1、發酵法生產發酵法生產L L天冬酰胺酶天冬酰胺酶 學生模擬組建運營一個學生模擬組建運營一個L天冬酰胺酶生產企天冬酰胺酶生產企業，撰寫計劃書業，撰寫計劃書(在理論教學期間完成在理論教學期間完成)。 市場部：市場部：L天冬酰胺酶的結構、功能、天冬酰胺酶的結構、功能、用途，用途，L天冬酰胺酶市場狀況與銷售預測，天冬酰胺酶市場狀況與銷售預測，競爭對手狀況與分析。競爭對手狀況與分析。 技術部：確定技術部：確定L天冬酰胺酶生產的工天冬酰胺酶生產的工藝流程及工藝參數，編制生產操作規程，藝流程及工藝參數，編制生產操作規程，確定生產車間的布局。確定生產車間的布局。 品控部：制定品控部：制定L天冬酰胺酶的質量標天冬

2、酰胺酶的質量標準，生產取樣分析操作規程，質量檢測標準，生產取樣分析操作規程，質量檢測標準和操作規程。準和操作規程。 總經理：協調監督各部工作，最后拿總經理：協調監督各部工作，最后拿出完整的計劃書。出完整的計劃書。L-天冬酰酶生產工藝天冬酰酶生產工藝l一、結構與性質一、結構與性質l 由四個相同亞基組成，有由四個相同亞基組成，有222個對稱軸，個對稱軸，每個亞基含每個亞基含326個氨基酸殘基。個氨基酸殘基。l 用于兒童急性淋巴細胞白血病用于兒童急性淋巴細胞白血病 、單細胞、單細胞白血病、淋巴肉瘤、胰腺癌等。白血病、淋巴肉瘤、胰腺癌等。l 機理：機理：l 降低人體內天冬酰胺和谷氨酰胺濃度，降低人體內

3、天冬酰胺和谷氨酰胺濃度，正常細胞可自我合成，癌細胞不具備這種正常細胞可自我合成，癌細胞不具備這種能力，從而受到抑制。能力，從而受到抑制。l 性狀：性狀：l 白色粉末，微吸濕，溶于水，不溶于有白色粉末，微吸濕，溶于水，不溶于有機溶劑。機溶劑。l二、生產工藝二、生產工藝l1 工藝路線工藝路線l2 工藝過程及控制要點工藝過程及控制要點l(1)菌種培養菌種培養l 采取大腸桿菌采取大腸桿菌AS1-375，普通牛肉培養，普通牛肉培養基，接種后于基，接種后于37培養培養24h。 l(2) 種子培養種子培養l 16玉米漿，接種量玉米漿，接種量11.5，37通氣攪拌培養通氣攪拌培養48h。l(3)發酵罐培養發酵

4、罐培養l 玉米漿培養基，接種量玉米漿培養基，接種量8，37通氣通氣攪拌培養攪拌培養68h，離心分離發酵液，得菌體，離心分離發酵液，得菌體，加加2倍量丙酮攪拌，壓濾，濾餅過篩，自然倍量丙酮攪拌，壓濾，濾餅過篩，自然風干成菌體干粉。風干成菌體干粉。 l(4) 提取、沉淀、熱處理提取、沉淀、熱處理l 每千克菌體干粉加入每千克菌體干粉加入0.OlmolL pH8.0的硼酸緩沖液的硼酸緩沖液lOL 37保溫攪拌保溫攪拌1.5h，降，降溫到溫到30以后，用以后，用5molL醋酸調節醋酸調節pH4.24.4進行壓濾，濾液中加入進行壓濾，濾液中加入0.2倍體倍體積的丙酮，放置積的丙酮，放置34h，過濾，收集沉

5、淀，過濾，收集沉淀，自然風干，即得干粗酶。自然風干，即得干粗酶。 l 取粗制酶，加入取粗制酶，加入0.3甘氨酸溶液，調節甘氨酸溶液，調節pH8.8，攪拌，攪拌1.5h，離心，收集上清液，加，離心，收集上清液，加熱到熱到6030min進行熱處理。離心棄去沉進行熱處理。離心棄去沉淀，上清液加淀，上清液加2倍體積的丙酮，析出沉淀，倍體積的丙酮，析出沉淀，離心，收集酶沉淀，用離心，收集酶沉淀，用0.01molL，pH8.0磷酸緩沖液溶解，再離心棄去不溶物，磷酸緩沖液溶解，再離心棄去不溶物，得上清酶溶液。得上清酶溶液。 l(5)精制、凍干精制、凍干l 上述酶溶液調節上述酶溶液調節pH8.8，離心棄去沉淀

6、，清液，離心棄去沉淀，清液再調再調pH7.7加入加入50聚乙二醇，使濃度達到聚乙二醇，使濃度達到16。在在25放置放置45天，離心得沉淀。用蒸餾水溶天，離心得沉淀。用蒸餾水溶解，加解，加4倍量的丙酮，沉淀，同法反復倍量的丙酮，沉淀，同法反復1次，沉淀次，沉淀用用pH6.4，0.05molL磷酸緩沖液溶解，磷酸緩沖液溶解，50聚聚乙二醇反復處理乙二醇反復處理1次，即得無熱原的次，即得無熱原的L天門冬酰天門冬酰胺酶。溶于胺酶。溶于0.5molL磷酸緩沖液，在無菌條件磷酸緩沖液，在無菌條件下用下用6號垂熔漏斗過濾，分裝，冷凍干燥制得注號垂熔漏斗過濾，分裝，冷凍干燥制得注射用射用L天門冬酰胺酶成品，每支天門冬酰胺酶成品，每支1萬或萬或2萬單位。萬單位。l3 檢測方法檢測方法l 取取lml0.04molL的的L天門冬酰胺，天門冬酰胺，0.5molLpH8.4的硼酸緩沖液，的硼酸緩沖液，0.5ml細細胞懸浮液或酶液，于胞懸浮液或酶液，于37水浴中保溫水浴中保溫15min后加后加0.5ml15三氯醋酸，以終止反三氯醋酸，以終止