胞骨架卵白以斑點(diǎn)為中央會(huì)合，在細(xì)胞膜的胞質(zhì)面形成黏附斑2。由此，整合素將細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞內(nèi)骨架卵白毗連在

6、一起，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附，維持細(xì)胞的形態(tài)，影響細(xì)胞的粘附、活動(dòng)、吞噬等作用3。腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)宏大的多步調(diào)多環(huán)節(jié)的歷程，在腫瘤轉(zhuǎn)移歷程中產(chǎn)生很多腫瘤細(xì)胞和E的彼此作用，整合素在此歷程中發(fā)揮重要作用。當(dāng)癌細(xì)胞產(chǎn)生轉(zhuǎn)移時(shí)，它們與E的親和力產(chǎn)生改變，這種表型改變通過(guò)細(xì)胞外貌黏附分子整合素的改變、卵白酶開(kāi)釋使E重塑及新的E分子沉積來(lái)調(diào)治4。這些激活的信號(hào)級(jí)聯(lián)調(diào)治基因的表達(dá)、細(xì)胞骨架的形成、細(xì)胞粘贊同細(xì)胞存活，效果使癌細(xì)胞更具侵襲性，在差異微情況中更好地保存5。在轉(zhuǎn)移歷程中，癌細(xì)胞伸出扁平偽足與E粘附，同時(shí)使E分子之間的接洽消散，從而使癌細(xì)胞前行。本研究通過(guò)光學(xué)顯微鏡和共聚焦顯微鏡不雅

7、察到KN1細(xì)胞挪動(dòng)時(shí)起首伸出偽足，然后細(xì)胞變形成為扁平狀，細(xì)胞與細(xì)胞之間以偽足相毗連，細(xì)胞通過(guò)其形態(tài)改變以及與別的細(xì)胞間的毗連到達(dá)不變狀態(tài)，從而安穩(wěn)地附著于造就盤(pán)上。偽足的作用猶如探測(cè)器，與四周細(xì)胞或細(xì)胞外間質(zhì)打仗后引導(dǎo)細(xì)胞著陸6。一些關(guān)于整合素集落的形成和轉(zhuǎn)移的研究表白，在細(xì)胞活動(dòng)中，活性化的整合素通過(guò)局部聚攏的方法從細(xì)胞的后緣尾部轉(zhuǎn)移到細(xì)胞的火線頭部，并在此與細(xì)胞外布局形成粘附打仗，引發(fā)細(xì)胞局部粘附的形成7。整合素是位于細(xì)胞膜上的跨膜卵白，當(dāng)整合素細(xì)胞外布局與細(xì)胞外間質(zhì)、糖卵白、補(bǔ)體以及其他細(xì)胞彼此作用使整合素受到激活后，整合素通過(guò)踝卵白和鈕卵白使細(xì)胞肌動(dòng)卵白和微絲的布局產(chǎn)生變革，導(dǎo)致細(xì)胞

8、骨架的重組，以及細(xì)胞形態(tài)的改變。KN1細(xì)胞形態(tài)學(xué)變革與整合素表達(dá)的加強(qiáng)之間的干系表白整合素的表達(dá)與胃癌KN1細(xì)胞的粘附歷程有直接干系，調(diào)治整合素的表達(dá)有大概影響胃癌KN1細(xì)胞的粘附，即影響胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1HegerfeldtY,Tush,BrkerEB.lletiveellveentinpriaryelanaexplants:plastiityfell?鄄ellinteratin,beta1?鄄integrinfuntin,andigratinstrategiesJ.anerRes,2002,62(7):2125-2130.2PdarK,TaiYT,LinBK,etal.Vasu

9、larendthelialgrthfatr?鄄induedigratinfultipleyelaellsisassiatedithbeta1integrin?鄄andphsphatidylinsitl3?鄄kinase?鄄dependentPKalphaativatinJ.JBilhe,2002,277(10):7875-7881.3Brakebush,FasslerR.Beta1integrinfuntininviv:adhesin,igrateandreJ.aneretastasisRev,2022,24(3):403-411.4TakahashiK.Thelinkagebeteenbet

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