1、實驗四實驗四 血凝和血凝抑制實驗血凝和血凝抑制實驗一、實驗?zāi)康囊弧嶒災(zāi)康?掌握血凝和血凝抑制實驗的原理和操作方法，可以正確斷定實驗結(jié)果并對結(jié)果進(jìn)展分析。二、血凝實驗二、血凝實驗 Hemagglutination, HA Hemagglutination, HA血凝景象：有些病毒可凝集某些動物如雞、鵝、豚鼠、綿羊和人的紅細(xì)胞(RBC)原理：血凝素與RBC外表相應(yīng)受體結(jié)合，引起RBC凝集，用以測定病毒的含量HAHA實驗的原理表示圖實驗的原理表示圖 用途：確定病毒的含量； 計算病毒的血凝價，為血凝抑制實驗做預(yù)備血凝價：能使血球產(chǎn)生50%凝集的病毒最高稀釋度血凝單位實驗資料實驗資料雞新城疫病毒雞紅細(xì)

2、胞：采集安康雞血液，以阿氏液抗凝，用生理鹽水洗滌3-5次，將血漿、白細(xì)胞等充分洗去，用生理鹽水配成1%紅細(xì)胞懸液備用滅菌0.85%生理鹽水96孔U型微量反響板、微量移液器、滅菌塑料吸頭操作步驟操作步驟在血凝板第一排的1-12孔參與50l生理鹽水。在第1孔中參與50l病毒，混勻后吸50l到第2孔，如此倍比稀釋直到第10孔，混勻后棄50l；最后兩孔11、12為紅細(xì)胞對照。將1%的紅細(xì)胞悄然搖動混勻，在1-12孔中每孔參與50l。手工震蕩，37靜置30min (室溫40分鐘 )后察看結(jié)果 孔孔號號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11（C） 12（C） 生生理理鹽鹽水水（l） 50 50

3、50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 病病毒毒懸懸液液（l） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 / / 1%紅紅細(xì)細(xì)胞胞（l） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 棄50l 結(jié)果斷定血凝價 A:26 B:25 C:22 D:27ABCD以以50%50%的紅細(xì)胞發(fā)生凝集的病毒懸液的最高稀釋度作的紅細(xì)胞發(fā)生凝集的病毒懸液的最高稀釋度作為該病毒液的紅細(xì)胞凝聚效價，即一個血凝單位。為該病毒液的紅細(xì)胞凝聚效價，即一個血凝單位。血凝價血凝價: :1:2561:256三、血凝抑制實驗HemagglutinationInhib

4、ition, HI 原理：抗體與血凝素結(jié)合，封鎖血凝素，使之不能與紅細(xì)胞結(jié)合HIHI實驗的原理圖實驗的原理圖 用途: 用于檢測血清中抗體含量； 鑒定病毒的型、亞型； 血凝抑制價：能完全抑制血球凝集的最高血清稀釋度即為該血清的血凝抑制價實驗資料4個血凝單位雞新城疫病毒雞紅細(xì)胞：同上被檢血清(采自被檢雞的血清)滅菌0.85%生理鹽水96孔U型微量反響板、微量移液器、滅菌塑料吸頭在血凝板的1-12孔參與25l生理鹽水，最后2孔加50l。第1孔參與待檢血清25l，混勻后吸25l至第2孔，倍比稀釋直至第10孔，混勻后棄25l。在1-10孔，每孔加稀釋好的25l 4個血凝單位的病毒懸液，室溫靜置30分鐘 將紅細(xì)胞悄然搖動混勻，在1-12孔中每孔參與50l手工震蕩1min，在37靜置30min(室溫40分鐘)后察看結(jié)果操作步驟斷定結(jié)果：能將病毒凝集紅細(xì)胞的作用完全抑制的血清斷定結(jié)果：能將病毒凝集紅細(xì)胞的作用完全抑制的血清的最高稀釋倍數(shù)為該血清的紅細(xì)胞凝集抑制效價，以的最高稀釋倍數(shù)為該血清的紅細(xì)胞凝集抑制效價，以2 2的指數(shù)表示。上圖抗體結(jié)果從上至下依次為：的指數(shù)表示。上圖抗體結(jié)果從上至下依