1、醫學實驗室ISO15189認可性能驗證實驗方案為了滿足目前醫學實驗室認可的需求保證實驗室檢測結果的準確性，特制定本方案。適用于強生VITROS產品的試驗項目的性能驗證，包括V250/V350/V950/FS5.1/V3600/V5600上所能開展的所有定性檢測項目。本方案從準確度、精密度、參考圍、線性圍以及方法學比對5個方面對各個試驗項目進行評價。一、精密度（Precision）：精密度是指在規定條件下所獲得的檢測結果的接近程度，表示測定結果中隨機誤差大小程度的指標。精密度通常用不精密度表示。可以分別評價連續精密度（批精密度）、重復性不精密度（中間精密度，包括批間、日間精密度等）和再現性精密度

2、。本方案采用批和天間兩種方法對各個試驗項目的精密度進行評價。全部實驗過程使用同批號試劑和質控品，并且保證檢測當日質控在控。1、批精密度（連續精密度）：方法：在檢測患者標本過程中，連續運行高低水平質控品各20次，記錄檢測結果。計算批精密度的CV值和SD值。結果評價（1）廠家評價標準：計算精密度指數二驗證SD/廠商SD，精密度指數要求小于等于1,或者實測CV小于等于廠家要求的CV，兩者符合其一即可。具體見精密度評價表格。（2）按照國際推薦標準：批精密度應在CLIA88允許誤差的1/4以，見美國CLIA'88能力比對檢驗的分析質量要求。2、天間精密度（中間精密度）：方法：同樣使用兩個水平的質

3、控品，若需復溶凍干質控品做實驗，要注意選擇產品的穩定性和瓶間差。要嚴格控制每次復溶凍干品時的操作手法。連續測試20天，每天檢測1次。在次過程中不能更換試劑批號及質控品批號，是否需要重新定標則取決于實驗室。測試完成后記錄檢測結果。結果評價(1)廠家評價標準：計算天間的SD及CV值，并計算精密度指數二驗證SD/廠商SD。精密度指數要求小于等于1,或者實測CV小于等于廠家要求的CV，兩者符合其一即可。具體見精密度評價表格。(2) 按照國際推薦標準：批精密度應在CLIA88允許誤差的1/3以，見美國CLIA'88能力比對檢驗的分析質量要求。二、準確度準確度(accuracy)指檢測結果與被測量

4、物真值之間的接近程度。是分析測量圍、分析靈敏度以及生物參考區間評價的基礎。準確度的評價方法很多，比如檢測定值參考物質，同參考方法進行比對，同有溯源性的檢測系統進行方法學比對，衛生部臨檢中心質評的匯報結果均可以作為評價準確性的方法之一。本方案采用測定定值標準物質的方法來評價各個檢測項目的準確度。定值標準物質采用廠家定值標準品。方法：(1) 試驗期間保證機器狀態正常，保證試驗當日室質控在控。(2) 按廠家要求準備各個項目的新批號定標品(要與定標時使用的定標品批號不同）各一套，按照標準復溶。（3）記錄該新批號定標品的定值。（4）在設備上檢測各個定標品（多水平）的相關項目，每個水平重復2次，記錄檢測結

5、果，將檢測結果錄入準確度評價表格。結果評價：（1）廠家標準：按照各定標品各水平的定值和不確定度（廠家提供）來確定準確度的偏倚圍。計算實測均值的各項目各水平定標品的偏倚，與偏倚圍相比較，來判斷偏倚是否可以接受。詳見準確度評價表，實測的均值如果落在該限度，則為其準確度認為可被接受。（2）按照國際推薦標準：準確度偏倚應該在CLIA88允許誤差的1/2以，見美國CLIA'88能力比對檢驗的分析質量要求。三、參考圍驗證參考NCCLSC28A2文件，本方案僅對廠家提供的或者實驗室正在使用的各個項目的參考圍進行驗證。方法：（1）選擇20個能夠代表實驗室的健康總體的標本。（2）保證試驗系統運行正常，依

6、照標準操作程序檢測標本。（3）運行該20份標本，記錄結果，將結果填入參考區間驗證表格。結果評價如果20個參考個體中不超過2例的檢測值在驗證的參考限之外，廠商或提供參考區間的實驗室報告的95%參考區間可以接受。如果3例以上超出界限，再選擇20個參考個體進行驗證，若少于或等于2個觀測值超過原始參考值，則可接受，若還有3個超出參考限，需要重新檢查各種條件，決定是否建立自己的參考區間。四、線性圍分析測量圍即定量檢測項目的線性圍，是整個檢測系統（包括儀器、試劑、校準品、質控品、操作程序、檢驗人員等）對應于系列分析濃度的儀器最終輸出的信號間是否呈恒定比例的性能，是一個很重要的儀器性能分析指標。本實驗通過測

7、定不同配比比例的高低值新鮮患者標本，以驗證實測值和理論值的線性關系，來評估每個檢測項目的線性圍。方法：（1）實驗室人員必須十分熟悉儀器的操作、質量控制和定標方法，以及正確的收集樣本。試驗期間保證儀器狀態良好下，質控在控。（2）全部實驗數據盡可能在較短的時間收集，如可能，單個分析試驗最好在一天做完。（3）用于驗證線性圍的標本類型應與臨床測試所用的標本類型相同或相類似，所有標本應不含廠家所標定的干擾因素（如溶血、黃疸、脂血等）。如果上述條件不可避免，則應在最后的報告中注明在評價實驗中所用的標本處理方法或基質類型。注意：收集的高濃度標本應盡可能的接近線性圍高限。(4) 按照線性評價表格要求配比標本。

8、將H和L樣品按：5L、4L+IH、3L+2H、2L十3H、lL十4H、5H關系各自配制棍合，形成系列評價樣品。(5) 難以收集到低限樣品，可收集高值樣品，用相應稀釋液作系列不同程度稀釋，形成系列評價樣品。(6) 在線性評價表格記錄檢測結果。結果評價：將數據填入線性評價表格，以X表示各樣品的預期值，以Y表示各樣品的實測值，得出散點圖。若所有實驗點呈明顯直線趨勢，用直線回歸對數據進行統計，得直線回歸Y=bX+a，若r2>0.95，斜率b在1.00土0.03圍，可直接判斷測定方法在實驗所涉及的濃度圍成線性。五、用患者標本進行方法比對及偏倚評估實驗室準備用一個新的檢測系統或測定方法(或新的試劑盒

9、、新儀器進行病人標本測定前，應與原有的檢測系統或者公認的參考方法-起檢測一批病人標本，從測定結果間的差異了解新檢測系統或方法引人后的偏倚。如果偏倚不大，或者偏倚量在允許誤差圍，說明兩檢測系統或方法對病人標本測定結果基本相符，新檢測系統或方法替代原有檢測系統或方法不會對臨床引人明顯偏倚，這樣的實驗稱為方法學比較實驗。在方法學比較中，常將新方法稱為實驗方法，與之比較的方法稱為比較方法。試驗方法：(1) 各種儀器處于良好的工作狀態，嚴格按SOP操作。(2) 檢驗人員有足夠的時間熟悉檢測系統的各個環節，熟悉評價方案。(3) 在整個實驗中，保持實驗方法和比較方法都處于完整的質量控制之下，始終對實驗結果有

10、校準措施。(4) 實驗時間至少做5天，時間長一些更好，可以客觀反映實際情況(5)至少做40份病人標本，多一點更好。(6) 盡可能使50%的實驗標本分析物的含量不在參考區間，各個標本分析物含量越寬越好。(7) 不要使用對任一方法有干擾的標本。(8)每份標本應有足夠的量，以便使實驗方法和比較方法都能做雙份測定。例如，第l次序號為1、2.3.4、5.6、7、8,第2次序號為8、7、6、5，4、3、2.1。兩方法都按此實驗。(9) 應在2個小時兩種方法對同批標本分別開始實驗，最好使用當天采集的標本。(10) 實驗結束后，記錄數據。保留原始數據。結果評價：(1)不采用已明確有人為誤差的結果。(2)將所有

11、無明顯誤差的實驗結果記錄下來。但是，若兩種方法結果的各自差值大于任一方法的批不精密度，應查對標本，并重新實驗。若找不出原因，應保留數據備考。(3) 整個實驗一定要有部質量控制，失控時結果必須重做。(4) 對實驗數據的初步篩查： 設比較方法測定結果為X值，實驗方法測定結果為Y值。在方法學比對表格上錄入檢測數據，若有40個標本，則有80個X和Y的結果。 檢查每一方法現份測定值有無離群表現，先計算每一標本每一方法成對結果的差值和差值的均值。以4倍的各方法差值的均值為判斷限，各方法標本的成對差值都應在限值，說明雙份測定結果符合要求。 若原數據僅40例病人標本的結果，剔除的數據應另做實驗補上。若有1例以

12、上需剔除，應檢查原因是標本原因，其他數據仍可使用。無法找出原因，則保留使用所有數據。若最大差異超過臨床允許誤差，應從儀器、試劑、方法上尋找原因，停止繼續實驗。(5) 在方法學比對表格上，以X均值、Y均值和(Y-X)、X作圖，通過這兩種圖了解線性關系，即有無明顯離群點，是否呈恒定變異等情況。如果實驗結果具良好線性關系，繼續處理數據。(6) X、Y關系實驗點有無離群表現先看圖在無明顯離群點。若無，可作以后的統計；若有，應對X、Y配對值作離群值計算。將每一個標本兩個方法的前后兩個測定值一一對應，求出第1個X與第1個Y的差值和第2個X與第2個Y的差值，并計算出所有標本總的平均差值，以4倍的平均差值為判

13、斷限值。所有差值都不應超出限值。若有，為離群點，僅一點離群點，剔除。有一點以上離群點，需查原因，判斷是否保留數據。若原因不清，不能隨意剔除，全部保留作統計分析，或者用一批新標本重做評價。凡有剔除的，應另用標本補做。(7) 標本分析物含量分布是否適當的檢驗。相關系數r常用來表示兩個變量間互相關系密切的程度。在直線回歸統計時，除所有實驗點和回歸線間的離散度會影響r值的大小外，實驗點對應的分析物含量分布寬度也會明顯影響r值的大小。若實驗點過于密集，盡管離散度不大，但r值偏小。因此，可用r檢驗X取值圍是否適當。一般要求r大于或等于0.975(或r2大于或等于0.95)，認為X圍是適合的。若r小于0.9

14、75時，應再多做實驗，擴大數據圍。(8) 線性回歸統計可用直線回歸分析來估計斜率和截距。數據以回歸式Y=bX十a,表示這些數據的直線趨這是以X方法為準，Y方法與之配合的關系式。式中b為斜率,a為截距。兩方法理想狀態的回歸式應為Y=X，即b=l,a=0。根據臨床使用要求，可在各個臨床醫學決定水平濃度Xc處，了解Y方法引人后相對于X方法的系統誤差(SE),SE=|(b-l)Xc+a|。(9) 以美國CLIA'88能力比對檢驗的分析質量要求允許誤差的1/2為判斷依據，由方法學比較評估的系統誤差(SE)不大于允許誤差，認為系統誤差在可接受水平。備注：1、各個實驗室應該根據自己的實際情況，建立性能驗證的方法和標準。該方法適用于科室所有生化設備的驗證。2、上述試驗方案可用于強生Vitros系列產品，僅供實驗室參考。參考文獻：1、臨床檢驗質量管理技術，馮仁豐，上海科學技術文獻2、臨床檢驗方法學評價，有業秀明，人民衛生3、NCCLS，MethodComparisonandBiasEstimationUsingPatientSamples;ApprovedGuideline