1、傳遞窗紫外燈表面消毒效果驗證 傳遞窗紫外燈表面消毒效果驗證編號Code: 版本Version: 編寫Prepared by:日期Date:審核Checked by: 日期Date:批準Approved by: 日期Date:生效日期Date of Effective:目 錄1、概述32、實施日期及時間安排33、驗證小組成員34、儀器和設備35、材料與試劑36、驗證過程47、驗證結果記錄88、再驗證周期99、相關SOP910、QA職責911、修改事項912、文檔91、概述進入微生物室的物品通過傳遞窗，經過紫外消毒后進入微生物室。為了確認傳遞窗紫外燈的消毒效果，特起草本方案對其進行驗證。本驗證用于

2、QC微生物室、無菌室傳遞窗紫外燈表面消毒效果檢查。2、實施日期及時間安排2012年 月 日開始進行驗證。3、驗證小組成員QA負責驗證方案的批準QA負責驗證方案的批準QC負責驗證方案、驗證報告的審核、組織驗證方案的培訓和實施負責驗證方案和驗證報告的起草驗證方案的實施4、儀器和設備儀器名稱型號或規格凈化工作臺HS-1300-V型菌落計數器紫外線強度測定儀穩壓器220V細菌培養箱SHP-150型霉菌培養箱GNP-9270型5、器材5.1滅菌刻度吸管（1ml，10ml）5.2滅菌試管5.3滅菌平皿5.4酒精燈5.5載體：（1.01.0cm的玻片）6、材料與試劑6.1純化水 6.2營養瓊脂培養基6.3改

3、良馬丁瓊脂培養基6.4營養肉湯培養基6.5改良馬丁培養基6.6金黃色葡萄球菌CMCC（B）26 0036.7枯草芽孢桿菌CMCC（B）63 5016.8大腸桿菌CMCC（B）44 1026.9白色念珠菌CMCC（F）98 0016.10稀釋液（0.1吐溫80，0.1蛋白胨溶液）7、驗證過程7.1 試驗環境 試驗在潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區域內進行，全過程嚴格遵守無菌操作。單向流空氣區、工作臺面及環境定期按醫藥工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現行國家標準進行潔凈度驗證。 每次操作開始前，開紫外燈照射1小時。7.2 培養基的制備7.2.1營養瓊脂培

4、養基配方：營養瓊脂培養基粉 31.0g純化水 1000ml 配制：根據需要量稱取營養瓊脂培養基粉置適宜容器中，按配方比例加入純化水，水浴加熱使溶解，調pH至7.10.2，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌12115分鐘。7.2.2 改良馬丁瓊脂培養基配方： 改良馬丁瓊脂培養基粉 42.0g純化水 1000ml 配制：根據需要量稱取改良馬丁瓊脂培養基粉，按配方比例加入純化水，水浴加熱使溶解，調pH至6.40.2，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌11520分鐘。7.2.3 營養肉湯培養基配方： 營養肉湯培養基 20g純化水 1000ml 配制：稱取營養肉湯培養基20克，加1000ml純化水，加熱溶解

5、，加熱至沸，冷卻至常溫，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌12115分鐘。7.2.4改良馬丁培養基配方： 改良馬丁培養基粉 28.0g純化水 1000ml 配制：根據需要量稱取改良馬丁培養基粉，按配方比例加入純化水，水浴加熱使溶解，調pH至6.40.2，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌11520分鐘。7.4 方法驗證試驗7.4.1輻照強度測定7.4.1.1開啟紫外燈5min后，用中心波長為253.7nm的紫外線強度測定儀在燈管下方垂直1m的中心處測量其輻照度值（uW/cm2）。7.4.1.2測量時，電壓應穩定在220V。7.4.1.3普通型或低臭氧型直管紫外線燈（30W），在燈管下方垂直1m的中

6、心處，新燈管的輻照度值應90 uW/cm2 。使用中的燈管的輻照度值應70 uW/cm2 ，低于此值者應予更換。7.4.2 照射劑量表面消毒接受的照射劑量，應達殺滅目標微生物所需。對大腸桿菌，照射劑量應達到7.5103 uWs/cm2,對金黃色葡萄球、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌應達到2.53104uWs/cm2。7.4.2.2照射劑量計算：照射劑量（uWs/cm2 ）紫外燈管強度（uW/cm2）時間（s）7.4.3 細菌及其芽孢和真菌殺滅效果的測定7.4.3.1菌液的制備 接種菌種名稱接種培養基培養條件金黃色葡萄球菌新鮮培養物營養肉湯培養基3035培養1824小時大腸桿菌新鮮培養物枯草芽孢桿菌新

7、鮮培養物白色念珠菌新鮮培養物改良馬丁培養基2328培養2448小時金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、白色念珠菌培養后，將菌液進行活菌計數。7.4.3.2 將滅菌載體平放于滅菌平皿內，每個載體滴注定量菌懸液，（載體回收菌量達51055106 cfu/片），涂勻，放37培養箱烘干。開啟紫外燈5min后，將16個染菌玻片平放于滅菌平皿內，水平放于適當距離照射，于4個不同間隔時間（15min、30 min、45 min、60 min）各取出4個染菌玻片，分別投入4個盛有5ml洗脫液試管中，振打80次。7.4.3.3經適當稀釋后，取1ml洗脫液，作平板傾注，每個染菌玻片接種兩個，細菌放3035培養

8、48小時作活菌計數，真菌放2328培養72小時作活菌計數。7.4.3.4陽性對照，除不做照射處理外，取4個染菌玻片，分別投入4個盛有5ml洗脫液試管中，振打80次。余按7.4.2.3同樣操作。7.4.3.5計算殺滅率 陽性對照回收菌數試驗組回收菌數 殺滅率（） 100 陽性對照回收菌數7.4.3.6判定標準 對指示菌殺滅率99.9判為消毒合格。8、驗證結果記錄：附件1. 試驗菌數量測定原始記錄8、再驗證周期傳遞窗構造或紫外燈管放置位置發生改變時。9、相關SOP文件編號文件名稱020141微生物實驗室管理020143物品進出微生物檢驗室020342微生物檢驗區的清潔消毒020343培養基的配制020344細菌的接種、傳代和保存020377高壓滅菌021267微生物數量的測定10、QA職責QA必須參與驗證的評審階段；QA必須審閱最終報告（包括草案）；QA審閱者不應是參與實施的其他QA人員。11、修改事項在實施過程中，如果方案需要修改，必須提交書面的報告，闡述修改的原因，修改的內容，并經過驗證小組負責人及QA的認可。修改后的方案同先前執行的方案一起歸檔。12、文檔所有的相關文檔都應該保留至少