1、 核酸與核苷類藥物第一節(jié) 概述一、核酸與核苷類藥物核酸與核苷類藥物是指具有藥用價(jià)值的核酸、核苷酸、核苷或者堿基天然的、類似物、衍生物及其聚合物作用：影響生物的蛋白質(zhì)合成和脂肪、糖類的代謝恢復(fù)正常代謝或干擾某些異常代謝用途：放射病、血小板減少癥、白細(xì)胞減少癥、急慢性肝炎、心血管疾病和肌肉萎縮、腫瘤、病毒病 核酸類物質(zhì)藥物一般可分為兩大類：一類具天然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)，另一類是自然結(jié)構(gòu)堿基、核苷、核苷酸的結(jié)構(gòu)類似物或聚合物。 前者是生物體合成原料或蛋白質(zhì)、脂肪、糖生物合成與降解以及能量代謝的輔酶，這一類藥物有助于改善機(jī)體的物質(zhì)代謝和能量平衡，加速受損組織的修復(fù)，促使缺氧組織恢復(fù)正常生理機(jī)能，臨床上已

2、廣泛使用于放射病、血小板減少癥、白細(xì)胞減少癥、急慢性肝炎、心血管疾病、肌肉萎縮等病癥的治療，包括肌苷、輔酶A、GTP、CTP、UTP、ATP、腺苷、輔酶I、輔酶等，多數(shù)是生物體自身能夠合成的物質(zhì)，具有一定臨床功能，毒副作用小，基本都可經(jīng)微生物發(fā)酵或從生物資源中提取。 后一類藥物是治療病毒感染性疾病、腫瘤的重要手段，也是產(chǎn)生干擾素、免疫抑制的臨床藥物。正式用于臨床的抗病毒核苷類藥物有三氮唑核苷、疊氮胸苷、阿糖腺苷等。珍奧核酸DNA藥物核苷類藥物恩替卡韋 二、核酸與核苷的一般理化性質(zhì)核糖（核糖脫氧核糖）核苷 嘌呤（腺嘌呤、鳥嘌呤）堿基核酸核苷酸 嘧啶（胞、尿、胸腺嘧啶）（DNA、RNA）磷酸DNA

3、和RNA是存在于細(xì)胞中的正常成分。DNA主要存在于細(xì)胞核中，少量（2%）存在于線粒體和葉綠體中；RNA主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，少量（10%）存在于核仁、核漿和染色體中。核酸的含量與細(xì)胞大小無(wú)關(guān)，以生長(zhǎng)旺盛的組織細(xì)胞中含量較多，如動(dòng)物胰臟、脾臟、胸腺，植物的莖尖、根尖及各種分生組織等。第二節(jié) 制備的一般過(guò)程與原理一、RNA的提取與制備 工業(yè)用RNA的提取 （1）RNA及其工業(yè)來(lái)源：從微生物中提取RNA是工業(yè)上最實(shí)際和有效的方法。一些最常見(jiàn)的菌體含有豐富的核酸資源，如酵母、白地霉、多種抗菌素的菌絲體青霉素，制霉菌素等菌體。 通常在細(xì)菌中RNA占525，在酵母中占2.715，在霉菌中占0.7%28。 在

4、菌體內(nèi)RNA含量的變化受培養(yǎng)基組成影響，其中關(guān)鍵是銨離子濃度和磷酸鹽濃度。培養(yǎng)酵母菌體收率高，易于提取RNA。 很顯然在許多酵母中，早期細(xì)胞中的RNA含量高，其確切數(shù)值取決于碳、氮比例和培養(yǎng)基組成等。（2）高RNA含量酵母菌株的篩選 可以從自然界篩選到RNA含量高的酵母菌株，也可用誘變育種的方法提高酵母菌的RNA含量。 稀堿法：是用氫氧化鈉溶液（1%），使細(xì)胞壁變性，使核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來(lái)。需用酸中和PH7。然后除去菌體，將pH調(diào)至RNA的等電點(diǎn)（pH2.5），使RNA沉淀出來(lái)。上法的缺點(diǎn)是制得的RNA Mr較低,(磷酸單脂酶、磷酸二脂酶降解RNA，90 保持34h破壞酶)。 濃鹽法：是用高濃

5、度鹽溶液（6%8%）處理，同時(shí)加熱，以改變細(xì)胞壁的通透性，使核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來(lái)。 要避免分子降解，可采用苯酚法制備RNA。用苯酚處理生物材料，使蛋白質(zhì)變性，然后離心，上層水溶液內(nèi)含有全部RNA，可用乙醇沉淀出來(lái)。脫氧核糖核蛋白溶于濃鹽溶液1mol/L,不溶于0.14mol/L,而核糖核蛋白溶于0.14mol/L鹽溶液。 （3）RNA的提取實(shí)例： 啤酒酵母是提取RNA的很好的資源。取100g壓榨啤酒酵母（含水份70%），加入230ml含NaOH 3g的水，20以下緩慢攪拌30分鐘。用6molL HCl調(diào)至pH7，攪拌15分鐘，離心得清液255m1。冷至10以下，6molL HCl調(diào)pH2.5，

6、置冷過(guò)夜，離心得RNA l.8g（純度80）。RNA提取實(shí)例： 提取 中和 HCl 酸化、沉淀HCl酵母 提取液 上清液 RNA NaOH、水 pH 7、離心 pH 2.5、離心 二、DNA的提取與制備 工業(yè)用DNA的提取 取新鮮冷凍魚精20kg，用絞肉機(jī)粉碎2次成漿狀，加入等體積水，攪拌均勻，傾入反應(yīng)鍋內(nèi)，緩慢攪拌，升溫至100，保溫15分鐘，迅速冷卻至2025，離心除去魚精蛋白等沉淀物，獲得35L含熱變性DNA的溶液，經(jīng)精確測(cè)定DNA含量后直接可用于酶法降解生產(chǎn)脫氧核苷酸。如要制成固體狀DNA，在熱變性DNA溶液中逐漸加入等體積95乙醇，離心可獲得纖維狀DNA，沉淀用乙醇、丙酮洗滌，減壓低

7、溫干燥得DNA粗品，產(chǎn)品含熱變性DNA5060。工業(yè)用DNA的提取 提取 熱變性 沉淀乙醇魚精 提取液 纖維狀DNA 水、100 冷卻、離心 70%-80% （無(wú)生物活性） 15min 干燥 粗品DNA（熱變性后無(wú)活性） 具有生物活性DNA的制備 動(dòng)物內(nèi)臟（肝、脾、胸腺）加4倍重量生理鹽水經(jīng)組織搗碎機(jī)搗碎1分鐘，勻漿于2500rpm離心30分鐘，沉淀用同樣體積的生理鹽水洗滌3次，每次洗后離心，將沉淀懸浮于20倍重量的冷生理鹽水中，再搗碎3分鐘，加入2倍量5的（用45%乙醇作溶劑）十二烷基磺酸鈉，并攪拌23小時(shí)，在02500rpm離心，在上層液中加入等體積的冷95乙醇，離心即可得到纖維狀DNA，

8、再用冷乙醇和丙酮洗滌，減壓低溫干燥得粗品DNA。粗品DNA溶于適量蒸餾水，加入5十二烷基磺酸鈉達(dá)110體積，攪拌1小時(shí)，經(jīng)5000rpm離心1小時(shí)，清液中加入NaCl達(dá)1molL，再緩慢加入冷95%乙醇，DNA析出，經(jīng)乙醇、丙酮洗滌，真空干燥得具有生物活性的DNA（活性DNA制備需在03操作）。生物活性DNA的制備 提取 洗滌3次 5%SDS 動(dòng)物內(nèi)臟 沉淀 沉淀 上層液（肝、脾）生理鹽水 生理鹽水 再搗碎 離心、30min 沉淀 洗滌、干燥 提取 纖維狀DNA 粗品DNA 上清液 95%乙醇 冷乙醇、丙酮 水、5%SDS 離心 沉淀 洗滌、干燥 DNA沉淀 活性DNANaCL、95%乙醇 乙

9、醇、丙酮三、用酶解法、發(fā)酵法和半合成法制備核苷酸 1、酶解法及堿水解法制備核苷酸 酶解法制備脫氧核苷酸 桔青霉產(chǎn)生5-磷酸二脂酶 紅酵母產(chǎn)生3-磷酸二脂酶 酶解法制備戊糖核苷酸 我國(guó)從60年代開(kāi)始使用核酸酶P1降解核糖核酸生產(chǎn)單核苷酸，日本年產(chǎn)呈味核苷酸（肌苷酸和鳥苷酸）3000噸，其中60%是使用酶解法生產(chǎn)的。 酶解法生產(chǎn)5單核苷酸工藝流程雙酶法生產(chǎn)肌苷酸和鳥苷酸（IG）呈味核苷酸的主要品種是肌苷酸鈉和鳥苷酸鈉，商品名簡(jiǎn)稱為（IG），用核酸酶Pl降解RNA可獲得GMP和AMP，其中AMP經(jīng)脫氨生成IMP。雙酶法生產(chǎn)（I十G）工藝 。菌體自溶法生產(chǎn)核苷酸磷酸二酯酶在合適的條件下降解細(xì)胞內(nèi)的RN

10、A可產(chǎn)生5-核苷酸。在國(guó)內(nèi)用谷氨酸產(chǎn)生菌體自溶法生產(chǎn)5-核苷酸。（1）菌體自溶法生產(chǎn)核苷酸工藝流程： 堿水解法生產(chǎn)2，3-混合核苷酸 RNA結(jié)構(gòu)中的磷酸二酯鍵對(duì)于堿性條件不穩(wěn)定，很容易生成2，3 -環(huán)狀磷酸酯，此環(huán)狀磷酸酯對(duì)堿更不穩(wěn)定，很易加水分解生成2，3-混合核苷酸。取RNA配成33.5%的水溶液，加氫氧化鈉達(dá)0.3molL濃度，升溫至38，保溫1620小時(shí)，用6molL鹽酸中和至pH7.0，從RNA水解成2，3-核苷酸的降解率達(dá)95以上，將2，3-混合核苷酸制成每片含50100mg的片劑，經(jīng)臨床使用，對(duì)非特異性血小板減少癥、對(duì)白血球減少癥、癌腫的化療和放療后的升白血球均有較好療效。發(fā)酵法

11、生產(chǎn)核苷酸1、發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷酸（IMP） 肌苷酸鈉是一種高效增鮮劑，在谷氨酸鈉（味精）中加2%，鮮度可增加3倍。因此，在味精中添加肌苷酸鈉（或鳥苷酸鈉）后成為第二代特鮮味精。 產(chǎn)氨短桿菌嘌呤核苷酸生物合成途徑、代謝調(diào)控和肌苷酸發(fā)酵機(jī)制: 積累IMP的主要前提：（1）阻斷SAMP合成酶: 即選育缺該酶的菌株（嘌呤缺陷型），發(fā)酵前期提供適量腺嘌呤，以滿足菌體生長(zhǎng)；（2）保持 PRA 合成暢通，即后期沒(méi)有多余腺嘌呤阻遏該步反應(yīng)；（3）要使IMP滲出胞外，選育對(duì)Mn+不敏感菌株；（4）生成的IMP不被降解，恰好原菌株該酶活力低。2、混合培養(yǎng)法發(fā)酵生產(chǎn)鳥苷酸（GMP）: 直接發(fā)酵法生產(chǎn)GMP必需滿足以下

12、條件（1）解除GMP的反饋抑制（與GMP積累相勃）;（2）改變細(xì)胞對(duì)GMP的透性; （3）不分解生成GMP 只能先合成XMP，后轉(zhuǎn)化為GMP：方法如下： 選育鳥嘌呤、腺嘌呤缺陷型菌株，同時(shí)解除PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶及XMP合成酶的阻遏，積累大量XMP(GMP合成酶及SAMP合成酶缺失）。XMP轉(zhuǎn)化為GMP菌株的條件: (1)GMP不被分解 (2)GMP合成酶活力要強(qiáng)化(抗生素激動(dòng)劑) (3)增加細(xì)胞通透性 半合成法制備核苷酸 由于發(fā)酵法生產(chǎn)核苷的產(chǎn)率很高，核苷懸浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷卻條件下加入氯化氧磷，進(jìn)行磷酸化，從核苷生成5-核苷酸收率可達(dá)90%。 例一：肌苷2mmolL懸浮于5ml

13、磷酸三乙酯中，溫度控制0，添加氯化氧磷6mmolL，水2mmolL，反應(yīng)2h，5-IMP摩爾產(chǎn)率達(dá)91。 例二：鳥苷2mmolL懸浮于5ml磷酸三甲酯中，溫度控制0，添加氯化氧磷6mmolL，水2mmo/L，反應(yīng)6h，5-GMP摩爾產(chǎn)率達(dá)90%。四、核苷的制備 核苷是多種核苷類藥物的原料，在核酸類藥物中占主導(dǎo)地位。（1）以核苷及其結(jié)構(gòu)類似物、衍生物為主藥物多達(dá)幾十種；（2）核苷類藥物在抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫方面占重要地位；（3）核苷的發(fā)酵水平大大高于核苷酸，所以常做后者的前體物質(zhì)。 1、RNA化學(xué)水解法制備核苷：2、發(fā)酵法生產(chǎn)核苷 產(chǎn)率高、周期短、控制容易、產(chǎn)量大。 共同特點(diǎn)：（1）使用磷酸

14、單酯酶活力很強(qiáng)的枯草芽孢桿菌或短小芽孢桿菌為誘變出發(fā)菌株；（2）具有特定標(biāo)記的有變株；（3）發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)需提供限量生長(zhǎng)因素。 原菌株：（1）AMP強(qiáng)烈抑制PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶的活性，控制總代謝途徑；（2）AMP抑制SAMP合成酶；（3）GMP抑制IMP脫氫酶生產(chǎn)菌株：（1）酶6、7缺失（為腺嘌呤缺陷型）積累IMP-肌苷（肝炎輔助藥）；（2）酶4缺失（為鳥嘌呤缺陷型）積累XMP-黃苷；（3）酶5缺失積累鳥苷。發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷（1）肌苷生產(chǎn)工藝（2）發(fā)酵工藝條件：碳源為葡萄糖保證充足的氮源磷酸鹽的影響Mg+、Ca+有促進(jìn)作用生長(zhǎng)因子腺嘌呤或酵母粉要亞適量最適發(fā)酵溫度為30-34，pH6.06.2需大風(fēng)量,

15、高溶氧和低CO2發(fā)酵法生產(chǎn)鳥苷和黃苷 鳥苷產(chǎn)生菌的特征：（1）嘌呤核苷酸分解酶活力強(qiáng)；（2）SAMP合成酶，GMP還原酶缺失；（3）解除AMP、GMP對(duì)PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶，肌苷酸脫氫酶和GMP合成酶的反饋抑制；發(fā)酵法生產(chǎn)腺苷 以肌苷生產(chǎn)菌（枯草桿菌）為誘變基礎(chǔ)菌株。 誘變結(jié)果：（1）腺嘌呤回復(fù)，腺嘌呤酶缺失；（2）黃嘌呤缺陷型，GMP還原酶缺失；（3）抗8雜氮黃嘌呤解除對(duì)PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶的抑制；（4）發(fā)酵不穩(wěn)定的原因：黃嘌呤缺陷及腺嘌呤酶缺失與回復(fù)（菌種傳代中）。第三節(jié) 核酸與核苷類藥物的制備舉例 （一）疊氮胸苷（Azidothymidine，AZT）1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) AZT是1987美國(guó)FDA批

16、準(zhǔn)的治療艾滋病的新藥 。AZT的藥理作用是人體內(nèi)經(jīng)磷酸化后生成了3-疊氮-2-脫氧胸腺嘧啶核苷酸，后者取代了正常的胸腺嘧啶核苷酸參與病毒DNA的合成，含有AZT成份的DNA不能繼續(xù)復(fù)制，從而達(dá)到阻止病毒增殖的目的。2、生產(chǎn)工藝 此合成路線的起始原料是胸苷，目前主要是從DNA水解法制備，由于原料來(lái)源少，合成路線較復(fù)雜，成本很高。 已見(jiàn)報(bào)道的胸苷合成方法還有兩條途徑： 從2-脫氧胞苷或2-脫氧鳥苷或2-脫氧腺苷與胸腺嘧啶反應(yīng)，經(jīng)大腸桿菌產(chǎn)生的磷酸化酶催化生成胸苷。 從鳥苷（300mmolL）與胸腺嘧啶（300mmolL）反應(yīng)，在歐文氏菌AJZ992所產(chǎn)生的嘌呤核苷磷酸化酶和嘧啶核苷磷酸化酶的催化下

17、生成5-甲基尿苷，然后經(jīng)化學(xué)法合成胸苷。（二）阿糖腺苷（Adenine arabinoside）1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 阿糖腺苷的化學(xué)名稱為9-D-阿拉伯呋喃糖腺嘌呤，或稱腺嘌呤阿拉伯糖苷。 早在1960年就在實(shí)驗(yàn)室合成了阿糖腺苷，1969年美國(guó)用Streptomyces antibioticus NRRL3238菌株，1972年日本用Streptomyces hebacecus 4334菌株發(fā)酵法分別制備了阿糖腺苷。 1979年用從EColi中分離得到的尿嘧啶磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶，以固相酶的方法將阿糖脲苷轉(zhuǎn)化為阿糖腺苷。2、生產(chǎn)工藝 酶-化學(xué)合成法 最新的阿糖腺苷的合成法是酶-化學(xué)合成法：用尿

18、苷為原料經(jīng)氧氯化磷和二甲基甲酰胺反應(yīng)，生成氧橋化合物，在堿性水溶液中水解成阿糖尿苷，然后利用阿糖尿苷中的阿拉伯糖經(jīng)酶法轉(zhuǎn)化成阿糖腺苷。 經(jīng)選育從阿糖尿苷酶法合成阿糖腺苷的優(yōu)秀菌株是產(chǎn)氣腸桿菌（Enterbacteraerogens），這株菌能產(chǎn)生尿苷磷酸化酶（Upase）和嘌呤核苷磷酸化酶（Pynpase），用這個(gè)菌株的休止細(xì)胞作為酶源，從阿糖尿苷和腺嘌呤能高效地合成阿糖腺苷，菌體也可制成固定化細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)生產(chǎn)。以5-AMP為原料的化學(xué)合成3、作用與用途 阿糖腺苷是近年來(lái)引人注目的廣譜DNA病毒抑制劑，對(duì)單純皰疹、型，帶狀皰疹，巨細(xì)，牛痘等DNA病毒，在體內(nèi)外都有明顯抑制作用。目前認(rèn)為，阿糖腺

19、苷是治療單純皰疹腦炎最好的抗病毒藥物。 阿糖腺苷在體內(nèi)受激酶作用生成的阿糖腺三磷，是脫氧腺三磷（dATP）的拮抗物，從而阻抑了以dATP為底物的病毒DNA聚合酶的活力。而且阿糖腺三磷對(duì)于病毒DNA聚合酶的親和性比宿主細(xì)胞的同一個(gè)酶的親和性高。因此這個(gè)藥物對(duì)于抑制病毒具有較高選擇性。 （三）三氮唑核苷1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 三氮唑核苷商品名病毒唑，對(duì)DNA病毒，RNA病毒都有廣泛作用。本品為白色結(jié)晶，熔點(diǎn)174176，易溶于水。 這個(gè)化合物經(jīng)X線解析，它的立體結(jié)構(gòu)與腺苷、鳥苷非常類似，在體內(nèi)被磷酸化成三氮唑核苷酸，抑制肌苷酸脫氫酶阻斷鳥苷酸的生物合成，從而抑制病毒DNA合成。它的另一特點(diǎn)是對(duì)病毒作用點(diǎn)多

20、，不易使病毒產(chǎn)生抗藥性。 2、生產(chǎn)工藝 酶合成法 使用產(chǎn)氣腸桿菌，以（尿苷）肌苷和TCA為底物可以用酶法簡(jiǎn)易地合成三氮唑核苷。 采用前段與后段由兩個(gè)不同的酶催化，即前段使用嘧啶核苷磷酸化酶，后段使用嘌呤核苷磷酸化酶。（四）阿糖胞苷（Cytarabine，Cytosine arabinoside，Arabinosyl Cytosine，Aracytidine）1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 阿糖胞苷又稱胞嘧啶阿拉伯糖苷，糖的組成部分是阿拉伯糖。白色或類自色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭，易溶于水，略溶于甲醇、乙醇中，乙醚中極微溶。 阿糖胞苷進(jìn)入體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榘⑻前账幔种艱NA聚合酶，阻止胞二磷轉(zhuǎn)變?yōu)槊撗醢讖亩种艱NA的

21、合成，干擾DNA病毒繁殖和腫瘤細(xì)胞增殖。只能注射。 2、生產(chǎn)工藝 以5CMP為原料的合成法（1）工藝路線：（2）工藝過(guò)程：水解：并加入處理好的6.5L 氫氧化鑭凝膠，總體積為7.5L，升溫至90，在不斷攪拌下，于pH9下進(jìn)行水解。在不同的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)，均勻取出2mL凝膠溶液，離心分離，取上清液5至10l，pH9.2電泳分析，檢查水解程度。氧橋化：氧橋化后總OD光譜高峰位置移至264nm（pH2）氨解：使氧橋斷裂3，5-乙酰基脫落 。成鹽： 2鹽酸-甲醇 以葡萄糖酸鈣為原料的合成路線 （五）聚肌胞苷酸（聚肌胞）（Poyinosinic，Polycytidylic Acid，Poly1：C）1、結(jié)構(gòu)

22、與性質(zhì) 1967年美國(guó)人Field發(fā)現(xiàn)聚肌胞是干擾素誘導(dǎo)物，而且具有廣譜抗病毒作用。本品是人工合成的干擾素誘導(dǎo)劑，系由多聚肌苷酸和多聚胞苷酸組成的雙股多聚核苷酸。本品可溶于0.85氯化鈉溶液。2、生產(chǎn)工藝70年代中期我國(guó)開(kāi)始研制聚肌胞，其生產(chǎn)工藝如下： 底物5-核苷二磷酸吡啶鹽的制備（3）固定化多核苷酸磷酸化酶，將分離純化的酶液滴加入冰浴中的載體，得到共價(jià)結(jié)合的固定化多核苷酸磷酸化。3、Poly I：C制備（1）底物預(yù)處理：CDP吡啶鹽轉(zhuǎn)成鋰鹽，IDP轉(zhuǎn)成鈉鹽。（2）酶促反應(yīng)： （每毫升反應(yīng)液含molL數(shù)）IDP或CDP 15；Tris 150；MgC126；EDTA 1；聚合酶5單位，pH9

23、.0，37，34小時(shí)。用鹽酸調(diào)pH1.52.0，使PolyI（或Poly C）沉淀，立即離心。此后在磷酸液沖液中溶解，等摩爾Poly I與Poly C混合，生成產(chǎn)品 。3、作用與用途 本品具有抗病毒，抗腫瘤，增強(qiáng)淋巴細(xì)胞免疫功能和抑制核酸代謝等作用。本品注入人體誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素。 臨床已試用于腫瘤、血液病、病毒性肝炎及痘類毒性感染等多種疾患。 胞二磷膽堿（CDP-膽堿） 1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 胞二磷膽堿其化學(xué)名稱為胞嘧啶核苷-5-二磷酸膽堿鈉鹽本品為白色無(wú)定形粉末，易吸濕，易溶于水，幾不溶于乙醇、氯仿、丙酮等多數(shù)有機(jī)溶劑。1水溶液pH2.53.5，注射液pH7.0。 2、生產(chǎn)工藝 酶合成法 胞二磷膽堿由微生物菌體所提供的酶系催化胞苷酸和磷酸膽堿而合成，國(guó)內(nèi)使用啤酒生產(chǎn)中廢棄的酵母，反應(yīng)體系為： 磷酸二氫鉀氫氧化鈉緩沖液（pH8.0）200molml，CMP 20molml， 磷酰膽堿 30molml，葡萄糖 1000molml， MgSO4.7H2O 20molml，酵母泥 550mgm1。上述反應(yīng)體系于28保溫20小時(shí)，胞二磷膽堿對(duì)胞苷酸的收率為80。 粘性紅酵母發(fā)酵法 國(guó)外發(fā)現(xiàn)一