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1、會(huì)計(jì)學(xué)1生物化學(xué)核酸生物化學(xué)生物化學(xué)核酸生物化學(xué)學(xué)習(xí)要求學(xué)習(xí)要求核酸化學(xué)的發(fā)展過(guò)程n 著名的肺炎球菌實(shí)驗(yàn) n 著名的肺炎球菌實(shí)驗(yàn) 從加熱殺死的S型肺炎球菌將蛋白質(zhì)、核酸、多糖、脂類(lèi)分離出來(lái),分別加入到無(wú)害的R型肺炎球菌中,結(jié)果發(fā)現(xiàn),惟獨(dú)只有核酸可以使無(wú)害的R型肺炎球菌轉(zhuǎn)化為有害的S型肺炎球菌。1944年 結(jié)論:DNA是生命的遺傳物質(zhì)侵染侵染DNADNA注射注射進(jìn)細(xì)胞進(jìn)細(xì)胞蛋白質(zhì)外殼蛋白質(zhì)外殼 DNA噬菌體噬菌體大腸桿菌大腸桿菌戊糖 堿基磷酸 核苷核苷酸核酸 尿嘧啶尿嘧啶胸腺嘧啶胸腺嘧啶胞嘧啶胞嘧啶NNHHHH嘧啶123456NNHHHHNH2OH胞嘧啶 Cytosine(C)NNHHHHOOH
2、H尿嘧啶 uracil(U)NNHHHHOOHHCH3胸腺嘧啶 thymine(T)NNNNHHHHNNNNHHHH123 456789嘌呤NH2腺嘌呤 adenine(A)NNNNHHHHOH2N鳥(niǎo)嘌呤 guanine(G)OHOH2COHOHOH12345核 糖NNNNHHHH9腺嘌呤腺 苷OHOH2COHOHOH12345核 糖OHOH2COHOH12345核 糖NNOOHHH尿嘧啶H1尿苷NCOONHHH51OH假尿苷() RNA DNA組成組成戊糖戊糖 核糖核糖 脫氧核糖脫氧核糖堿基堿基 A,G,CA,G,C U T磷酸磷酸 Pi(磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵)Pi(磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵)結(jié)
3、構(gòu)結(jié)構(gòu)單鏈,部分堿基互補(bǔ),局部雙單鏈,部分堿基互補(bǔ),局部雙螺旋,三葉草形等螺旋,三葉草形等雙鏈,堿基互補(bǔ),雙螺旋雙鏈,堿基互補(bǔ),雙螺旋形形分布分布細(xì)胞核細(xì)胞核(核仁核仁), 細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)(線(xiàn)粒體、線(xiàn)粒體、核蛋白體、胞液核蛋白體、胞液)細(xì)胞核細(xì)胞核(染色質(zhì)染色質(zhì)) 細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)(線(xiàn)粒體線(xiàn)粒體)生物功能生物功能遺傳信息表達(dá),反轉(zhuǎn)錄,直接遺傳信息表達(dá),反轉(zhuǎn)錄,直接參與蛋白質(zhì)的生物合成參與蛋白質(zhì)的生物合成遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ),負(fù)責(zé)遺遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ),負(fù)責(zé)遺傳信息貯存,發(fā)布,轉(zhuǎn)錄傳信息貯存,發(fā)布,轉(zhuǎn)錄核苷中戊糖的羥基被磷酸酯化,即為核苷酸。環(huán)化磷酸化環(huán)化磷酸化 cAMPcGMPOHO-O OCH2 TO=PO-
4、35OHOHO-O OCH2 GO=PO-35OHO OCH2OHOH AO=POO-35351PPPOHATGpGpTpAOHpG-T-ApGTA雙螺旋中的堿雙螺旋中的堿基對(duì)基對(duì)B-DNAA-DNAZ-DNAB-DNA與與A-DNA特殊DNA的結(jié)構(gòu)上頁(yè) 下頁(yè) 章首 節(jié)首特殊DNA的結(jié)構(gòu)上頁(yè) 下頁(yè) 章首 節(jié)首 DNA的三股螺旋結(jié)構(gòu)主要特征主要特征:1.1.四臂四環(huán);四臂四環(huán);2.2.氨基酸臂氨基酸臂33端有端有CCACCAOHOH的共有結(jié)構(gòu);的共有結(jié)構(gòu);3.D3.D環(huán)上有二氫尿嘧啶環(huán)上有二氫尿嘧啶(D D););4.4.反密碼環(huán)上的反密反密碼環(huán)上的反密碼子與碼子與mRNAmRNA相互作用相互作
5、用;5.5.可變環(huán)上的核苷酸可變環(huán)上的核苷酸數(shù)目可以變動(dòng);數(shù)目可以變動(dòng);6.T6.TC C環(huán)含有環(huán)含有T T和和;7.7.含有修飾堿基和不含有修飾堿基和不變核苷酸。變核苷酸。3) 3) 功能:功能:是蛋白質(zhì)合成的模板是蛋白質(zhì)合成的模板一般的理化性質(zhì)一般的理化性質(zhì)水解性:水解性:可被酸、堿或酶水解,可被酸、堿或酶水解,DNADNA比比RNARNA對(duì)對(duì)稀堿穩(wěn)定。稀堿穩(wěn)定。酶水解酶水解v參與參與DNADNA修復(fù)及修復(fù)及RNARNA合成后的剪接等重要基因合成后的剪接等重要基因復(fù)制和基因表達(dá)過(guò)程復(fù)制和基因表達(dá)過(guò)程 v負(fù)責(zé)清除多余的、結(jié)構(gòu)和功能異常的核酸,負(fù)責(zé)清除多余的、結(jié)構(gòu)和功能異常的核酸,同時(shí)也可以清
6、除侵入細(xì)胞的外源性核酸同時(shí)也可以清除侵入細(xì)胞的外源性核酸 v在消化液中降解食物中的核酸以利吸收在消化液中降解食物中的核酸以利吸收 v體外重組體外重組DNADNA技術(shù)中的重要工具酶技術(shù)中的重要工具酶 生物體內(nèi)的生物體內(nèi)的核酸酶核酸酶負(fù)責(zé)細(xì)胞內(nèi)外催化核酸的降解負(fù)責(zé)細(xì)胞內(nèi)外催化核酸的降解人民不是小白鼠人民不是小白鼠00.10.20.30.4220240260280300波長(zhǎng) / nm光吸收變性變性DNA天然天然DNADNADNA變性與復(fù)性變性與復(fù)性Southern印跡法印跡法用于檢測(cè)DNA方法:如圖n 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)l每一輪聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可使目的基因片段增加一倍30輪循環(huán)可獲得 230(1
7、.07109)個(gè)基因片段(五五) 核酸序列分析核酸序列分析酶底物作用部位作用產(chǎn)物外切酶磷酸二酯酶 DNA, RNA5端,5連接處3核苷酸3端,3連接處5核苷酸內(nèi)切酶脫氧核糖核酸酶 IDNA3連接處3-羥核苷酸為3末端寡核苷酸及剩余部分脫氧核糖核酸酶II5連接處3-核苷酸為3末端寡核苷酸及剩余部分核糖核酸 酶T1RNA5連接處堿基是G3-鳥(niǎo)苷酸為3末端寡核苷酸及剩余部分核糖核酸 酶 I5連接處堿基是 Pyr3-嘧啶類(lèi)核苷酸為3末端寡核苷酸及剩余部分平行進(jìn)行四組反應(yīng),每組反應(yīng)均使用相同的模板,相同的引物以及四種脫氧核苷酸;并在四組反應(yīng)中各加入適量的四種之一的雙脫氧核苷酸,使其隨機(jī)地接入DNA鏈中,使鏈合成終止,產(chǎn)生相應(yīng)的四組具有特定長(zhǎng)度的、不同長(zhǎng)短的DNA鏈。這四組DNA鏈再經(jīng)過(guò)聚丙烯酸胺凝膠電泳按鏈的長(zhǎng)短分離開(kāi),經(jīng)過(guò)放射自顯影顯示區(qū)帶,就可以直接讀出被測(cè)DNA的核苷酸序列,如下圖所示: l核酸的化學(xué)結(jié)構(gòu):核酸的化學(xué)結(jié)構(gòu):堿基、核苷、核苷酸。堿基、核苷、核苷酸。lDNADNA的結(jié)構(gòu):的結(jié)構(gòu):DNADNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu),的一級(jí)結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu),RNARNA的結(jié)構(gòu):的結(jié)構(gòu):RNARNA的類(lèi)型和結(jié)構(gòu)特點(diǎn),的類(lèi)型和結(jié)構(gòu)特點(diǎn),tRNA tRNA 、mRNAmRNA、 rRNArRNA的結(jié)構(gòu)和功能。的結(jié)構(gòu)和功能。l核酸的性質(zhì):核酸的性質(zhì):解離性質(zhì)、水解性質(zhì)、光吸解離性質(zhì)、水解
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