1、第三第三章章 實驗室實驗室生物安全生物安全本本 章章 內內 容容第一節第一節 實驗室生物安全概述實驗室生物安全概述 1第二節生物安全實驗室與設備要求第二節生物安全實驗室與設備要求2第三節生物安全實驗室操作技術規范第三節生物安全實驗室操作技術規范3學習目標學習目標學習目標：學習目標： 1.掌握掌握：實驗室生物安全和實驗室生物安全保障的概念； BSL-2實驗室安全操作技術規范； BSL-1、BSL-2在安全設備、個體防護方面的不同。 2.熟悉熟悉：病原微生物危害程度分類等級和實驗室生物安全防護水平分級；感染性物質的操作與處理。 3.了解了解：臨床微生物實驗室布局及設計和建造要求。 本章重點： 實驗

2、室生物安全的概念，BSL-2實驗室生物安全設備要求、實驗室分布及安全防護措施。 實驗室生物安全防護水平分級。感染性物質的操作與處理。第一節第一節 實驗室生物安全概述實驗室生物安全概述一、實驗室生物安全一、實驗室生物安全與保障與保障 （一）實驗室生物安全的概念和防護措施（一）實驗室生物安全的概念和防護措施1 1實驗室生物安全的概念實驗室生物安全的概念 ：實驗室生物安全是指用以防止實驗室發生病原體或毒素意外暴露及釋放的防護原則、技術及實踐。第一節第一節 實驗室生物安全概述實驗室生物安全概述 安全設備和個體防護（一）實驗室生物安全的概念和防護措施（一）實驗室生物安全的概念和防護措施2 2實驗室生物安

3、全防護措施實驗室生物安全防護措施實驗室設計與建造實驗室生物安全管理規章制度安全操作規程 安全設備和安全設備和個體防護個體防護生物安全柜防護服安全裝備和個體防護裝備的使用可以實現將操作者和被操作對象之間的隔離，以防止操作者被感染，也稱一級屏障。 安全設備安全設備生物安全柜、離心機罩帽、負壓隔離器等 個體防護個體防護帽子、手套、面罩、實驗服、隔離衣、防護服、鞋套等 實驗室設計與建造實驗室設計與建造生物安全實驗室和外部環境的隔離，稱為二級屏障，建立此級屏障的目的是防止實驗室外的人員被感染。實驗室生物安全管理規章制度實驗室工作人員的資格和培訓制度實驗室準入制度安全操作規程第一節第一節 實驗室生物安全概

4、述實驗室生物安全概述 1. 1.概念概念：即單位和個人為防止病原體或毒素丟失、被竊、濫用、轉移或有意釋放而采取的安全措施。2. 2.措施：措施： 病原體和毒素的貯存位置、接觸人員資料、使用記錄、運送記錄、對材料進行滅活和（或）丟棄等情況的最新調查結果； 相關人員的作用和責任； 必要時公共衛生和安全保障管理部門在發生違反安全保障事件時的介入程度、作用和責任等； 調查并糾正違規行為。（二）實驗室生物安全保障的概念和措施（二）實驗室生物安全保障的概念和措施二、微生物危害評估二、微生物危害評估 進行微生物危害度評估最有用的工具之一就是列出微生物的危險度等級。適當時還應考慮以下因素： 病原微生物的致病性

5、和感染量；暴露的潛在后果；自然傳播途徑；實驗室操作所致的其他感染途徑；病原微生物在環境中的穩定性；第一節第一節 實驗室生物安全概述實驗室生物安全概述所操作病原微生物的濃度；病原微生物的宿主；從動物研究和實驗室感染報告或臨床報告中得到的信息；擬進行的實驗操作（如超聲處理、離心等）；可能會擴大微生物的宿主范圍或改變病原微生物對于已知有效治療方案敏感性的所有基因技術；當地是否能進行有效的預防或治療。第一節第一節 實驗室生物安全概述實驗室生物安全概述三、病原微生物的分類管理三、病原微生物的分類管理第一節第一節 實驗室生物安全概述實驗室生物安全概述四四 、實驗室生物安全的重要意義、實驗室生物安全的重要意

6、義第一節第一節 實驗室生物安全概述實驗室生物安全概述 是建立病原微生物研究安全平臺的需要 是生物防護（國防）的需要 是出入境檢驗檢疫的需要 是動物防疫的需要 是傳染病的預防與控制的需要 是醫院感染控制的需要 GOARN監測網絡離不開生物安全實驗室第二節第二節 生物安全實驗室與設備要求生物安全實驗室與設備要求一、實驗室生物安全防護水平分級一、實驗室生物安全防護水平分級 實驗室生物安全通用要求（GB19489-2008）根據生物安全實驗室所操作的生物因子的危害程度及采取的防護措施，將生物安全實驗室的生物安全防護水平分為4級。分級處理對象BSL-1對個體和群體低危害，不具有對健康成人、動物致病的致病

7、因子。BSL-2對個體中等危害，對群體危害較低，對人和動物有致病性，但對健康成人、動物和環境不會造成嚴重危害。具有有效的預防和治療措施。BSL-3對個體高度危害，對群體危害程度較高。通過直接接觸或氣溶膠使人傳染上嚴重的甚至是致命疾病的致病因子，通常有預防和治療措施。BSL-4對個體和群體具有高度危害性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，或未知的、高度危險的致病因子。沒有預防和治療措施。第二節第二節 生物安全實驗室與設備要求生物安全實驗室與設備要求一、實驗室生物安全防護水平分級一、實驗室生物安全防護水平分級 危害等級生物安全水平實驗室類型實驗室操作安全設備 級BSL-1（基礎實驗室）基礎的教學、

8、研究GMT不需要；開放實驗臺 級BSL-2（基礎實驗室）初級衛生服務；診斷、研究GMT 加防護服、生物危害標志開放實驗臺，此外需BSC 用于防護可能生成的氣溶膠 級BSL-3（屏障實驗室）特殊的診斷、研究在二級生物安全防護水平上增加特殊防護服、準入制度、定向氣流BSC 和或其他所有實驗室工作所需要的基本設備 級BSL-4（高度屏障實驗室）危險生物因子研究在三級生物安全防護水平上增加氣鎖入口、出口淋浴、污染物品的特殊處理級 BSC 或級 BSC加正壓服、雙開門高壓滅菌器（穿過墻體）、經過濾的空氣與病原微生物危害等級相對應的生物安全水平、實驗室類型、實驗室操作以及主要安全設備的要求。第二節第二節

9、生物安全實驗室與設備要求生物安全實驗室與設備要求 1. 1.清潔區：清潔區：為未被病原微生物污染的區域，包括辦公室、休息室、培養基配制室與試劑儲藏室等，此區域禁止帶入細菌檢驗標本。 2. 2.半污染區：半污染區：為可能被病原微生物污染的區域如緩沖間、工作服放置室、走廊等。 3. 3.污染區（操作區）污染區（操作區）：為已被病原微生物污染的區域，用于接收臨床標本，進一步接種、分離培養、鑒定和藥敏試驗及結果報告等工作。 （一）臨床微生物實驗室布局（一）臨床微生物實驗室布局二、臨床微生物實驗室布局與基本要求二、臨床微生物實驗室布局與基本要求第二節第二節 生物安全實驗室與設備要求生物安全實驗室與設備要

10、求 1 1BSL-1BSL-1和和BSL-2BSL-2實驗室設計的安全原則實驗室設計的安全原則 在設計實驗室時應考慮可能造成實驗室安全問題的情況，主要包括：p 氣溶膠形成p 處理高濃度微生物p 節肢動物和嚙齒動物的侵擾p 儀器設備過多和過度擁擠p 無關人員未經允許進入實驗室p 一些特殊樣品和試劑使用的工作流程（二）實驗室設計和建造的特殊要求（二）實驗室設計和建造的特殊要求第二節第二節 生物安全實驗室與設備要求生物安全實驗室與設備要求 2 2BSL-1BSL-1設計和建造要求設計和建造要求p無需特殊選址p每個實驗室應設洗手池，宜設置在靠近出口處p實驗室的墻壁、天花板和地面應平整p實驗臺面應防水，

11、耐腐蝕、耐熱p實驗室中的櫥柜和實驗臺應牢固p實驗室如有可開啟的窗戶，應設置紗窗p在實驗室工作區外應有存放外衣和私人物品的設施p實驗室門應設有門禁系統，能控制進入p實驗室內應保證工作照明，避免不必要的反光和強光p應有適當的消毒設備（二）實驗室設計和建造的特殊要求（二）實驗室設計和建造的特殊要求第二節第二節 生物安全實驗室與設備要求生物安全實驗室與設備要求3 3BSL-2BSL-2設計和建造要求設計和建造要求 除了具備BSL-1實驗室的設計和建造要求之外，還有如下要求：p應設置實施各種消毒方法的設施，如高壓滅菌器p安全系統應當包括消防、應急供電、洗眼器以及應急噴淋裝置p實驗室門宜帶鎖、可自動關閉。

12、實驗室的門應有可視窗p實驗室出口應有發光指示標志p不需特殊的通風設備，可采取窗戶自然通風，同時安裝紗窗p應有足夠的儲存空間擺放物品以方便使用p有可靠和充足的電力供應和應急照明（二）實驗室設計和建造的特殊要求（二）實驗室設計和建造的特殊要求第二節第二節 生物安全實驗室與設備要求生物安全實驗室與設備要求一級生物安全水平實驗室示意圖二級生物安全水平實驗室示意圖BSL-1實驗室與BSL-2實驗室安全設備和個體防護的要求區別：三、安全設備和個體防護三、安全設備和個體防護第二節第二節 生物安全實驗室與設備要求生物安全實驗室與設備要求BSL-1BSL-1實驗室實驗室BSL-2BSL-2實驗室實驗室安全設備對

13、高壓滅菌、離心機安全罩沒有要求，必要時可配生物安全柜應配備級生物安全柜、高壓蒸汽滅菌器，根據實驗內容，確定是否需要安裝洗眼器個體防護工作服、手套 防護服、手套、帽子、口罩、護目鏡第三節第三節 生物安全實驗室操作技術規范生物安全實驗室操作技術規范一、一、實驗室準實驗室準入要求入要求 1.禁止非工作人員進入實驗室。參觀實驗室等特殊情況須經實驗室負責人批準后方可進入。 2.實驗室的門應保持關閉。 3.BSL-2實驗室入口處應貼有國際通用的生物危害警告標志，其下部應注明實驗室的生物安全等級、實驗室名稱、負責人姓名和聯系電話等有關信息 4. 4.進入動物房應當經過特殊批準，禁止將無關動物帶入實驗室。第三

14、節第三節 生物安全實驗室操作技術規范生物安全實驗室操作技術規范二二、實驗室操作要求、實驗室操作要求 1.所有實驗操作要按盡量減少微小液滴和氣溶膠產生的方式來進行。 2.以移液器吸取液體，禁止舔標簽。 3.應限制使用皮下注射針頭和注射器。 4.盡可能應用一次性注射器，用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽，禁止用手從注射器上取下針頭。用過的針頭必須放入防穿透的銳器盒中。非一次性利器必須放入銳器盒中并運送到特定區域進行高壓滅菌。 5.禁止用手處理破碎的玻璃器具。裝有污染針、利器及破碎玻璃的容器在丟棄之前必須高壓滅菌。第三節第三節 生物安全實驗室操作技術規范生物安全實驗室操作技術規范二二、實驗室操

15、作要求、實驗室操作要求 6.實驗室必須制定并嚴格執行處理溢出物的標準操作規程。 7.在處理完感染性實驗材料和動物以及其他有害物質后，脫掉手套后及離開實驗室前，都必須洗手。 8.禁止在實驗室工作區進食、飲水、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲存食物。 9.每天工作結束后應消毒工作臺面，具有潛在危害性的材料濺出后要隨時消毒。第三節第三節 生物安全實驗室操作技術規范生物安全實驗室操作技術規范二二、實驗室操作要求、實驗室操作要求 10.所有培養物、廢棄物在運出實驗室之前必須進行高壓滅菌。需運出實驗室滅菌的物品必須放在專用密閉防漏的容器內儲存、運輸。 11.實驗室的文件紙張只有保證未受到污染才可帶出。 12.

16、將生物安全程序納入標準操作規范或生物安全手冊，由實驗室負責人專門保管，工作人員在進入實驗室之前要閱讀規范并按照規范要求操作。 13.工作人員要接受有關的潛在危險知識的培訓，掌握預防暴露以及暴露后的處理程序。每年要接受一次最新的培訓。第三節第三節 生物安全實驗室操作技術規范生物安全實驗室操作技術規范三、感染性物質的操作與處理三、感染性物質的操作與處理 （一）感染性物質的操作（一）感染性物質的操作 1. 1.標本采集：標本采集：必須有掌握相關職業知識和操作技能的工作人員進行采集，并根據采集的標本中可能含有病原微生物的危害程度而采取相應的個人防護。 2. 2.標本運送：標本運送：采集的標本應采取防止

17、污染工作人員、患者及環境的方式在醫療機構內運送。第三節第三節 生物安全實驗室操作技術規范生物安全實驗室操作技術規范（一）感染性物質的操作（一）感染性物質的操作 3. 3.標本接收和打開：標本接收和打開：需要接收大量標本的實驗室應當設專門的房間或空間。標本的內層容器應在生物安全柜內打開，并備好消毒劑。 第三節第三節 生物安全實驗室操作技術規范生物安全實驗室操作技術規范（一）感染性物質的操作（一）感染性物質的操作 4. 4.血清分離：血清分離：操作時應戴手套并注意眼睛和黏膜的防護。 5. 5.感染性物質凍干管的開啟和儲存感染性物質凍干管的開啟和儲存：凍干管的開啟應在生物安全柜中進行。首先清潔外表面

18、，在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡，用一團酒精浸泡的棉花將管包起來以保護雙手，然后從銼痕處打開。將頂部小心移去并按污染材料處理。緩慢向管中加入液體重懸凍干物，避免出現泡沫。第三節第三節 生物安全實驗室操作技術規范生物安全實驗室操作技術規范（二）暴露的處理（二）暴露的處理 1 1銳器傷及其他損傷銳器傷及其他損傷：受傷人員應立即停止工作，脫防護服；清洗雙手和受傷部位，如有傷口，應當在傷口旁端輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，再用洗手液和流動水沖洗，禁止進行傷口的局部擠壓；受傷部位的傷口沖洗后，使用皮膚消毒劑，如75%乙醇或者0.5%碘伏進行消毒，必要時進行醫學處理；應記錄受傷原因及相關微生物，

19、并保留完整的醫療記錄。第三節第三節 生物安全實驗室操作技術規范生物安全實驗室操作技術規范（二）暴露的處理（二）暴露的處理 2 2潛在感染性物質的食入潛在感染性物質的食入 ：應立即脫防護服并進行醫學處理，要報告食入材料的特性和暴露細節，并保留完整的醫療記錄。 3 3潛在危險性氣溶膠釋放：潛在危險性氣溶膠釋放：所有人員必須立即撤離現場，并及時通知實驗室負責人和生物安全負責人，暴露者接受醫學咨詢。應張貼“禁止進入”的標志，待氣溶膠排出、粒子沉降（約1小時）后方可入內。清除污染時應穿戴適當的防護裝備。第三節第三節 生物安全實驗室操作技術規范生物安全實驗室操作技術規范（二）暴露的處理（二）暴露的處理 4

20、. 4. 潛在感染性物質溢出：潛在感染性物質溢出：處理溢出的人員必須穿防護服，戴手套，必要時需對面部和眼睛進行保護。首先用布或紙巾覆蓋，由外圍向中心傾倒消毒劑，作用一定時間（約30分鐘）后，將布、紙巾以及破損物品清理掉，玻璃碎片應用鑷子或硬的厚紙板等工具清理并置于銳器盒中，切勿直接用手，以免刺破皮膚。再用消毒劑擦拭污染區域。用于清理的布、紙巾、抹布及厚紙板應放在盛放污染性廢棄物的容器內，污染的文件（包括記錄）復制后，將原件丟入放污染物廢棄物的容器。第三節第三節 生物安全實驗室操作技術規范生物安全實驗室操作技術規范（二）暴露的處理（二）暴露的處理 5 5離心管破碎：離心管破碎： 如果正在運行時非封閉離心桶的離心機內盛有潛在感染性物質的離心管發生破裂，應關閉機器電源，停止后密閉離心桶約30分鐘，待氣溶