1、全自動生化分析儀發展及應用醫學檢驗實驗室的良好運行取決于人員設備管理發展歷程與趨勢自動化一體化 （全實驗室自動化）小型化高通量自動化樣本上機后，僅需較少人工操作和干預，系統便可自 動進行檢測，給出試驗結果通過掃描原始樣本管的條碼以確保病人信息與樣本一 致雙向傳輸系統發出檢測指令能評估樣本是否有溶血、脂血或黃疸等影響結果正確 性的因素估計樣本的體積(包括死腔體積)較強大的監控錯誤和系統監測功能 優勢提高效率，縮短出報告時間標準化操作減少誤差更加方便的質量管理提高實驗室生物安全性增加新的檢測項目不同檢測系統間的整合模式免疫學和化學測定整合為具二個獨立平臺的統一 體 軌道傳遞系統使免疫學測定和化學測

2、定部分整合 在一起 在化學測定平臺上加一個非均相免疫測定模塊或 均相免疫測定模塊 代表品牌和系統BECKMAN COULTERSYNCHRON LX i 725Dade BehringDimesion RxL-HM BAYERADVIA WorkCell ROCHEModular Analytics SWA ABBOTTARCHITECT ci8200 優勢 不足只需一管血清樣品即可完成生化及免疫項目測定無需人工分杯和在不同儀器間運送樣品在一個操作界面上一次輸入病人信息和輸出檢測結果，增加效率減少出錯，增加安全性僅僅合并了免疫和生化項目的測定，無法整合非血清樣品的測試仍需手工進行樣品前處理整合

3、方式較為固定，無法按需選擇連接方式免疫測定耗時較長，在一些系統上影響整體速度 檢測步驟申請檢測項目抽血/運送樣品登記和前處理樣品分析出報告/審核/跟蹤列表/管理分析前錯誤來自于：抽血前指示缺失標簽上信息模糊不清標簽上無信息被抽血的病人搞錯用錯試管、容器收集時間不正確 等等抽血申請單錯誤標簽丟失申請單丟失標簽錯誤樣品丟失無記錄 Clinical Lab News, Oct 2002全實驗室自動化的構成組 成功 能進樣單元連續裝載樣品管至輸送器。條碼閱讀器自動識別樣品管上條碼信息，根據信息將試管導向所連接的各個儀器。離心單元自動平衡、離心，具人工和自動兩種模式。去蓋單元自動去除標本管蓋，避免人工開

4、蓋，大大提高安全性。分杯單元智能分杯，避免交叉污染和人工接觸生物危害。輸出單元將樣品管智能歸類到專用架上。存儲單元提供常溫存儲或試管低溫冰箱存儲。可方便隨時自動復查或運行追加的檢測項目。重新蓋蓋單元對完成測試的樣品進行重新蓋蓋，減少污染。保證復檢樣本結果的準確性。連接單元轉送軌道與機械臂，負責樣品的轉送。分析儀可以連接生化、免疫、血球、血凝等儀器 軟件系統信息交互，追蹤、記錄樣本，實現自動復檢、追加項目等的檢測。全實驗室自動化流水線控制中心進樣工作站條碼閱讀器自動化離心機開蓋器分杯器生化分析儀免疫分析儀儲存器輸出工作站自動生化分析儀簡介光譜分析技術可分為三大類。發色光譜分析：火焰光度計、原子發

5、射光譜法和熒光光譜法；吸收光譜分析：紫外、可見光分光光度計，原子吸收分光光度法和紅外光譜法；散射光譜分析：比濁法分光光度技術的基本原理分光光度技術是利用物質對光的吸收作用對物質進行定性或定量分析的技術。分光光度法是光譜分析技術中最常用的一種，應用最多的是紫外可見光分光光度計吸光度與透光度當光線通過均勻、透明的溶液時可出現三種情況：一部分光被散射，一部分光被吸收，另有一部分光透過溶液。設入射光強度為I0，透射光強度為I，I和I0之比稱為透光度（Transmittance，T），TI I0，透光度的負對數稱為吸光度（Absorbance，A），A=lg Tlg I I0lg I0ILambertB

6、eer定律（一）LambertBeer定律時討論溶液吸光度同溶液濃度和溶液層厚度之間關系的基本定律，該定律時分光分析的理論基礎。表達式為：AKLC式中A為吸光度；K為比例常數，稱為吸光系數；L為溶液層厚度，稱為光徑；C為溶液濃度。LambertBeer定律（二）LambertBeer定律適用于可見光、紫外光、紅外光和均勻非散射的液體根據LambertBeer定律，當液層厚度為cm，濃度單位為mol/L時，吸光系數K稱為摩爾吸光系數。 的意義是：當液層厚度為1cm，物質濃度為1mol/L時在特定波長下的吸光度值。 是物質的特征性常數LambertBeer定律（三）在固定條件（入射光波長、溫度等）

7、下，特定物質的不變，這是分光光度法對物質進行定性的基礎。通過對已知濃度的溶液的測定其吸光度，可求得某物質。全自動生化分析儀的發展和概況發展簡史分類介紹現有品牌發展簡史50年代連續流動式分析技術的應用60年代單通道和多通道順序式分析儀70年代Dupont公司的自動臨床分析儀和各種類別的離心式分析儀80年代干化學式按測定項目的特點進行分類專項分析儀：最早的自動分析儀器，專門用于一到數種項目的檢測批量順序式分析儀：依順序逐個自動分析不同樣品的同一項目，速度快，第一代生化儀的代表。固定項目普查式分析儀：20世紀80年代美國Technicon公司在單通道連續流動式分析儀基礎上發展起來的，用增加通道和增添

8、項目的方法來提高儀器的工作效率急診項目分析儀：能夠即刻完成一個或幾個與急診病情有關的檢驗項目任選式分析儀：近年來任選式的分析儀應用比較普遍，此類儀器能同時測定不同的項目，其特點是沒有測定單項目的專一通道和共用的比色皿，設計上高度靈活，急診樣品可插入并優先進行測定。 這是目前醫院使用最為普遍的一種生化分析儀按照反應裝置的結構進行分類連續流動式自動生化分析儀A.空氣分段系統B.非分段系統分立式自動生化分析儀A.典型分立式自動生化分析儀B.離心式自動生化分析儀C.干化學式自動生化分析儀分立式自動生化分析儀加樣系統A.樣品準備：樣品管（杯）置于樣品架上，樣品架分圓盤狀和傳送條帶狀等類型B.樣品的吸取：

9、由吸樣針完成，通常裝有液面傳感裝置，以防止空吸和吸入凝塊C.試劑分配:由試劑盤、試劑加樣器，攪拌裝置等部分組成檢測系統A.光源：目前大多數用鹵素燈，工作波長325800nm。少數用氙燈，工作波長在285750nm。B.分光裝置：采用干涉濾光片或光柵分光。干涉濾光片價格便宜，但易受潮霉變光柵前分光和后分光C.比色杯：主要分為分立式和流動池式比色杯分立式比色杯 數量與檢測的速度有關流動池式比色杯 1個計算機系統A.病人樣品的識別B.添加樣本和試劑C.混合D.數據的處理，計算結果E.恒溫控制F.結果顯示和打印G.數據管理存儲、質控生化儀品牌日立（Hitachi）系列全自動生化分析儀奧林巴斯（olym

10、pus）AU全自動生化分析儀貝克曼庫爾特（beckman）系列全自動生化分析儀歐寶（XL600）全自動生化分析儀其他品牌全自動生化分析儀全自動生化分析儀的分析方法1.終點法終點測定法是最常用的分析法。優點是吸光度信號變化大，吸光度穩定，對溫度、時間、顯色劑的用量與配方要求不高，所以是重復性好、密度高的方法。終點法分為一點終點法、兩點終點法和多點終點法。1.1 一點終點法臨床化學自動分析儀將生物樣品與相應的試劑在反應系統（反應杯）內充分混合，在一定溫度下，經過一定時間的反應，通過比色系統測得反應平衡后在特定波長下，一定時間的吸光度值，讀取的吸光度值由電腦系統處理并計算測定結果。1.2 兩點終點法

11、首先生物樣品與所用雙試劑中不與標本發生反應的試劑1充分混合，在一定溫度下，一定反應時間，特定波長下，讀取吸光度值，然后追加啟動反應試劑，在反應達到平衡時，第二次讀取吸光度值（或與所用單試劑充分混合后在最初時間讀取吸光度值，一定時間后讀取第二次吸光度值）。最后對兩次吸光度值由電腦系統處理并計算測定結果。1.3 多點終點法在一個通道內一次進行多個反應相關的終點法測定。如果是一點終點法，在上圖的Main DET.P主讀點區中，選擇m-n讀點范圍，如果n=0,則系統自動選擇m，m+1，m+2三個點進行中間值計算。如果是二點終點法，那么上圖的Sub DET.P付讀點區中，選擇P-r讀點范圍，如果r=0，

12、則系統自動選擇P，P+1，P+2三個點進行中間值計算。Abs=Abs1-k*Abs2 K為液體體積修正系數；單試劑時，Sub DET.P的p和r設置為0，m點為必設點，其余點不設輸入0。ABS1：主讀點區的主波長減去付波長的吸光度值；ABS2：付讀點區的主波長減去付波長的吸光度值；所謂付讀點區其實就是樣本加試劑空白的區域，也就是R2加入前的讀點區；2 固定時間法指在時間-吸光度曲線上選 擇兩個測光點，此兩點既非反應初始吸光度亦非終點吸光度，這兩點的吸光度差值用于結果計算。有時也稱些法為兩點法。該種方法有助于解決某些反應的特異性問題。3 連續監測法目前，酶濃度測定有兩種方法，兩點速率法和多點速率

13、法，它是測定酶所催化的反應速度，間接計算出酶的含量。當酶促反應一開始，底物處于過量狀態，酶與底物開始結合，生成復合物，底物濃度開始下降，此時產物尚未生成。當復合物分解，生成產物，酶促反應速度急驟上升，經過很短作用時間后，產物的生成量或底物的減少量與時間成線性關系，反應速度保持恒定不變，這一時期稱為零級反應期。隨酶促反應繼 續進行，底物不斷消耗，酶促反應條件逐漸變化，酶促反應速度逐漸減慢，產物生成或底物減少量的變化曲線遂趨平坦，這一時期稱為一級反應期。此時反應速率常常不能準確反應酶的含量。底物濃度對酶促反應速度有很大影響，只有當底物濃度大大超過酶飽和度時，酶促反應速度才能保持恒速，此時的酶促反應

14、速度和酶濃度才有線性關系。因些測定酶活性的基質液中底物濃度應當是Km值的1020倍，這樣才能保證酶活力的標本被準確測出。根據上述酶活力的測定要求，只有在零級反應期，單位時間內吸光度變化值才與酶濃度成正比。計算m和n點間的每分鐘吸光度變化Abs1。如果m和n小于5個點，則自動向l的方向移動， 讀取六個點計算每分鐘吸光度變化。P和r點為樣本和試劑空白的每分鐘吸光度變化Abs2。如果不使用，設置為0,；如果使用，pr，即為雙速率法。Abs=Abs1-k*Abs2，K為液體體積修正系數；Check D.P.I為檢查點，在R2加入前或加入后一點進行。不使用輸入0 使用時輸入R2加入前的點。而2點速率法與

15、其類似，不同的是兩個點的速率變化。4 免疫比濁測定法抗原與相應的抗體結合形成的免疫復合物，在反應杯中具有一定的濁度，由分光光度進行透射比濁測定5 干化學分析法將液體樣品（血清，血漿，全血，尿液）直接加到已固化于特殊結構的試劑載體即所謂干式化的試劑中，以樣品中的水為溶劑，將固化在載體（片或條式）上的試劑溶解后再與樣品中的待測成分進行化學反應，從而進行分析測定的一種方法。6 離子選擇電極法原理為將兩支電極浸入待測溶液中組成原電池，其中一支電極的電位與待測離子的活度有關，其關系服從能斯特(Nernst)方程，此電極為指示電極；電池中的另一支電極是電位已知并且恒定的所謂參比電極，如飽和甘汞電極。將所構

16、成的原電池連接于測量電動勢的裝置，在電流很小的條件下測量電池的電動勢，求出指示電極的電位或電位變化，便可求得待測離子的活度（或濃度）。離子先擇電極基本上都是薄膜電極，它們是由對某一種離子具有不同程度的選擇性響應的膜所構成。7 紫外可見光分光光度法吸收光譜曲線體現了物質的特性，不同的物質具有不同的特征吸收曲線，因此，吸收光譜可用作物質的定性鑒定。波長的選擇1、波長的正確選擇有利于提高測定的靈敏度和減少測定誤差。光度學方法有單波長和雙波長之分。雙波長分析就是選擇主波長同時選擇副波長，在計算時用主波長的吸光度減去副波長的吸光度。雙波長的優點：消除噪音干擾。減少雜散光影響。減少樣品本身吸收的干擾。樣品

17、中存在非化學反應的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素產生非特異性的光吸收，雙波長方式可以部分消除這類光吸收干擾。2、測定波長選擇有三個主要條件：待測物質在該波長下的光吸收最大。其吸收峰宜較寬而鈍，而不是處于尖峰或陡肩，一般不選光譜中的末端吸收峰，換句話說，該吸收峰處的吸光度隨波長變化較小常見干擾物在該波長下的光吸收最小。全自動生化分析儀常用測定項目的反應原理生化分析儀常用測定項目的指示反應1、NAD(P)H系統指示反應煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（氧化態）NAD+煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（還原態）NADH煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（還原態）NADPH煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（氧化態） NADP+NAD+ +

18、 H+ + 2e- = NADHNADP+ + H+ + 2e- = NADPHNAD(P)+ 340nm無吸收峰NAD(P)H 340nm有吸收峰使用NAD(P)H指示系統的包括：ALT(NADH/ NAD+),AST(NADH/ NAD+),CO2(NADH/ NAD+),BUN(NADH/ NAD+),LDH(NAD+/ NADH),CK (NAD+/ NADH)等。ALT丙氨酸氨基轉移酶（ALT）測定：連續監測法乳酸為底物測LD速率法（LD-L法）丙酮酸為底物的速率法（LD-P法）2、過氧化物酶（POD）系統指示反應Trinder反應，又稱“偶聯終點比色法”，其原理為被測物質通過酶作用

19、產生的過氧化氫（H2O2）在4氨基替比林（4AAP）、過氧化物酶（POD）的存在下，可生成紅色醌亞胺化合物(500nm顯色)。包括GLU、CHOL、TG、LDL-C、HDL-C、UA等3、苯衍生物指示反應ALP(對硝基本酚 405nm吸收峰)ALB(溴甲酚綠 628nm吸收峰)Cr (苦味酸)TBili和DBili(偶氮膽紅素 550-560吸收峰)4、其它指示劑TP 雙縮脲-終點法 540nm 紫色絡合物Cr 苦味酸速率法、肌氨酸氧化酶法-終點法 反應生成橘紅色苦味酸肌酐復合物(510nm有吸收峰)苦味酸速率法為了提高特異性，速率測定時間選擇在25-60秒，此間還受酮酸的正干擾和膽紅素的負干

20、擾。其它干擾物質包括葡萄糖、蛋白質，丙酮，乙酰乙酸。 酶法是解決肌酐測定中非特異性干擾的根本途徑。溶血、黃疸及脂血對生化檢測項目的影響Interfering substanceInterfered method Masurable effectHemolysis(Hb:500mg/dl)GluTGHDL-CPTPASTCKCKMBIronTIBCLDHMgLipAmon15%20%15%19%8%64%20%(250mg/dl)33%23%(50mg/dl)12%(250mg/dl)38%19%Jaundice bilirubin:20mg/dlGluTPCholMgCKMBCKIronP10

21、%10%18%55%71%17%14%12%LipemiaTG:600mg/dlMgGluPUA33%8%3%6% Effects of Hemolysis on Chemistry TestsIncrease caused by release form red blood cellsPotassium、magnesium、LDH、iron、AST、total protein 、phosphate、Increase caused by interference in assay Cholesterol、triglycerides、creatine kinase、CKMB(immunoinhi

22、bition)Decrease caused by interference in assayBilirubin(direct spectrophotometry)、insulin、albumin 謝 謝！46凡事不要說我不會或不可能，因為你根本還沒有去做！47成功不是靠夢想和希望，而是靠努力和實踐48只有在天空最暗的時候，才可以看到天上的星星49上帝說：你要什么便取什么，但是要付出相當的代價50現在站在什么地方不重要，重要的是你往什么方向移動。51寧可辛苦一陣子，不要苦一輩子52為成功找方法，不為失敗找借口53不斷反思自己的弱點，是讓自己獲得更好成功的優良習慣。54垃圾桶哲學：別人不要做的事，我揀來做！55不一定要做最大的，但要做最好的56死的方式由上帝決定，活的方式由自己決定！57成功是動詞，