1、 消毒滅菌 與病原微生物實驗室生物安全第3章消毒與滅菌 生長繁殖 微生物 變 異 死 亡 環境改變環境適宜 環境劇變一、常用術語殺滅物體上的病原微生物的作用和法。 消毒 殺滅物體上的所有微生物（包括病原微生物和非病原微生物、細菌的繁殖體和芽胞）的作用和方法。 滅菌抑制體內或體外細菌的生長繁殖。 抑菌指物體上不含活的微生物。無菌防止微生物生長進入機體或其他物品的操作技術。無菌操作防止或抑制微生物生長繁殖的方法。 防腐 舉例并連線： 外科手術 無菌 內服抗生素 無菌操作 接種環火焰燒灼 消毒 火化 抑菌 局部皮膚75%酒精擦拭 滅菌 消毒、滅菌的方法一般可分為： 熱力滅菌法 輻射殺菌法物理學方法

2、濾過除菌法 干燥和低溫抑菌法等化學方法 原理： 破壞菌體蛋白質與核酸，使 其肽鏈斷裂，蛋白質 變性凝固， 核酸解鏈崩解，導致細菌死亡。二、物理消毒滅菌法1. 熱力滅菌法（1）干熱滅菌法干烤法焚燒法燒灼法160170 2 h；適用于耐高溫物品的滅菌廢棄物品、尸體接種環、試管口、瓶口等 高壓蒸汽滅菌法121.3 1520 min（2）濕熱滅菌法煮沸法100 5 min；殺滅細菌的繁殖體壓力：1.05kg/cm2 或 103.4kPaautoclaveLouis Pasteur (1822 - 1895).巴氏消毒法（pasteurization）61.1 62.8 30 min；71.7 15 3

3、0 sec；殺滅液體中的病原菌或特定的微生物。用于牛乳的消毒。表 常用熱力滅菌法種類方法效果用途干熱焚燒用焚燒爐燃燒滅菌廢棄污物、尸體燒灼火焰燒灼滅菌接種環，試管口干烤紅外線干烤箱，熱空氣160-170C 2h電磁波熱效應滅菌滅菌玻璃器皿等耐高溫的物品醫療器械濕熱煮沸法100C，5-10分鐘，沸水消毒飲水和食具高壓蒸氣滅菌法高壓蒸氣滅菌器103.4Kpa(15磅/吋，1.05Kg/cm2)121.3C15-20分鐘滅菌耐高溫耐濕物品巴氏消毒法種類效果 用途濕熱巴斯德創用，61.1-62.830分鐘，71.7 30秒鐘（常用） 消毒（殺死病原菌，不破壞營養成分）牛奶，酒類方法流通蒸氣法100 蒸

4、氣1530分鐘消毒（殺死細菌繁殖體，不殺死芽胞）不耐高溫、高壓物品間歇滅菌法反復多次流動蒸氣滅菌不耐高溫、高壓物品濕熱與干熱滅菌效果的比較熱型 溫度（）時間 布層內的溫度（）滅菌效果 （h） 20層 40層 100層濕熱 90-105.3 3 101 101 101.5 完 全干熱 130-140 4 86 72 70.5 不 完 全 熱致死時間（min） 100煮沸 121濕熱 160干熱非芽胞菌、酵母 2 1 3肝炎病毒 5 2 4炭疽桿菌（芽胞） 0 3 6破傷風梭菌（芽胞） 60 5 12肉毒梭菌（芽胞） 500 12 30 微 生 物 表.熱對不同種類微生物的致死時間 濕熱效力大于干

5、熱 （1）濕熱中細菌菌體蛋白較易凝固變性 （2）濕熱的穿透力比干熱大、傳導快 （3）濕熱的蒸汽有潛熱效應 原因 紫外線殺菌原理：使DNA上相鄰的T堿基通過共價鍵結合成 二聚體，干擾DNA復制與轉錄，導致細菌 死亡。 特點：穿透力弱 適用范圍：適于空氣和物體表面消毒。2. 輻射殺菌法殺菌波長200300nm，最佳殺菌波長：265-266nm。 電離輻射適用：用于一次性醫用塑料制品的消毒。種類：高速電子、 射線、 r射線等。機理：自由基及自由基離子 破壞微生物蛋白質、 核酸、酶 死亡 微波波長1-1000mm 的電磁波穿透特點：可穿透玻璃、陶瓷、塑料。 不可穿透金屬制品。熱效應殺菌！應用：食品、食

6、具、非金屬器械、檢驗室用品3、濾過除菌法機理：用物理阻留的方法將液體或空氣中的細菌、 真菌除去,以達到除菌目的。 器具：濾菌器（filter） 適用物品：不耐高溫液體（血清、毒素、抗生素） 以及空氣等的除菌。 過濾除菌過濾除菌過濾除菌過濾除菌過濾除菌生物潔凈技術空氣過濾 過濾材料 過濾率初級 塑料泡沫海綿 50%中級 無紡布 50%-90%高級 超細玻璃濾紙 99.95%-99.99% 生物潔凈技術初中 過濾器 0.5-5m 塵埃微粒 + 層流空氣高去除空氣潔凈 生物潔凈工作箱冷凍真空干燥法（lyophilization）4.干燥與低溫抑溫法保存細菌菌種的最好的方法.干燥保存食品低溫保存菌種

7、在低溫狀態下真空抽去水分冷凍真空干燥法：用途：保存菌種三、化學消毒滅菌法 1、化學消毒劑殺菌機制（1）使菌體蛋白質變性或凝固；（2）干擾細菌的酶系統和代謝；（3）損傷菌細胞膜。 類 別 含氯消毒劑 2、常用消毒劑類別、種類、用途 高 效 過氧化物 醛類環氧乙烷 中 效醇類酚類 低 效季銨鹽類洗必泰高錳酸鉀常 用 種 類次氯酸納、漂白粉等 過氧化氫、過氧乙酸甲醛、戊二醛 環氧乙烷 碘酊、碘伏 乙醇、異丙醇石炭酸、來蘇 新潔爾滅 洗必泰高錳酸鉀 含碘消毒劑 用 途 -物體表面、水、皮膚、地面、排泄物 物品表面、皮膚、空氣后者精密儀器、內窺鏡 氣體消毒劑皮膚黏膜、體溫計 醫療護理器材、皮膚、體溫計

8、現已不用皮膚、黏膜、物品、地面 皮膚、黏膜、物品、地面皮膚黏膜、食具、蔬菜、水果 3、影響消毒滅菌效果的因素（1）微生物的種類、物理狀態、數量（清潔）；（2）消毒劑的性質、濃度與作用時間；（3）環境因素：溫度、PH、有機物4、 選擇適當的消毒劑低毒價廉低破壞易貯藏方便有效 生物技術安全 指現代生物技術的研究、開發、應用以及轉基因生物可能對生物多樣性、生態環境和人類健康產生潛在的危害。 指與生物有關的各種因素對社會、經濟、人類健康及生態環境所產生的危害或潛在風險。狹義： 定 義 一、病原微生物實驗室生物安全1、病原微生物的分類一類 能夠引起人類（動物）非常嚴重疾病的微生物，以及我國未發現或宣布已

9、消滅的微生物。二類 能夠引起人類（動物）嚴重疾病，比較容易直接或間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。高致病性病原微生物： 第一、二類三類 能夠引起人類（動物）疾病，但一般情況下對人、動物或環境不構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，能有效治療和預防措施的微生物。四類 通常情況下不會引起人類（動物）疾病的微生物。2、生物安全防護實驗室的分級一級 （P1） 人、動植物、環境 危害較低、不具有致病性 二級（P2） 同上 中等潛在危險危害 有級別 影響范圍 危險性 預防治療措施三級（P3） 同上 高度危險性（氣溶膠途徑） 有四級（P4） 同上 高度危險性 （氣溶膠或不

10、明途徑 或未知致病因子） 無 P : protectP3實驗室：生物安全防護三級實驗室P4實驗室-“魔鬼實驗室” 特殊空調系統-空氣溫度與濕度都是預先設定好空氣過濾程度達到99.999-空氣在整個環境中1H循環多次。定向負壓系統-負40帕核心區典型的P4實驗室 由更衣區（外更衣室、淋浴室和內更衣室 ） 過濾區 緩沖區 消毒區（化學淋浴室） 核心區（自動連鎖裝置） 最先進的P4實驗室-法國梅里厄P4實驗室 面積僅為600平方米的實驗室造價達4000萬法郎，其中的儀器設備價值1000萬法郎，每年的運行維持和實驗費用是190萬歐元。二、實驗室感染的控制以及監督和法律責任感染前感染后監督實驗室感染的控制法律責任消毒與滅菌 -思考1、何為消毒