1、 2014 學年 秋季 學期 第 16 周 總課時：2課程名稱畜禽繁殖與改良時間2014年12月1日星期星期一任課教師白緒珍職稱中學一級節次第5-6節 班 級三年級養殖班授課時數 2教具安排多煤體教學題目第9章 動物繁殖新技術第一節 胚胎移植技術教學方法提問法、講授法、練習法教學內容目標要求教學內容：掌握胚胎移植的生理基礎和處理程序掌握胚胎移植的基本原則了解現代動物繁殖新技術重點難點：掌握胚胎移植的生理基礎和處理程序了解現代動物繁殖新技術情感目標能力點：培養學生熱愛生命、關愛生活的情趣專業素質滲透點：通過講解“胚胎移植技術”讓學生了解生物界基本結構的統一性，使學生初步建立唯物主義進化論意識?！?/p>

2、教學過程組織】清點人數（12分鐘）復習導入：卵巢囊腫有哪幾種情況？（13分鐘）Ø 進入新課一、胚胎移植的意義（ 20分鐘）1充分發揮優良母畜的繁殖潛力 縮短優了良母畜的繁殖周期同時可產生更多的后代。2.縮短世代間隔，及早進行后裔測定能 通過重復超數排卵，不斷移植，使后代總數大大地增加，可及早地對后代進行后裔測定，MOET育種已成為現代育種工作的有力手段。3.增加雙胎率 在肉牛業和肉羊業中通過胚胎移植增加雙胎率。不但提高了供體母畜的繁殖率，同時也提高了受體母畜的繁殖率，從而大大提高了生產效率。4.保存品種資源 胚胎長期保存是保存動物品種資源的理想方法。冷凍胚胎和冷凍精液共同構成動物優良

3、性狀的基因庫。5.防止疾病傳播 在養豬業中，采用胚胎移植技術代替剖腹取仔的方法可培育無特異病原體（SPE）豬群。6.使不孕母畜獲得生育能力 對于不能妊娠的母畜，可以根據具體情況專門作為供體或受體，繼續發揮其繁殖作用。7.促進基礎理論研究 胚胎移植技術為動物繁殖生理學、生物化學、遺傳學、細胞學、胚胎學、免疫學、動物育種學和進化等學科開辟了新的試驗研究途徑。8.滿足畜牧業現代化的需要 胚胎移植可以使優良母畜的繁殖效率接近或達到生物學最高限度，并且能夠迅速改進家畜的品質。二、胚胎移植的基本原則（20分鐘）（一）胚胎移植前后供體和受體所處環境的同一性1.在分類學上的同屬性 在分類學上屬于同一個種。2.

4、生理上的一致性 一般供、受體發情同步差要求在±24h以內。3.解剖部位的一致性 胚胎采自供體的輸卵管就移到受體的輸卵管，采自供體的子宮角就移至受體的子宮角。（二）胚胎發育的期限胚胎采集和移植的期限（胚胎日齡）不能超過發情周期黃體的壽命， （三）胚胎的質量在胚胎移植全部操作過程中，胚胎不應受任何不良因素的影響。（四）供、受體的狀況1.生產性能和經濟價值 供體的生產性能要高于受體，經濟價值要大于受體，這樣才能體現胚胎移植的優越性。2.全身及生殖器官的生理狀況 供、受體應健康、營養良好、體質健壯，特別是生殖器官應具有正常生理機能，否則會影響胚胎移植效果。三、胚胎移植技術（28分鐘）胚胎移植

5、的過程，在各種家畜基本相同，都是要經過供體、受體的選擇，供體超排處理，受體同期發情處理，配種（輸精），收集胚胎（采卵）和移植胚胎（移卵）等步驟。（一）供體和受體的選擇1.供體的選擇（1）生產性能高，經濟價值大，具備遺傳優勢，在育種上有價值。（2）既往繁殖史正常，無遺傳缺陷，具有良好的繁殖能力，且分娩順利。（3）體質健壯，膘情適度。2.受體的選擇 受體母畜可選用非優良品種個體，但應具有良好的繁殖性能和健康體況，可選擇與供體發情周期同步的母畜為受體。（二）藥品和器械的準備1.藥品 FSH、HCG、PGF2a；麻醉劑；生鹽理水、75%酒精、2%碘酒、青霉素。2.器械 10ml和1ml注射器、手術刀、

6、剪子、鑷子、止血鉗、創布、縫合針、線及手術臺；沖胚管、移胚管、顯微鏡、表面皿、凹玻片、拔胚針等。（三）供體的超數排卵 超排技術通常用于單胎家畜，其目的是讓優良母畜排出大量卵子，充分發揮其繁殖潛力，是胚胎移植中的一個重要環節。1.超排方法（1）PMSG或FSH超排 給供體母畜注射PMSG或FSH，發情開始后1216h和2024h各配種（輸精）一次，并于第一次配種后靜脈注射HCG或LH，以便排出更多卵子。激素的應用時間和劑量因家畜種類不同而有差異。（2）配合應用前列腺素（PG） PG的用法通常是在應用PMSG以后大約48h進行肌注。牛的用量因PG種類而異，PGF2a為30mg，15甲基PGF2a為

7、 2mg,氯前列烯醇為500mg；綿羊和山羊的用量為牛的一半。（3）PMSG與抗PMSG配合使用 抗PMSG可以消除PMSG的殘留作用，明顯增加可用胚胎數，提高超排效果。2.超排效果的評判標準 超排是胚胎移植中最難控制的一個環節，在實踐中只要能使一半以上處理母畜達到滿意結果，則認為超排是成功的。隨堂練習（35分鐘）通過對當堂課內容的總結來了解學生的掌握情況，并對學生有困惑的地方進行再一次的講解。1超數排卵的方法有 、 、 2.胚胎移植的意義有 、 、 、 、 、 、 、 3胚胎移植的基本原則有 、 、 、 小結：采用學生互相提問方式（310分鐘）如：A學生問：“超數排卵的方法有？由B學生回答等

8、課后作業：（12分鐘）1.胚胎移植的基本程序是什么？2.在胚胎移植時如何選擇供體和受體？3.如何對供供進行超數排卵？板書設計：第一節 胚胎移植技術一、胚胎移植的意義二、胚胎移植的基本原則（一）胚胎移植前后供體和受體所處環境的同一性（二）胚胎發育的期限（三）胚胎的質量（四）供、受體的狀況三、胚胎移植技術（一）供體和受體的選擇（二）藥品和器械的準備（三）供體的超數排卵 教后感：利用多媒體輔助展示教學過程中遇到的抽象問題，多媒體設計直觀性，這充分調動了學生的積極性、主動性和創造性，從而更容易地達到了教學目的，使學生在愉快、輕松的環境中獲得知識，培養了技能 。 2014 學年 秋季 學期 第 16 周

9、 總課時：4課程名稱畜禽繁殖與改良時間2014年12月5星期星期5任課教師白緒珍職稱中學一級節 次第4-5節班 級三年級養殖班授課時數2教具安排多煤體教學題目第九章動物繁殖新技術第一節 胚胎移植技術教學方式演示法、講授法、練習法教學內容目標要求教學內容：.掌握受體的同期發情處理方法。.掌握采胚方法和移胚方法。重點難點：受體的同期發情處理 胚胎的采集和移胚情感目標： 能力點：掌握胚胎的采集和移植專業素質滲透點：通過講解“胚胎的移植”的基本知識，讓學生了解畜禽體生長的一般規律，使學生建立科學的認識觀教學過程組織：清點人數（12分鐘）復習導入：卵巢囊腫有哪幾種情況？（35分鐘）Ø進入新課（

10、四）、受體的同期發情（ 20分鐘）當前比較理想的同期發情藥物是前列腺素及其類似物，其劑量因PG種類和用法不同而異。15-甲基 PGF2a 2mg肌注，氯前列烯醇500mg肌注。各種家畜實施超排處理的具體方法見本書第5章家畜繁殖技術中的發情控制技術部分。（五）供體的發情鑒定和配種超排處理結束后，要密切觀察供體的發情征狀，為確保卵子受精，一般在發情812h輸精一次，以后間隔812h再輸精一次，并且要加大輸精量。（六）胚胎采集在配種或輸精后適當時間，從超排供體回收胚胎，準備給受體移植，稱胚胎采集或胚胎回收，簡稱采胚。1.沖胚液和培養液的配制 現在多采用杜氏磷酸鹽緩沖液（PBS），不但可用于沖洗、采集

11、胚胎，還用于體外培養、冷凍保存和解凍胚胎。沖胚液犢牛血清含量一般為3%（1%5%），培養液血清含量為20%（1%50%）。犢牛血清需加熱（56水浴30min）滅活。2.采胚時間 根據配種時間、排卵的大致時間、胚胎的運行速度、胚胎的發育階段、畜種、胚胎所處部位及采胚方法等因素來確定是適宜的采胚時間。3.采胚方法 采胚方法分為手術法和非手術法兩種。手術法適用于各種動物，尤其是綿羊、山羊、豬及實驗動物；非手術法僅適用于牛、馬等大家畜，且只能在胚胎進入子宮后進行。（1）手術法采胚A 母畜保定 一種方法是用全身或后軀麻醉，母畜進行仰臥保定。另一種方法是用局部麻醉，使母畜站立于六柱欄中保定。兩者的保定姿勢

12、均為前低后高的方式。B 麻醉 全身麻醉可用普魯卡因、酒精等；局部后軀麻醉用普魯卡因、利多卡因進行腰薦或尾椎硬膜外腔注射，手術部位再以利多卡因作皮膚浸潤麻醉。C 手術部位 母?？稍谌榉恐聊毧字g的白線上剖腹，切口長約10cm；羊在乳房左側切口，切口長度46cm。D 采胚 主要包括有輸卵管沖胚法、子宮角沖胚法和輸卵管子宮角沖胚法三種。配教材圖圖9-2、圖9-3ES防止手術部粘連的方法不要用金屬器械挾持生殖器官。所用手套、棉花、紗布等術前要用生理鹽水浸濕，以防粘附于生殖器官上。在生殖器官表面撒涂低濃度肝素液、樟腦油等，以防止其表面附著血或血凝塊。縫合要牢固、緊密，防止術后發生疝癥。（2）非手術法采胚

13、 由于手術法采胚在生產應用中受到限制，目前在馬、牛等大家畜都用采胚管進行非手術法采胚，一般在配種后7（68）天進行。供體牛的保定和麻醉同手術法采胚，采胚時先用擴張棒對子宮頸進行擴張（青年牛尤為必要）。采胚管消毒后，將無菌不銹鋼導桿插入采胚管內。將采胚管經子宮頸緩慢導入一側子宮角基部，由助手抽出部分不銹導桿，操作者繼續向前推進采胚管，當達到子宮角大彎附近時，助手從進氣口注入1225ml氣體。當氣囊位置和充氣量合適時，抽出全部不銹鋼導桿。助手用注射器吸取事先加溫至37的沖胚液，從采胚管的進水口推進，進入子宮角內，再將沖胚液連同胚抽回注射器內，如此反復沖洗和回收56次，將每次回收的沖胚液收入集胚器內

14、，并置于37的恒溫箱或無菌檢胚室內等待檢胚。一側子宮角沖胚結束后，按上邊方法再沖洗另一側子宮角。配教材圖9-44.檢胚 檢胚應在2025的無菌操作室內進行。在立體顯微鏡下，檢查收集到的胚胎數，并用一細檢胚吸管將胚胎移至新鮮培養液內，在放大40200倍的復式顯微鏡下，進行形態學觀察，選出適合于移植的正常胚胎。配教材圖9-5、圖9-6（七）胚胎保存1.常溫保存 指在常溫（1525）下保存胚胎。通常采用含20%犢牛血清的PBS保存液，可保存胚胎48h。2.低溫保存 指在010的較低溫度下保存胚胎的方法。在此溫度下，胚胎細胞分裂暫停，新陳代謝速度顯著減慢，所以較常溫保存的存活時間要長。3.冷凍保存 指

15、在干冰（-79）和液氮（-196）中保存胚胎。其最大優點是胚胎可以長期保存，而對其活力無影響。胚胎冷凍方法有以下幾種：（1）逐步降溫法 這是一種傳統方法，本法的優點是解凍后胚胎存活率較高，但操作程序比較復雜。（2）一步細管法 即在細管內用非滲透性蔗糖溶液一步脫除抗凍劑（甘油）的方法。其特點是從解凍到移植的全過程簡單易行，利于在生產中推廣應用。（3）玻璃化法 用這種方法冷凍時，胚胎內外液體能同時玻璃化，不會形成冰晶，能較好地保護胚胎。（八）胚胎移植胚胎移植就是將采取的可用胚胎移給受體母畜，亦稱卵的移植，簡稱移卵。1.移胚部位 早期胚胎少于8細胞時，一般應移植于輸卵管，多于8細胞應移植于子宮角。2

16、.移胚方法 與采胚方法相似，也分為手術法與非手術法兩種，前者適用于不能進行直腸操作的中小家畜，后者適用于大家畜。（1）手術法移植 與采胚方法相似，對母畜進行保定、麻醉。以山羊為例，先在其乳房一側作一平行于腹中線的切口，暴露輸卵管和子宮角，再將胚胎注入輸卵管或子宮角。無論是子宮內移植還是輸卵管移植，都要避免把空氣注入。移植完畢后將輸卵管及子宮角送回腹腔，按回收手術中的要求縫合腹壁創口，術后做好移植記錄。（2）非手術法移胚 非手術法移胚只適用于牛、馬等大家畜。與采胚相似，先將母畜保定麻醉后，再移胚。3.影響胚胎移植妊娠率的因素（1）胚胎因素 包括胚胎質量、日齡、移植胚胎的數量、提供胚胎的供體、胚胎

17、在體外培養的時間、鮮胚和凍胚等。（2）母體因素 包括供、受體發情同期化程度，受體的孕酮水平，受體的營養，子宮、卵巢的生理狀況等。（3）其他因素 包括自然發情與人工誘導發情，移植器污染程度以及操作者熟練程度等。（35分鐘）1 檢胚的方法為 2 胚胎保存的方法有 、 、 3 胚胎移植的部位有 4 手術法移植胚胎的方法有 、 ,非手術法移胚的方法有 、 5 影響胚胎移植妊娠率的因素有 小結：采用學生互相提問方式（310分鐘）如：A學生問：“胚胎的保存方法有？由B學生回答課后作業：(12分鐘)1、復習本節所講內容；2、簡述胚胎移植的基本過程板書設計:第一節 胚胎移植技術（四）受體的同期發情（五）供體的

18、發情鑒定和配種（六）胚胎采集1.沖胚液和培養液的配制2.采胚時間3.采胚方法（1）手術法采胚（2）非手術法采胚4.檢胚（七）胚胎保存1.常溫保存2.低溫保存3.冷凍保存（八）胚胎移植1.移胚部位2.移胚方法3.影響胚胎移植妊娠率的因素（1）胚胎因素（2）母體因素（3）其他因素教后感：本節課采用多媒體輔助教學，完成了本節課的教學目標，課堂中學生合作精神得到了發揚，不足：學生知識點的掌握有待加強 2014 學年 秋季 學期 第 17 周 總課時：6課程名稱畜禽繁殖與改良時間2014年12月8星期星期一任課教師白緒珍職稱中學一級節 次第5-6節班 級三年級養殖班授課時數2教具安排多煤體教學題目第九章

19、動物繁殖新技術第二節 胚胎生物工程技術教學方式演示法、講授法、練習法教學內容目標要求教學內容：.了解體外受精及性別控制技術.關于卵核移植與動物克隆技術(3).動物轉基因技術重點難點：體外受精技術 胚胎分割與嵌合技術情感目標：能力點：培養學生用發展有眼光看待萬物思想意識專業素質滲透點：通過講解“胚胎生物工程技術”的基本知識，讓學生了解畜禽養殖前沿技術，使學生建立科學的世界觀教學過程組織：清點人數（12分鐘）復習導入：（35分鐘）胚胎保存的方法？ 胚胎移植的方法進入新課一、體外受精技術（ 20分鐘）（一）、體外受精的意義1、充分發揮優良母畜的繁殖力2、評價公畜的繁殖性能3、作為其他相關研究的手段（

20、二）體外受精技術1、精子采集與獲能處理（1）精子采集：可采用射出精子或附睪尾精子（2）精子獲能：精子可在體內子宮中獲能，也可在體外獲能2、卵母細胞采集與成熟培養（1）卵母細胞采集將動物物的卵巢取出，用生理鹽水沖洗后，放入盛有生理鹽水的保溫瓶內運回實驗室待用，用注射針頭抽出卵母細胞（2）卵母細胞成熟培養：將卵母細胞放在培養液中，在溫度39和5% CO2氣相條件下培養24小時左右，當卵母細胞達到成熟時，卵黃周隙排出第一極體。3、精卵體外受精 將成熟培養的卵母細胞先用精液洗滌3次，然后放入卵母細胞，再加入獲能精子，置于CO2培養箱孵育。4、受精的判定出現下列現象為受精：精子穿入卵內、精子頭部膨大、精

21、子頭部和尾部在卵細胞質內存在、第二極體的排出、原核的形成和正常的卵裂等現象即確定為受精5、體外受精（早期胚胎）的培養發育二、性別控制技術（一）胚胎性別控制技術1、X、Y精子的分離（1）理論依據（2）分離方法2、改變受精環境3、卵子的無性繁殖（二）、胚胎性別鑒定技術1、細胞學方法（1）胚胎分割（2）羊胚預培養及有絲分裂阻滯（3）制作染色體標本（4）染色及鏡檢 2、生物化學微量分析法3、免疫學方法（1）、細胞毒性分析法（2）、間接免疫熒光法4、分子生物學方法三、卵核稱植與動物克隆技術（一）核移植與克隆的意義1、研究細胞核與細胞質的遺傳作用2、研究配子發生過程中核的印跡作用3確定動物早期胚胎發育期間

22、核的分化程度4、生產大量克隆動物5、克隆動物技術可為生物藥物開發和珍稀動物保護做出重大南獻（二）、核移植和動物克隆的原理（三）操作技術1、核移植技術（1）獲取胚胎和卵母細胞（2）顯微操作（3）電融合（4）培養（5）移植以產生克隆綿羊為例，克隆技術步驟大致如下：（1） 將胚盤細胞培養在飼養層上，建立長久的細胞系（2） 除去受體卵母細胞的核及含有中期板的少量細胞質（3） 從全能細胞系取出1個細胞與去核卵母細胞融合（4） 將重建的胚胎移植給臨時受體羊，并在7天后鑒定其發育情況（5） 將發育成的桑椹胚和囊胚移植給其他綿羊，使其發育到產出羔羊四、胚胎分割技術（一）胚胎分割技術1、胚胎分割的方法（1）對2

23、-16細胞期胚胎，用顯微鏡操作儀上的玻璃針或刀片，將每個卵裂或兩個卵裂球為一組或4個卵裂球為一組進行分割，分別放入一個空透明帶內，然后進行移植（2）與上述方法相同，將桑椹胚或早期囊胚一分為二或一分四，將每塊細胞團移入一登上空透明帶內，然后進行移植2、胚胎分割的程序（1）用促性腺激素促使牛、羊超數排卵（2）通過外科手述取出2、4、8等分裂球的胚胎（3）將秀明帶中的卵裂球分離，用吸管吸出（4）將分離的分裂球放入其他動物預先掏空的秀明帶中，在每個透明帶中放入12個卵裂球（5）將分割后的胚胎埋藏于瓊脂中，放入羊或其他動物輸卵管中培養3-4天（6）將胚胎沖洗出來經鑒定后，再作移植用（二）胚胎嵌合技術1、

24、嵌合體的制作方法（1）早期胚胎聚合法采集胚胎除去透明帶胚胎的聚合聚合胚胎的培養嵌合體的移植嵌合體的鑒定（2）分裂球聚合法（3）囊胚注入法2、嵌合體的標記及鑒定方法五、動物轉基因技術（一）外源基因導入的主要方法1、原核顯微注射法2、反轉錄病毒感染胚胎法3、胚胎干細胞法子、精子載體法（二）基因導入的應用前景1、動物育種2、生產動物蛋白六、胚胎干細胞技術（一）、形態與功能特點1、形態學特征2、功能特征（二）胚胎干細胞建系技術要點1、飼養層的制備及分化抑制物的選擇2、早期胚胎及PGC的選擇和分離3、早期胚胎及PGC的培養和ESC的分離傳代4、ESC的鑒定及保存（35分鐘）1體外受精的意義為 2胚胎性別

25、鑒定技術 、 、 、 3核移植技術 4核移植及動物克隆的意義是 。 5嵌合體的制作方法 論 小結：采用學生互相提問方式（310分鐘）如：A學生問：“體外受精技術包括？由B學生回答課后作業：(12分鐘)1、復習本節所講內容；2、簡述胚胎移植的基本過程板書設計:第二節 胚胎生物工程技術簡介一、體外受精技術（ 20分鐘）（一）、體外受精的意義（二）體外受精技術1、精子采集與獲能處理2、卵母細胞采集與成熟培養3、精卵體外受精4、受精的判定5、體外受精（早期胚胎）的培養發育二、性別控制技術（一）胚胎性別控制技術（二）、胚胎性別鑒定技術三、卵核稱植與動物克隆技術（一）核移植與克隆的意義（二）、核移植和動物

26、克隆的原理（三）操作技術四、胚胎分割技術（一）胚胎分割技術（二）胚胎嵌合技術五、動物轉基因技術（一）外源基因導入的主要方法（二）基因導入的應用前景六、胚胎干細胞技術（一）、形態與功能特點（二）胚胎干細胞建系技術要點教后感：本節課采用講授法，及討論法。課前準備也十分充分，讓學生充分發揮自己的優勢， 促進學生學習方式的改變，注意了學生的學習動機、興趣、習慣、信心等非智力因素的培養不足之處：在教學過程的組織中應該注意時間的把控 2014 學年 秋季 學期 第 17 周 總課時：8課程名稱畜禽繁殖與改良時間2014年12月12星期星期五任課教師白緒珍職稱中學一級節 次第4-5節班 級三年級養殖班授課時

27、數2教具安排多煤體教學題目第九章動物繁殖新技術復習教學方式講授法、歸納法、練習法教學內容目標要求復習內容：.胚胎移植的生理基礎和處理程序.胚胎移植的基本原則(3).現代動物繁殖新技術重點難點：胚胎移植的生理基礎和處理程序 胚胎移植技術情感目標：能力點：培養學生團結、互助的精神專業素質滲透點：通過講解“動物繁殖新技術”的基本知識，讓學生了解畜禽養殖前沿技術，使學生建立科學的世界觀教學過程組織：清點人數（12分鐘）復習導入：（35分鐘）卵核移植是指？ 動物克隆是指？進入復習一、胚胎移植的意義（ 20分鐘）1充分發揮優良母畜的繁殖潛力 2.縮短世代間隔，及早進行后裔測定能 3.增加雙胎率 4.保存品

28、種資源 5.防止疾病傳播 6.使不孕母畜獲得生育能力 7.促進基礎理論研究 8.滿足畜牧業現代化的需要 二、胚胎移植的基本原則（一）胚胎移植前后供體和受體所處環境的同一性1.在分類學上的同屬性 在分類學上屬于同一個種。2.生理上的一致性 一般供、受體發情同步差要求在±24h以內。3.解剖部位的一致性 胚胎采自供體的輸卵管就移到受體的輸卵管，采自供體的子宮角就移至受體的子宮角。（二）胚胎發育的期限胚胎采集和移植的期限（胚胎日齡）不能超過發情周期黃體的壽命， （三）胚胎的質量在胚胎移植全部操作過程中，胚胎不應受任何不良因素的影響。（四）供、受體的狀況1.生產性能和經濟價值 2全身及生殖器

29、官的生理狀況三、胚胎移植技術（一）供體和受體的選擇1.供體的選擇（1）生產性能高，經濟價值大，具備遺傳優勢，在育種上有價值。（2）既往繁殖史正常，無遺傳缺陷，具有良好的繁殖能力，且分娩順利。（3）體質健壯，膘情適度。2.受體的選擇 受體母畜可選用非優良品種個體，但應具有良好的繁殖性能和健康體況，可選擇與供體發情周期同步的母畜為受體。（二）藥品和器械的準備1.藥品 FSH、HCG、PGF2a；麻醉劑；生鹽理水、75%酒精、2%碘酒、青霉素。2.器械 10ml和1ml注射器、手術刀、剪子、鑷子、止血鉗、創布、縫合針、線及手術臺；沖胚管、移胚管、顯微鏡、表面皿、凹玻片、拔胚針等。（三）供體的超數排卵

30、 超排技術通常用于單胎家畜，其目的是讓優良母畜排出大量卵子，充分發揮其繁殖潛力，是胚胎移植中的一個重要環節。1.超排方法（1）PMSG或FSH超排 給供體母畜注射PMSG或FSH，發情開始后1216h和2024h各配種（輸精）一次，并于第一次配種后靜脈注射HCG或LH，以便排出更多卵子。激素的應用時間和劑量因家畜種類不同而有差異。（2）配合應用前列腺素（PG） PG的用法通常是在應用PMSG以后大約48h進行肌注。牛的用量因PG種類而異，PGF2a為30mg，15甲基PGF2a為 2mg,氯前列烯醇為500mg；綿羊和山羊的用量為牛的一半。（3）PMSG與抗PMSG配合使用 抗PMSG可以消除

31、PMSG的殘留作用，明顯增加可用胚胎數，提高超排效果。2.超排效果的評判標準 超排是胚胎移植中最難控制的一個環節，在實踐中只要能使一半以上處理母畜達到滿意結果，則認為超排是成功的。（四）、受體的同期發情（ 20分鐘）當前比較理想的同期發情藥物是前列腺素及其類似物，其劑量因PG種類和用法不同而異。15-甲基 PGF2a 2mg肌注，氯前列烯醇500mg肌注。 （五）供體的發情鑒定和配種超排處理結束后，要密切觀察供體的發情征狀，為確保卵子受精，一般在發情812h輸精一次，以后間隔812h再輸精一次，并且要加大輸精量。（六）胚胎采集在配種或輸精后適當時間，從超排供體回收胚胎，準備給受體移植，稱胚胎采

32、集或胚胎回收，簡稱采胚。1.沖胚液和培養液的配制 現在多采用杜氏磷酸鹽緩沖液（PBS），不但可用于沖洗、采集胚胎，還用于體外培養、冷凍保存和解凍胚胎。沖胚液犢牛血清含量一般為3%（1%5%），培養液血清含量為20%（1%50%）。犢牛血清需加熱（56水浴30min）滅活。2.采胚時間 根據配種時間、排卵的大致時間、胚胎的運行速度、胚胎的發育階段、畜種、胚胎所處部位及采胚方法等因素來確定是適宜的采胚時間。3.采胚方法 采胚方法分為手術法和非手術法兩種。手術法適用于各種動物，尤其是綿羊、山羊、豬及實驗動物；非手術法僅適用于牛、馬等大家畜，且只能在胚胎進入子宮后進行。（1）手術法采胚A 母畜保定 一

33、種方法是用全身或后軀麻醉，母畜進行仰臥保定。另一種方法是用局部麻醉，使母畜站立于六柱欄中保定。兩者的保定姿勢均為前低后高的方式。B 麻醉 全身麻醉可用普魯卡因、酒精等；局部后軀麻醉用普魯卡因、利多卡因進行腰薦或尾椎硬膜外腔注射，手術部位再以利多卡因作皮膚浸潤麻醉。C 手術部位 母牛可在乳房至臍孔之間的白線上剖腹，切口長約10cm；羊在乳房左側切口，切口長度46cm。D 采胚 主要包括有輸卵管沖胚法、子宮角沖胚法和輸卵管子宮角沖胚法三種。配教材圖圖9-2、圖9-3ES防止手術部粘連的方法不要用金屬器械挾持生殖器官。所用手套、棉花、紗布等術前要用生理鹽水浸濕，以防粘附于生殖器官上。在生殖器官表面撒

34、涂低濃度肝素液、樟腦油等，以防止其表面附著血或血凝塊。縫合要牢固、緊密，防止術后發生疝癥。（2）非手術法采胚 由于手術法采胚在生產應用中受到限制，目前在馬、牛等大家畜都用采胚管進行非手術法采胚，一般在配種后7（68）天進行。供體牛的保定和麻醉同手術法采胚，采胚時先用擴張棒對子宮頸進行擴張（青年牛尤為必要）。采胚管消毒后，將無菌不銹鋼導桿插入采胚管內。將采胚管經子宮頸緩慢導入一側子宮角基部，由助手抽出部分不銹導桿，操作者繼續向前推進采胚管，當達到子宮角大彎附近時，助手從進氣口注入1225ml氣體。當氣囊位置和充氣量合適時，抽出全部不銹鋼導桿。助手用注射器吸取事先加溫至37的沖胚液，從采胚管的進水

35、口推進，進入子宮角內，再將沖胚液連同胚抽回注射器內，如此反復沖洗和回收56次，將每次回收的沖胚液收入集胚器內，并置于37的恒溫箱或無菌檢胚室內等待檢胚。一側子宮角沖胚結束后，按上邊方法再沖洗另一側子宮角。配教材圖9-44.檢胚 檢胚應在2025的無菌操作室內進行。在立體顯微鏡下，檢查收集到的胚胎數，并用一細檢胚吸管將胚胎移至新鮮培養液內，在放大40200倍的復式顯微鏡下，進行形態學觀察，選出適合于移植的正常胚胎。配教材圖9-5、圖9-6（七）胚胎保存1.常溫保存 指在常溫（1525）下保存胚胎。通常采用含20%犢牛血清的PBS保存液，可保存胚胎48h。2.低溫保存 指在010的較低溫度下保存胚

36、胎的方法。在此溫度下，胚胎細胞分裂暫停，新陳代謝速度顯著減慢，所以較常溫保存的存活時間要長。3.冷凍保存 指在干冰（-79）和液氮（-196）中保存胚胎。其最大優點是胚胎可以長期保存，而對其活力無影響。胚胎冷凍方法有以下幾種：（1）逐步降溫法 這是一種傳統方法，本法的優點是解凍后胚胎存活率較高，但操作程序比較復雜。（2）一步細管法 即在細管內用非滲透性蔗糖溶液一步脫除抗凍劑（甘油）的方法。其特點是從解凍到移植的全過程簡單易行，利于在生產中推廣應用。（3）玻璃化法 用這種方法冷凍時，胚胎內外液體能同時玻璃化，不會形成冰晶，能較好地保護胚胎。（八）胚胎移植胚胎移植就是將采取的可用胚胎移給受體母畜，

37、亦稱卵的移植，簡稱移卵。1.移胚部位 早期胚胎少于8細胞時，一般應移植于輸卵管，多于8細胞應移植于子宮角。2.移胚方法 與采胚方法相似，也分為手術法與非手術法兩種，前者適用于不能進行直腸操作的中小家畜，后者適用于大家畜。（1）手術法移植 與采胚方法相似，對母畜進行保定、麻醉。以山羊為例，先在其乳房一側作一平行于腹中線的切口，暴露輸卵管和子宮角，再將胚胎注入輸卵管或子宮角。無論是子宮內移植還是輸卵管移植，都要避免把空氣注入。移植完畢后將輸卵管及子宮角送回腹腔，按回收手術中的要求縫合腹壁創口，術后做好移植記錄。（2）非手術法移胚 非手術法移胚只適用于牛、馬等大家畜。與采胚相似，先將母畜保定麻醉后，

38、再移胚。3.影響胚胎移植妊娠率的因素（1）胚胎因素 包括胚胎質量、日齡、移植胚胎的數量、提供胚胎的供體、胚胎在體外培養的時間、鮮胚和凍胚等。（2）母體因素 包括供、受體發情同期化程度，受體的孕酮水平，受體的營養，子宮、卵巢的生理狀況等。（3）其他因素 包括自然發情與人工誘導發情，移植器污染程度以及操作者熟練程度等（35分鐘）1超數排卵的方法有 、 、 2.胚胎移植的意義有 、 、 、 、 、 、 、 3胚胎移植的基本原則有 、 、 、 4檢胚的方法為 5胚胎保存的方法有 、 、 6 胚胎移植的部位有 7 手術法移植胚胎的方法有 、 ,非手術法移胚的方法有 、 影響胚胎移植妊娠率的因素有 小結：

39、采用學生互相提問方式（310分鐘）如：A學生問：“胚胎移植的意義？由B學生回答課后作業：(12分鐘)1、復習本節所講內容；2、簡述胚胎移植的基本過程板書設計:一、胚胎移植的意義二、胚胎移植的基本原則（一）胚胎移植前后供體和受體所處環境的同一性（二）胚胎發育的期限（三）胚胎的質量（四）供、受體的狀況三、胚胎移植技術（一）供體和受體的選擇（二）藥品和器械的準備（三）供體的超數排卵（四）、受體的同期發情（五）供體的發情鑒定和配種（六）胚胎采集（七）胚胎保存（八）胚胎移植教后感：本節課采用講授法，及討論法。 完成了本節課的教學目標，同時也注意了學生的學習動機、興趣、習慣、信心等非智力因素的培養不足之處

40、：在教學過程中注意引導式與歸納式的并用2014 學年 秋季 學期 第 17 周 總課時：10課程名稱畜禽繁殖與改良時間2014年12月14星期星期日任課教師白緒珍職稱中學一級節 次第4-5節班 級三年級養殖班授課時數2教具安排多煤體教學題目第九章動物繁殖新技術 胚胎生物工程技術復習教學方式講授法、歸納法、練習法教學內容目標要求復習內容：(1).了解體外受精及性別控制技術(2).關于卵核移植與動物克隆技術(3).動物轉基因技術重點難點: 體外受精技術 胚胎分割與嵌合技術情感目標：能力點：培養學生團結、互助的精神專業素質滲透點：通過復習“胚胎生物工程技術 ”的基本知識，讓學生了解畜禽養殖前沿技術，

41、使學生建立科學的世界觀教學過程組織：清點人數（12分鐘）復習導入：（35分鐘）胚胎的保存方法？ 采胚時對供體的要求？進入復習一、體外受精技術（ 20分鐘）（一）、體外受精的意義1、充分發揮優良母畜的繁殖力2、評價公畜的繁殖性能3、作為其他相關研究的手段（二）體外受精技術1、精子采集與獲能處理（1）精子采集：可采用射出精子或附睪尾精子（2）精子獲能：精子可在體內子宮中獲能，也可在體外獲能2、卵母細胞采集與成熟培養（1）卵母細胞采集（2）卵母細胞成熟培養3、精卵體外受精 4、受精的判定出現下列現象為受精：精子穿入卵內、精子頭部膨大、精子頭部和尾部在卵細胞質內存在、第二極體的排出、原核的形成和正常的卵裂等現象即確定為受精5、體外受精（早期胚胎）的培養發育二、性別控制技術（一）胚胎性別控制技術1、X、Y精子的分離（1）理論依據（2）分離方法2、改變受精環境3、卵子的無性繁殖（二）、胚胎性別鑒定技術1、細胞學方法（1）胚胎分割（2）羊胚預培養及有絲分裂阻滯（3）制作染色體標本（4）染色及鏡檢 2、生物化學微量分析法