1、xxxxx有限公司食品中霉菌和酵母菌測定的標準操作規 程編R起草人日期審核人日期批準人日期實施日期第 版文件密級1目的規范食品中霉菌和酵母菌測定的標準操作規程。2范圍本標準規定了食品中霉菌和酵母菌（moulds and yeasts ）的計數方法。本標準適用于各類食品中霉菌和酵母菌的計數。3責任質量部組織制訂、化驗室負責實施。4內容設備和材料除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外，其他設備和材料如下：冰箱：2 C 5 C。恒溫培養箱：28 C1 C。均質器。恒溫振蕩器。顯微鏡：10X 100X。電子天平：感量0.1 g。無菌錐形瓶:容量500 mL、250 mL。無菌廣口瓶：500 mL0無菌吸管

2、：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL亥度）。無菌平皿：直徑90 mm。無菌試管：10 mm X 75 mm。無菌牛皮紙袋、塑料袋。培養基和試劑馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養基：見附錄A中A.1孟加拉紅培養基：見附錄A中A.2。檢驗程序霉菌和酵母計數的檢驗程序見圖1。圖1霉菌和酵母計數的檢驗程序4.4操作步驟4.4.1樣品的稀釋固體和半固體樣品：稱取25 g樣品至盛有225 mL滅菌蒸儲水的錐形瓶 中，充分振搖，即為1:10稀釋液。或放入盛有225 mL無菌蒸儲水的均質袋中， 用拍擊式均質器拍打2min,制成1:10的樣品勻液。液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL樣品至盛有22

3、5 mL無菌蒸儲水的錐形瓶（可在瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10的樣品勻 液。取1 mL 1:10稀釋液注入含有9 mL無菌水的試管中，另換一支1 mL無 菌吸管反復吹吸 此液為1:100稀釋液。按5.1.3操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換 用1次1 mL無菌吸管。根據對樣品污染狀況的估計，選擇2個3個適宜稀釋度的樣品勻液（液 體樣品可包括原液），在進行10倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分別吸取 1 mL 樣品勻液于2個無菌平皿內。同時分別取1 mL樣品稀釋液加入2個無菌平皿作 空白對照。及時將15 mL20 mL冷卻至46 C的馬鈴薯-葡萄糖-

4、瓊脂或孟加拉紅培 養基（可放置于46c 1。叵溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉動平皿使其混合均 勻。培養待瓊脂凝固后，將平板倒置，28c 1C培養5d,觀察并記錄。菌落計數肉眼觀察，必要時可用放大鏡，記錄各稀釋倍數和相應的霉菌和酵母數。以菌落形成單位(colonyforming units , CFU) 表小。選取菌落數在10 CFU150 CFU的平板，根據菌落形態分別計數霉菌和酵母數。霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為多不可計。菌落數應采用兩個平板的平均 數。4.5結果與報告計算兩個平板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數計算。若所有平板上菌落數均大于150 CFU,則對稀釋度最高的平

5、板進行計數， 其他平板可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。若所有平板上菌落數均小于10 CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘 以稀釋倍數計算。若所有稀釋度平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數計算； 如為原液，則以小于1計數。報告菌落數在100以內時，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數字報告。菌落數大于或等于100時，前3位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前 2位數字，后面用0代替位數來表示結果；也可用10的指數形式來表示，此時 也按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數字。稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告，報告 或分別報告霉菌和

6、/或酵母數。附錄A（規范性附錄）培養基和試劑A.1馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂A.1.1成分馬鈴薯（去皮切塊）300 g葡萄糖20.0 g瓊脂20.0 g氯霉素0.1 g蒸儲水1000 mLA.1.2制法將馬鈴薯去皮切塊，力口 1000mL蒸儲水，煮沸10 min20 min。用紗布過濾，補 加蒸儲水至1000 mL。加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝后，121 C滅菌20 min 傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養基中A.2孟加拉紅培養基A.2.1成分蛋白陳5.0 g葡萄糖10.0 g磷酸二氫鉀1.0 g硫酸鎂（無水）0.5 g瓊脂20.0 g孟加拉紅0.033 g氯霉素0.1 g蒸儲水1000

7、 mLA.2.2制法上述各成分加入蒸儲水中，加熱溶化，補足蒸儲水至 1000 mL,分裝后，121c滅菌20 min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養基中。附錄B（資料性附錄）霉菌直接鏡檢計數法常用的為郝氏霉菌計測法，本方法適用于番茄醬罐頭。設備和材料折光儀。顯微鏡。郝氏計測玻片：具有標準計測室的特制玻片。蓋玻片。測微器：具標準刻度的玻片。操作步驟檢樣的制備：取定量檢樣，加蒸儲水稀釋至折光指數為1.34471.3460 （即濃度為7.9%- 8.8% ,備用。顯微鏡標準視野的校正：將顯微鏡按放大率 90125倍調節標準視野，使其直徑為1.382 mm。涂片：洗凈郝氏計測玻片，將制好的標準液，用玻璃棒均勻的攤布于計測室，以備觀察。觀測：將制好之載玻片放于顯微鏡標準視野下進行霉菌觀測，一般每一檢樣觀察50個視野，同一檢樣應由兩人進行觀察。結果與計算：在標準視