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文檔簡介

1、實訓(xùn) 應(yīng)用紫外線誘導(dǎo)篩選耐高糖的谷氨酸高產(chǎn)菌株試驗?zāi)康?通過紫外線誘變篩選耐高糖的谷氨酸高產(chǎn)菌株試驗原理 紫外線是一種最常用的物理誘變因素。 主要作用是使DNA雙鏈之間或同一條鏈上的兩個相鄰的胸腺嘧啶形成二聚體，阻礙雙鏈的分開、復(fù)制和堿基的正常配對，從而引起突變。 操作在紅光下進行，并且將照射處理后的微生物放在暗處培養(yǎng)。 谷氨酸棒桿菌是谷氨酸生產(chǎn)菌種，是生物素缺陷型菌株。 生物素缺陷型菌株是指只有在加入了生物素的培養(yǎng)基中才能生長的菌株。 生物素（Biotin）為B族維生素之一，又稱維生素H、維生素B7、輔酶R等。 菌種通過紫外線誘變處理后利用含有茚三酮的高糖選擇性平板培養(yǎng)，耐高糖、產(chǎn)酸的菌株不

2、但能夠在平板上長出菌種，而且菌落周圍呈現(xiàn)紅色。根據(jù)平板上菌種生長請款可以得到耐高糖產(chǎn)酸的突變株，再經(jīng)過搖瓶初篩、復(fù)篩可獲得耐高糖、高產(chǎn)的突變株。 選擇培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基。其功能是使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選效率。意義 耐高糖菌種的選育對發(fā)酵工藝上提高發(fā)酵培養(yǎng)基初糖濃度具有積極的意義。操作步驟 菌懸液的制備 誘變處理 預(yù)熱紫外燈 預(yù)熱20min，使紫外線強度穩(wěn)定 加菌懸液 紫外線照射 對紫外線照射時間做水平試驗，40s、60s、80s、100s、120s 照射計時從培養(yǎng)皿開蓋起，加蓋止；從紫外線照射處理開始，直到涂布完平板的所有操作都必須在紅燈下進行。 稀釋菌液及涂布選擇性培養(yǎng)基純種分離方法 稀釋分離 傾注平板法傾注平板法 涂布平板法涂布平板法培養(yǎng) 將涂布好的平板用黑紙包好，倒置，于32攝氏度培養(yǎng)48h菌落計數(shù)、計算致死率以及繪制致死率曲線以誘變時間為橫坐標(biāo)、致死率為縱坐標(biāo)繪制致死率曲線以誘變時間為橫坐

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