1、免疫學檢測方法中的免疫學檢測方法中的干擾因素和對策干擾因素和對策第二軍醫大學附屬長海醫院實驗診斷科第二軍醫大學附屬長海醫院實驗診斷科 沈 茜 隨著基礎免疫學研究的深入和現代免隨著基礎免疫學研究的深入和現代免疫學理論的建立，使大量免疫學檢測技術疫學理論的建立，使大量免疫學檢測技術被不斷地創新、發明；在臨床疾病診治的被不斷地創新、發明；在臨床疾病診治的應用中也不斷地推陳出新。應用中也不斷地推陳出新。目前應用免疫目前應用免疫學原理檢測的檢驗項目占到三級綜合醫院學原理檢測的檢驗項目占到三級綜合醫院檢驗科全部檢驗項目的檢驗科全部檢驗項目的14，醫療收入約，醫療收入約占占13。這就要求檢驗人員不斷掌握最新

2、這就要求檢驗人員不斷掌握最新的臨床免疫學知識和各種新的檢驗方法，的臨床免疫學知識和各種新的檢驗方法，了解檢驗項目的基本原理。了解檢驗項目的基本原理。生化生化臨檢臨檢 要保證實驗結果的正確性和可靠性，必要保證實驗結果的正確性和可靠性，必須對實驗整個過程中各個環節中的干擾因素須對實驗整個過程中各個環節中的干擾因素有比較清楚的掌握和了解。在本次課中主要有比較清楚的掌握和了解。在本次課中主要討論的是標本本身內在因素、以及由于人為討論的是標本本身內在因素、以及由于人為因素對標本處理不當等引起的外在因素、對因素對標本處理不當等引起的外在因素、對免疫檢測結果造成的影響。在了解這些因素免疫檢測結果造成的影響。

3、在了解這些因素的同時，如何在臨床工作中注意和解決這些的同時，如何在臨床工作中注意和解決這些干擾，以保證結果的準確性。干擾，以保證結果的準確性。 基本概念基本概念 抗原：抗原：是一類能刺激機體免疫系統產生特異是一類能刺激機體免疫系統產生特異性免疫應答、并能與相應免疫應答產物（抗體性免疫應答、并能與相應免疫應答產物（抗體或致敏淋巴細胞）發生或致敏淋巴細胞）發生特異性結合特異性結合的物質。的物質。抗體：抗體： 是由抗原刺激是由抗原刺激B細細胞經分化增殖形成的漿細胞胞經分化增殖形成的漿細胞合成和分泌的，能與相應抗合成和分泌的，能與相應抗原發生原發生特異性結合特異性結合并具有多并具有多方面免疫功能的球蛋

4、白。方面免疫功能的球蛋白。基本概念基本概念 免疫學檢測就是利用免疫學檢測就是利用抗原和抗體高度特異抗原和抗體高度特異性結合的原理性結合的原理而檢測分析微量物質的方法。從而檢測分析微量物質的方法。從20世紀世紀50年代美國學者年代美國學者Berson和和Yallow發明發明了放射免疫測定技術檢測胰島素起，免疫學檢了放射免疫測定技術檢測胰島素起，免疫學檢測技術經歷了從定性到定量；從常量分析到微測技術經歷了從定性到定量；從常量分析到微量、超微量分析；從手工檢測到全自動化；從量、超微量分析；從手工檢測到全自動化；從單個標本檢測到高通量檢測等一系列長足的進單個標本檢測到高通量檢測等一系列長足的進步。步。

5、 免疫測定技術均是以標記物示蹤作為基免疫測定技術均是以標記物示蹤作為基礎，同位素、熒光素、酶是經典的三大標記礎，同位素、熒光素、酶是經典的三大標記免疫測定技術。這三大標記技術發展了各種免疫測定技術。這三大標記技術發展了各種各樣的免疫測定方法，如各樣的免疫測定方法，如RIA、ELISA、熒光、熒光免疫測定、免疫化學發光測定等，目前應用免疫測定、免疫化學發光測定等，目前應用這三大標記技術的檢測試劑盒在臨床廣為應這三大標記技術的檢測試劑盒在臨床廣為應用。近年來，作為免疫測定發展方向的非同用。近年來，作為免疫測定發展方向的非同位素標記技術以其敏感、安全等倍受關注。位素標記技術以其敏感、安全等倍受關注。

6、免疫檢測技術免疫檢測技術- 標記物標記物標本自身及前處理所造成的干擾因素標本自身及前處理所造成的干擾因素 類風濕因子（類風濕因子（RF） 嗜異性抗體嗜異性抗體 自身抗體自身抗體 補體補體 纖維蛋白纖維蛋白 溶血或黃疸溶血或黃疸 交叉反應物質交叉反應物質 外源性物質外源性物質免疫學檢測免疫學檢測- 干擾因素干擾因素干擾因素和對策干擾因素和對策- 類風濕因子類風濕因子 患者體內存在的類風濕因子能顯著干擾患者體內存在的類風濕因子能顯著干擾許多免疫學檢測方法，許多免疫學檢測方法，IgM、IgG型型RF可以可以與免疫檢測系統中的捕獲抗體及標記二抗的與免疫檢測系統中的捕獲抗體及標記二抗的Fc段直接結合，從

7、而導致檢測結果假陽性或段直接結合，從而導致檢測結果假陽性或假性升高。假性升高。RF對不同檢測系統的干擾程度有對不同檢測系統的干擾程度有所差異，影響程度并不與所差異，影響程度并不與RF的濃度成正比的濃度成正比 。目前，在臨床工作中使用的免疫檢測試劑盒目前，在臨床工作中使用的免疫檢測試劑盒大部分均沒有很好地防止大部分均沒有很好地防止RF干擾的措施，國干擾的措施，國外著名公司要好于國內公司。外著名公司要好于國內公司。干擾因素和對策干擾因素和對策- 類風濕因子類風濕因子 收集收集10份份RF311000IU/L的患者血的患者血清，在美國和歐洲清，在美國和歐洲66各臨床實驗室進行各臨床實驗室進行74個個

8、項目的免疫競爭法或免疫夾心法檢測，儀器項目的免疫競爭法或免疫夾心法檢測，儀器和試劑均配套。和試劑均配套。3445個結果中個結果中8.7為假陽性。為假陽性。錯誤高值結果中的錯誤高值結果中的21（所有結果的（所有結果的1.8）引起了臨床的錯誤診斷，在使用引起了臨床的錯誤診斷，在使用RF吸附劑后吸附劑后再檢測，錯誤結果得到糾正。再檢測，錯誤結果得到糾正。39的假陽性的假陽性結果也可在使用結果也可在使用RF吸附劑后降低。吸附劑后降低。Clinical Chemistry 2002;48(11):20082016RF的干擾對策的干擾對策u 捕獲抗體用捕獲抗體用F(ab)2替代完整的替代完整的IgGu 標

9、本用連有熱變性（標本用連有熱變性（63，10 min）IgG的的 固相吸附劑（固相吸附劑（Euroimmune公司）處理公司）處理（將（將 熱變性熱變性IgG加入到標本稀釋液或血清中同樣加入到標本稀釋液或血清中同樣 有效），有效），4過夜離心后在檢測；過夜離心后在檢測；u 檢測抗原時，可以用終濃度檢測抗原時，可以用終濃度0.1mol/L 2-巰巰 基乙醇基乙醇(2- ME)等加入到標本稀釋液或標本等加入到標本稀釋液或標本 中，使中，使RF（IgM型）降解。型）降解。 干擾因素和對策干擾因素和對策- 嗜異性抗體嗜異性抗體 嗜異性抗體通常是指與其他種類動物的嗜異性抗體通常是指與其他種類動物的免疫球

10、蛋白產生反應的人類抗體，具有廣泛免疫球蛋白產生反應的人類抗體，具有廣泛的種特異性。免疫檢測系統中大量使用單克的種特異性。免疫檢測系統中大量使用單克隆抗體，嗜異性抗體可與嚙齒類動物隆抗體，嗜異性抗體可與嚙齒類動物IgG的的Fc段結合。這樣嗜異性抗體既可與檢測系段結合。這樣嗜異性抗體既可與檢測系統中的捕獲抗體結合、又可和標記抗體結合，統中的捕獲抗體結合、又可和標記抗體結合，造成檢測結果假陽性或假性升高。嗜異性抗造成檢測結果假陽性或假性升高。嗜異性抗體干擾的程度、頻率與患者的疾病狀態、年體干擾的程度、頻率與患者的疾病狀態、年齡、性別等無關。齡、性別等無關。干擾因素和對策干擾因素和對策- 嗜異性抗體嗜

11、異性抗體 將將11261份血清標本使用熒光時間分辨免份血清標本使用熒光時間分辨免疫分析系統（疫分析系統（PE公司，二步法、雙位點）檢公司，二步法、雙位點）檢測測CEA，將緩沖液中加入小牛，將緩沖液中加入小牛IgG 約約210個病個病人、人、3.34.7%的標本出現假性升高；加入的標本出現假性升高；加入15mg/L熱處理小鼠熱處理小鼠IgG（MAK33 ）（Roche）可將干擾降為）可將干擾降為0.86%；同濃度天；同濃度天然小鼠然小鼠IgG無效；去除捕獲抗體或標記抗體的無效；去除捕獲抗體或標記抗體的Fc段也可將干擾降至段也可將干擾降至0.1%。Clinical Chemistry 2002；4

12、8(4):613621 處理方法處理方法病人數病人數 頻率（）頻率（）1切除捕獲抗體切除捕獲抗體Fc段和加入熱處段和加入熱處理理15mg/LMAK33后結果正常后結果正常 148 3.02僅切除捕獲抗體僅切除捕獲抗體Fc段后結果正段后結果正常常 41 0.823切除捕獲抗體切除捕獲抗體Fc段或加入段或加入15mg /L天然天然MAK33或或15mg/L熱處理熱處理MAK33后結果正常后結果正常 4 0.084僅加入僅加入15mg/L熱處理熱處理MAK33后后結果正常結果正常 3 0.06表表1. 不同處理方法對嗜異性抗體干擾的排除不同處理方法對嗜異性抗體干擾的排除干擾因素和對策干擾因素和對策-

13、 嗜異性抗體嗜異性抗體 使用使用Access免疫化學發光檢測系統測免疫化學發光檢測系統測定定TSH、PSA、HCG和皮質醇，前三項為和皮質醇，前三項為雙位點非競爭法，后為競爭法。雙位點非競爭法，后為競爭法。160份標本份標本測定測定HCG有有5份（份（3.1%)假性升高；假性升高；53份標份標本（本（37.9%)用嗜異性抗體吸附劑吸收后結果用嗜異性抗體吸附劑吸收后結果出現差異性下降；有出現差異性下降；有4份標本的結果出現份標本的結果出現4SD的顯著增高，使臨床對結果的解釋出現的顯著增高，使臨床對結果的解釋出現改變。改變。Clin Chem 2003；49(7):11631169嗜異性抗體嗜異性

14、抗體的干擾的干擾對策對策u 在標本稀釋液或待檢標本中加入過量的動在標本稀釋液或待檢標本中加入過量的動 物物Ig (s) ，但加入量不足或亞型不同時無，但加入量不足或亞型不同時無 效（要與捕獲抗體和標記抗體的效（要與捕獲抗體和標記抗體的Ig亞型相亞型相 同）。同）。u 捕獲抗體使用捕獲抗體使用F(ab)2，切除，切除Fc段。段。干擾因素和對策干擾因素和對策- 自身抗體自身抗體 嗜靶抗原的自身抗體，如抗甲狀腺球蛋嗜靶抗原的自身抗體，如抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，能與白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，能與靶抗原結合形成復合物，在免疫檢測系統中靶抗原結合形成復合物，在免疫檢測系統中均

15、可對靶抗原的測定結果造成負性干擾。均可對靶抗原的測定結果造成負性干擾。 判斷嗜靶抗原的自身抗體對檢測的負干判斷嗜靶抗原的自身抗體對檢測的負干擾，因緊密結合患者的疾病診斷、病史、其擾，因緊密結合患者的疾病診斷、病史、其他實驗檢查的結果綜合分析。如甲亢、甲低、他實驗檢查的結果綜合分析。如甲亢、甲低、I型糖尿病等。型糖尿病等。 Erikssion等人采用針對等人采用針對cTnI中心穩定區中心穩定區域抗原位點的捕獲和檢測抗體，開發了新的域抗原位點的捕獲和檢測抗體，開發了新的cTnI檢測方法，有利于具有檢測方法，有利于具有cTnI自身抗體等自身抗體等干擾物質的標本。采用新方法和目前一商品化干擾物質的標本

16、。采用新方法和目前一商品化試劑盒共檢測試劑盒共檢測541份胸痛患者的血清，其中份胸痛患者的血清，其中13.5%的標本的標本cTnI兩種方法檢測均陽性，兩種方法檢測均陽性，14.2 %的標本僅采用新方法檢測陽性的標本僅采用新方法檢測陽性 。上述結果。上述結果說明心梗患者存在說明心梗患者存在cTnI自身抗體絕非特例自身抗體絕非特例 。干擾因素和對策干擾因素和對策- - 自身抗體自身抗體 Clin Chem 2005;51(5):848-55嗜靶抗原自身抗體嗜靶抗原自身抗體的干擾的干擾對策對策 為避免以上情況出現，解決的辦法是：為避免以上情況出現，解決的辦法是：測定前標本需用理化方法將免疫復合物解離

17、測定前標本需用理化方法將免疫復合物解離后再測定。解離液組成：后再測定。解離液組成： 0.3%Triton X100 1.5%CHAPS 15%SDS100l標本、標本、50 l解離液混勻，解離液混勻，56 30分分鐘處理。鐘處理。J Clin Microbiol 1999;37:18021808干擾因素和對策干擾因素和對策- - 補體補體 免疫檢測系統中捕獲抗體在向固相包被免疫檢測系統中捕獲抗體在向固相包被中和標記抗體的標記過程中，抗體分子發生中和標記抗體的標記過程中，抗體分子發生變構，其變構，其Fc段的補體段的補體C1q分子結合位點被暴分子結合位點被暴露出來，使露出來，使C1q 可以將二者連

18、接起來，從而可以將二者連接起來，從而造成假陽性。一些公司為了增加檢測的敏感造成假陽性。一些公司為了增加檢測的敏感性，使用鏈霉親和素包被固相，將捕獲抗體性，使用鏈霉親和素包被固相，將捕獲抗體用親和素標記，此過程也可引起捕獲抗體的用親和素標記，此過程也可引起捕獲抗體的構象發生改變構象發生改變 ，造成假陽性或假性升高。，造成假陽性或假性升高。補體的干擾補體的干擾對策對策u 用終濃度用終濃度1040mmol/L EDTA處理標本，處理標本，滅活補體。滅活補體。u 用用53、10 min或或56、30 min加熱血加熱血清使清使C1q滅活。滅活。 干擾因素和對策干擾因素和對策- - 纖維蛋白纖維蛋白 在

19、沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后正常血液采集后1/2開始凝固，開始凝固，2h后完全凝固。后完全凝固。臨床檢驗工作中，有時為了爭取時間快速檢臨床檢驗工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時或未完全凝固測，常在血液還未開始凝固時或未完全凝固時即強行離心分離血清，此時血清中仍殘留時即強行離心分離血清，此時血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在免疫檢測過程中可以形部分纖維蛋白原，在免疫檢測過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果，尤其是在使用果，尤其是在使用ELISA檢測時。檢測時。干擾因素和對策

20、干擾因素和對策- -纖維蛋白纖維蛋白 用用Abbott AxSYM分析了分析了3962份血標本份血標本中中cTnI 水平，其中水平，其中307份份cTnI升高，將這升高，將這307份標本再離心前后測定份標本再離心前后測定cTnI的變化，的變化，24份標份標本在離心后本在離心后cTnI有有45%的降低，這種現象主的降低，這種現象主要出現在要出現在cTnI含量在含量在2.025g/L的標本。離的標本。離心后其中心后其中20份樣本份樣本cTnI值低于正常值低于正常cutoff值。值。 Int J Cardiol 2005;101(1):27-31u為避免上述干擾作用，解決的辦法最好是為避免上述干擾作

21、用，解決的辦法最好是 血液標本采集后必須使其充分凝固再分離血液標本采集后必須使其充分凝固再分離血清，或標本采集時用帶分離膠的采血管血清，或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。或于采血管中加入適當的促凝劑。u懷疑檢測結果存在纖維蛋白干擾的標本，懷疑檢測結果存在纖維蛋白干擾的標本，最好將標本最好將標本410放置過夜，離心后再檢放置過夜，離心后再檢測。測。 纖維蛋白的干擾纖維蛋白的干擾對策對策干擾因素和對策干擾因素和對策- - 溶血或黃疸溶血或黃疸 各種人為原因引起的標本溶血，導致紅細各種人為原因引起的標本溶血，導致紅細胞的破壞，血紅蛋白以及細胞碎片和蛋白質等胞的破壞，血紅蛋白

22、以及細胞碎片和蛋白質等釋放出來。溶血對免疫檢測的作用不僅是游離釋放出來。溶血對免疫檢測的作用不僅是游離血紅蛋白的影響，更多的是細胞碎片和蛋白質血紅蛋白的影響，更多的是細胞碎片和蛋白質等其他溶血產物；血紅蛋白具有過氧化物酶活等其他溶血產物；血紅蛋白具有過氧化物酶活性，在以辣根過氧化物酶為標記的性，在以辣根過氧化物酶為標記的 ELISA測定測定中，會導致非特異性顯色中，會導致非特異性顯色 。溶血因測定方法的。溶血因測定方法的不同可導致對免疫學檢測的正向或負向干擾，不同可導致對免疫學檢測的正向或負向干擾，且影響大小也有所差異。且影響大小也有所差異。干擾因素和對策干擾因素和對策- - 溶血或黃疸溶血或

23、黃疸 一項針對溶血對電化學發光法影響的研一項針對溶血對電化學發光法影響的研究發現，究發現，cTnT測定濃度的負偏倚與血清中血測定濃度的負偏倚與血清中血紅蛋白濃度相關，血紅蛋白濃度每增紅蛋白濃度相關，血紅蛋白濃度每增1g/L ，cTnT0.1g/L的可能性下降的可能性下降2.5% 。 Clinical Biochemistry 2004;37(8):398-701 標本中結合膽紅素和未結合膽紅素任標本中結合膽紅素和未結合膽紅素任一或兩者含量的增高都會對采用免疫學原理一或兩者含量的增高都會對采用免疫學原理的檢測系統產生負干擾。的檢測系統產生負干擾。干擾因素和對策干擾因素和對策- - 交叉反應物質交

24、叉反應物質 待檢標本中存在類地高辛、類待檢標本中存在類地高辛、類AFP樣樣物質等，是一些與檢測的靶抗原有交叉反物質等，是一些與檢測的靶抗原有交叉反應的物質。在用多克隆抗體測定抗原時對應的物質。在用多克隆抗體測定抗原時對測定結果影響不大，但在用單克隆抗體測測定結果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時定抗原時 ，如果交叉抗原決定簇正好是所，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時，會出用單克隆抗體相對應的靶決定簇時，會出現假陽性結果。現假陽性結果。 干擾因素和對策干擾因素和對策- - 外源性物質外源性物質 外源性物質常常是由于用于免疫測定的外源性物質常常是由于用于免疫測定的血標本采

25、集、貯存等不當所致。血標本采集、貯存等不當所致。 u 標本受細菌污染：標本受細菌污染： 因菌體中可能含有內源因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶，被細菌污染的標本在以性辣根過氧化物酶，被細菌污染的標本在以辣根過氧化物酶為標記的辣根過氧化物酶為標記的 ELISA測定中，可測定中，可產生非特異性顯色而干擾測定結果。產生非特異性顯色而干擾測定結果。 標本管中添加物質的影響：標本管中添加物質的影響： 抗凝劑、酶抑制抗凝劑、酶抑制劑（如劑（如NaN3可抑制可抑制ELISA系統中系統中HRP活性）及分活性）及分離血清的分離膠等均對免疫檢測有一定干擾作用。離血清的分離膠等均對免疫檢測有一定干擾作用。應用三種

26、檢測系統分別測定應用三種檢測系統分別測定100對同時采集的肌鈣對同時采集的肌鈣蛋白陽性的血清與肝素抗凝血漿兩組標本，在兩者蛋白陽性的血清與肝素抗凝血漿兩組標本，在兩者測定值差異大于測定值差異大于20%的結果中，的結果中，ACS :Centaur cTnI占占11%，Elecsys cTnT占占9%，AxSYM cTnI占占2%，其他的抗凝劑如，其他的抗凝劑如EDTA抗凝的血漿肌鈣蛋抗凝的血漿肌鈣蛋白測定結果也比血清低。白測定結果也比血清低。 干擾因素和對策干擾因素和對策- - 外源性物質外源性物質 Clin Chem 2000;46(9):1338-44干擾因素和對策干擾因素和對策- - 外源

27、性物質外源性物質 標本保存不當：標本保存不當： 在冰箱中保存過久的標在冰箱中保存過久的標本，血清中本，血清中IgG可聚合成多聚體、可聚合成多聚體、AFP可形成可形成二聚體，在間接法二聚體，在間接法ELISA測定中會導致本底過測定中會導致本底過深、甚至造成假陽性；有時抗原或抗體免疫活深、甚至造成假陽性；有時抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現假陰性。為克服上述干擾，性減弱，亦可出現假陰性。為克服上述干擾，ELISA測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能測定的血清標本宜為新鮮采集；如不能立即測定，立即測定，5天內測定的血清標本可存放于天內測定的血清標本可存放于4，1周后測定的血清標本應低溫凍存。周后測定的

28、血清標本應低溫凍存。 凍存后融解的標本，蛋白質局部濃縮，凍存后融解的標本，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時分布不均，應充分混合后再測定，但混勻時應輕柔，不可強烈振蕩。標本的反復凍融所應輕柔，不可強烈振蕩。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。產生破壞作用，從而引起假陰性結果。 干擾因素和對策干擾因素和對策- - 外源性物質外源性物質操作流程不當操作流程不當造成結果的改變造成結果的改變 我們對我們對HBV血清標志物五項指標僅抗血清標志物五項指標僅抗-HBc總抗體單陽性的血清實行了嚴格的復

29、檢總抗體單陽性的血清實行了嚴格的復檢措施，發現初、復檢結果的符合率措施，發現初、復檢結果的符合率50%。偏差如此之大是無法用實驗人員操作不當解偏差如此之大是無法用實驗人員操作不當解釋的。抗釋的。抗-HBc總抗體采用競爭抑制總抗體采用競爭抑制ELISA法法檢測檢測, 日常工作中無論標本多少，必然是先日常工作中無論標本多少，必然是先加完血清標本后再加抗加完血清標本后再加抗-HBc-HRP。這樣，。這樣，血清中的抗血清中的抗-HBc與抗與抗-HBc-HRP存在著明顯存在著明顯的的“不公平競爭不公平競爭”。 操作流程不當操作流程不當造成結果的改變造成結果的改變這種這種“不公平競爭不公平競爭”對實對實驗

30、結果的影響有多大？驗結果的影響有多大？ 54(57.4) 43 18 12 21 3037(39.3) 21 17 18 38 2019(20.2) 10 12 16 56 1010(10.6) 6 8 15 65 5 7 (7.4) 6 7 13 68 2 0 6 3 10 75 0 臨界值標本臨界值標本A450nm 假陽性假陽性0.3 0.30.7 0.7 （）（）陰性標陰性標 本數本數放置時間放置時間（min）表表2. 加樣后放置時間對檢測結果的影響加樣后放置時間對檢測結果的影響放置放置時間時間min A450nm1.251.61.612.02.012.5 2.5 - - + - - +

31、 - - + - - + 0 25 0 20 0 17 0 13 0 2 18 7 20 0 17 0 13 0 5 16 9 19 1 17 0 13 0 10 9 16 18 2 16 1 13 0 20 2 23 12 8 12 5 12 1 30 0 25 416 7 10 10 3 表表3. 在加樣放置時間改變后陰性標本在加樣放置時間改變后陰性標本A450nm與結果的關系與結果的關系 放置放置時間時間min陰性陰性標本標本數數臨界值標本臨界值標本A 450nm假陽性假陽性(%)假陰性假陰性 (%)0.3 0.30.70.7 0 75 10 3 6 0 0 10 74 11 3 61

32、(1.0) 0 20 75 10 3 6 0 0 30 76 9 3 6 01 (1.0) 40 74 11 3 61 (1.0) 0表表4. 加樣同時加入抗加樣同時加入抗-HBc-HRP放置放置不同時間對檢測結果的影響不同時間對檢測結果的影響操作流程不當操作流程不當造成結果的改變造成結果的改變 我們將臨床抗我們將臨床抗-HBc總抗體的加樣方式總抗體的加樣方式改為每加入改為每加入10個標本，立即加入抗個標本，立即加入抗-HBc-HRP（時間控制在（時間控制在1min40s左右），直至標左右），直至標本全部加完，再共同本全部加完，再共同37溫育溫育30 min。經。經過幾萬例臨床標本的檢驗證實，

33、表明這種加過幾萬例臨床標本的檢驗證實，表明這種加樣方法明顯減少了由于操作流程不當造成的樣方法明顯減少了由于操作流程不當造成的結果假陽性，使檢測結果的真實性得到一定結果假陽性，使檢測結果的真實性得到一定的保證。的保證。操作不當操作不當交叉污染交叉污染 定性免疫測定已廣泛用于感染性病原體抗定性免疫測定已廣泛用于感染性病原體抗原和抗體檢測，目前國內應用最廣泛的是原和抗體檢測，目前國內應用最廣泛的是ELISA等。由于測定操作和等。由于測定操作和(或或)加樣吸頭重復加樣吸頭重復使用的全自動加樣系統的使用，常有標本間的使用的全自動加樣系統的使用，常有標本間的交叉污染所致交叉污染所致“拖帶拖帶”現象致假陽性

34、結果的出現象致假陽性結果的出現。標本交叉污染不光是導致假陽性，亦會因現。標本交叉污染不光是導致假陽性，亦會因為乙肝疫苗的普遍免疫，標本中存在的抗為乙肝疫苗的普遍免疫，標本中存在的抗HBs 可使受污染標本中可能存在的可使受污染標本中可能存在的HBsAg檢測受檢測受抑，而致假陰性。抑，而致假陰性。操作不當操作不當交叉污染交叉污染 樣本號樣本號 孔位號孔位號S/CO均值均值復檢復檢S/CO均值均值 1 E 9 20.7 21.2 2 E10 12.2 4.4 3 E11 4.7 1.7經江蘇省防疫站經江蘇省防疫站HIV確認中心確認，除確認中心確認，除E9孔所對孔所對應的標本為應的標本為HIV陽性外，

35、其余均為陰性。將這陽性外，其余均為陰性。將這3份份新標本進行新標本進行ELISA 檢測，結果與印跡法吻合。檢測，結果與印跡法吻合。操作不當操作不當交叉污染交叉污染 目前的全自動加樣系統，不管是一次性目前的全自動加樣系統，不管是一次性加樣針還是永久性加樣針，均難以避免樣本加樣針還是永久性加樣針，均難以避免樣本的污染問題。特別是當遇到高濃度的抗原或的污染問題。特別是當遇到高濃度的抗原或抗體，沿加樣方向被污染的甚至可能不止抗體，沿加樣方向被污染的甚至可能不止1 個個孔。為了排除這種污染造成的假陽性，建議孔。為了排除這種污染造成的假陽性，建議當同一行當同一行/列上（沿加樣方向）出現連續陽性，列上（沿加

36、樣方向）出現連續陽性，并經復查仍為陽性時，應同時采取新鮮標本并經復查仍為陽性時，應同時采取新鮮標本進行檢測來加以證實。進行檢測來加以證實。交叉污染交叉污染- 判斷判斷 當出現交叉污染時當出現交叉污染時,如何從日常檢測結如何從日常檢測結果來判斷假陽性的可能原因以及陰性質控或果來判斷假陽性的可能原因以及陰性質控或陽性質控成立，但測定結果中已存在假陽性陽性質控成立，但測定結果中已存在假陽性或假陰性，如何從日常檢測結果來觀察或假陰性，如何從日常檢測結果來觀察? 在實驗室日常檢測陽性率比值呈正態分在實驗室日常檢測陽性率比值呈正態分布時，可采用半布時，可采用半LeveyJennings質控圖法；質控圖法；

37、不呈正態分布時則可用直接概率法。不呈正態分布時則可用直接概率法。中華檢驗醫學雜志中華檢驗醫學雜志 2006, 29(2):173176檢測次數檢測次數 每次標本數每次標本數 陽性數陽性數 陽性率陽性率 1 184 17 0.092 2 221 20 0.090 3 184 18 0.098 4 152 12 0.079 5 187 23 0.123 6 184 20 0.109 7 184 21 0.114 8 205 29 0.141 9 204 21 0.103 10 184 20 0.109 11 130 16 0.123 12 184 26 0.141 13 182 22 0.121 14 184 24 0.130 15 163 13 0.080 16 184 21 0.114 17 169 16 0.095