1、李相軍李相軍1350431142813504311428年份年份 事件事件作者作者1932193219351935194819481950195019561956196319631966196619711971維生素維生素A A缺乏可使猴胚胎畸形缺乏可使猴胚胎畸形X X射線照射使大鼠胚胎發生各種畸形射線照射使大鼠胚胎發生各種畸形氮芥導致大鼠胚胎畸形氮芥導致大鼠胚胎畸形可的松致小鼠胚胎畸形可的松致小鼠胚胎畸形反應停（反應停（ThalidomideThalidomide）事件）事件美國藥物安全委員會美國藥物安全委員會美國美國FDA FDA 人用藥生殖安全評價準則人用藥生殖安全評價準則WHOWHO規

2、定新藥應有生殖毒性研究規定新藥應有生殖毒性研究HaleHaleGobGobHarriuHarriuBaxterBaxter先天愚型先天愚型海豹肢畸形海豹肢畸形 生殖毒性研究（生殖毒性研究（Reproductive toxicity Reproductive toxicity studystudy）是藥物非臨床安全性評價的重要內容，）是藥物非臨床安全性評價的重要內容，它與急性毒性、長期毒性、遺傳毒性等毒理學它與急性毒性、長期毒性、遺傳毒性等毒理學研究有著密切的聯系，是藥物進入臨床研究及研究有著密切的聯系，是藥物進入臨床研究及上市的重要環節。上市的重要環節。 生殖毒性研究在限定臨床研究受試者范圍、

3、生殖毒性研究在限定臨床研究受試者范圍、降低臨床研究受試者和藥品上市后使用人群的降低臨床研究受試者和藥品上市后使用人群的用藥風險方面發揮重要作用。用藥風險方面發揮重要作用。分期分期研究內容研究內容檢測方法檢測方法交配前到懷交配前到懷孕孕成年雄性成年雄性/ /雌性動物的生殖功能；配子雌性動物的生殖功能；配子的發育和成熟；交配行為及生育力的發育和成熟；交配行為及生育力一般生殖毒一般生殖毒性試驗性試驗懷孕到著床懷孕到著床成年雄性成年雄性/ /雌性動物的生殖功能；著床雌性動物的生殖功能；著床前的發育和著床前的發育和著床著床到硬腭著床到硬腭閉合閉合成年雄性成年雄性/ /雌性動物的生殖功能；胚胎雌性動物的生

4、殖功能；胚胎發和大部分器官形成發和大部分器官形成致畸試驗致畸試驗硬腭閉合到硬腭閉合到懷孕末期懷孕末期成年雌性動物的生殖功能；胚胎生長發成年雌性動物的生殖功能；胚胎生長發育以及器官發育和生長育以及器官發育和生長出生到斷奶出生到斷奶成年雌性動物的生殖功能；嬰兒在宮外成年雌性動物的生殖功能；嬰兒在宮外生活的適應性；斷奶前的發育和生長生活的適應性；斷奶前的發育和生長圍產期試驗圍產期試驗斷奶到性成斷奶到性成熟熟斷奶前的發育和生長；獨立生活的能力；斷奶前的發育和生長；獨立生活的能力；完全達到性成熟完全達到性成熟避孕藥、性激素、性功能障礙藥、促精子生成藥、致突變試驗避孕藥、性激素、性功能障礙藥、促精子生成藥

5、、致突變試驗陽性或有毒作用的新藥，必須進行生殖毒性試驗。陽性或有毒作用的新藥，必須進行生殖毒性試驗。 生殖是機體繁衍種族的生理過程，包括生殖細胞的發生殖是機體繁衍種族的生理過程，包括生殖細胞的發育形成、交配、受精、植入、胚胎形成和發育、分娩和哺育形成、交配、受精、植入、胚胎形成和發育、分娩和哺乳等過程。每一個環節均可能是化學物質毒性作用的靶部乳等過程。每一個環節均可能是化學物質毒性作用的靶部位，機體接觸化學物質后干擾了其生理過程，使生殖過程位，機體接觸化學物質后干擾了其生理過程，使生殖過程的功能出現缺陷和損害，此即化學物質的的功能出現缺陷和損害，此即化學物質的。 ：（：（1 1）對化學物質的毒

6、性作用）對化學物質的毒性作用敏感，一定劑量下，其他系統尚未出現損害之前，生殖過敏感，一定劑量下，其他系統尚未出現損害之前，生殖過程中的某個環節或功能已經出現障礙；（程中的某個環節或功能已經出現障礙；（2 2）化學物質毒性）化學物質毒性作用對其損害更為深遠，不僅表現在接觸化學物的機體本作用對其損害更為深遠，不僅表現在接觸化學物的機體本身，還可影響后代。身，還可影響后代。 從胚胎學和病理學發展出來的一個分支學科，是研從胚胎學和病理學發展出來的一個分支學科，是研究胚胎發育時期，由各種內外因子引起結構和功能異常的先究胚胎發育時期，由各種內外因子引起結構和功能異常的先天性畸形的科學。天性畸形的科學。 藥

7、物接觸胚胎發生期后引起藥物接觸胚胎發生期后引起永久性結構或功能異常的性質。永久性結構或功能異常的性質。 某些藥物在一定劑量僅某些藥物在一定劑量僅對胚胎或胎兒有毒性作用而對母體沒有毒性作用，此作用對胚胎或胎兒有毒性作用而對母體沒有毒性作用，此作用被稱為胚胎毒性。胚胎毒性表現為胚胎死亡、胚胎生長遲被稱為胚胎毒性。胚胎毒性表現為胚胎死亡、胚胎生長遲緩、畸形和功能不全。緩、畸形和功能不全。 指藥物引起懷孕動物的毒效指藥物引起懷孕動物的毒效應，如體重不增或減輕等，最嚴重的是死亡。應，如體重不增或減輕等，最嚴重的是死亡。 永久性結構異常或功能異常的永久性結構異常或功能異常的胎兒和新生兒。通常不包括顯微鏡下

8、細微結構的異常胎兒和新生兒。通常不包括顯微鏡下細微結構的異常, , 生生化代謝性缺陷。單純功能異常化代謝性缺陷。單純功能異常( (如精神缺陷、智力缺陷如精神缺陷、智力缺陷), ), 也不包括分娩過程中各種因素造成的缺陷。也不包括分娩過程中各種因素造成的缺陷。 為一種藥物對母體的半數為一種藥物對母體的半數致死量與最小致畸量的比值，是表示一種化學物質的致畸致死量與最小致畸量的比值，是表示一種化學物質的致畸強度指標。建議致畸指數在強度指標。建議致畸指數在10以下定為不致畸，以下定為不致畸，10 100為為致畸，致畸，100以上為強致畸。以上為強致畸。 指任何解剖學的和功能的指任何解剖學的和功能的異常

9、。既包括形態結構的異常異常。既包括形態結構的異常( (大體的和細微的大體的和細微的) )，也包，也包括功能、代謝、行為的異常。括功能、代謝、行為的異常。 一般生殖毒性試驗（一般生殖毒性試驗（reproductive toxicity test）是研究藥物對整個生殖過程的影響。包括生殖細胞是研究藥物對整個生殖過程的影響。包括生殖細胞（精子、卵細胞）的發生，卵細胞受精、著床胚胎（精子、卵細胞）的發生，卵細胞受精、著床胚胎形成，胚胎發育階段的影響并作出評價。形成，胚胎發育階段的影響并作出評價。 至少一種動物，一般為大鼠或小鼠，每組雄性至少一種動物，一般為大鼠或小鼠，每組雄性動物動物10只，雌性動物至

10、少只，雌性動物至少20只。只。 給藥組設高、中、低三個劑量；高劑量應能產生給藥組設高、中、低三個劑量；高劑量應能產生輕微毒性反應，如體重增長緩慢等，但不應出現嚴輕微毒性反應，如體重增長緩慢等，但不應出現嚴重中毒或死亡。重中毒或死亡。 給藥途徑應盡量接近臨床。給藥途徑應盡量接近臨床。 雄性動物交配前給藥雄性動物交配前給藥60 80天，雌性動物交配天，雌性動物交配連續給藥連續給藥14天。交配后繼續給藥至大多數器官發生天。交配后繼續給藥至大多數器官發生期（大鼠期（大鼠/小鼠為孕后小鼠為孕后13天）。天）。 1. 雄性與雌性動物同籠交配后，每日檢查小鼠陰道中有無雄性與雌性動物同籠交配后，每日檢查小鼠陰

11、道中有無陰栓，大鼠則檢查精子，以檢查到陰栓或精子的當日作陰栓，大鼠則檢查精子，以檢查到陰栓或精子的當日作為妊娠第為妊娠第0天。天。2. 雌鼠于妊娠第雌鼠于妊娠第13天解剖觀察，以確定妊娠、胎兒的吸收天解剖觀察，以確定妊娠、胎兒的吸收和死亡情況，并記錄母鼠的一般狀況、體重變化和胎盤和死亡情況，并記錄母鼠的一般狀況、體重變化和胎盤重量，以確定子宮內的活胎數，對活胎進行性別鑒定、重量，以確定子宮內的活胎數，對活胎進行性別鑒定、體重和身長的測量以及外表和內臟器官的形態學觀察，體重和身長的測量以及外表和內臟器官的形態學觀察，對骨骼進行茜紅素染色后進行檢查，必要時進行組織學對骨骼進行茜紅素染色后進行檢查，

12、必要時進行組織學和組織化學的詳細檢查。和組織化學的詳細檢查。 3. 大鼠于孕期第大鼠于孕期第20天處死（小鼠天處死（小鼠18天）。剖腹取天）。剖腹取出子宮及卵巢，辨認和記錄活胎數，早死胎數、出子宮及卵巢，辨認和記錄活胎數，早死胎數、晚死胎數、吸收胎數和黃體數，對活胎仔應辨晚死胎數、吸收胎數和黃體數，對活胎仔應辨別性別、稱重，測量身長及尾長，仔細檢查活別性別、稱重，測量身長及尾長，仔細檢查活胎仔的外觀有無畸形，將每只母鼠的胎仔的外觀有無畸形，將每只母鼠的2/3活胎活胎仔剝去皮膚和內臟，經脫水透吸及茜紅素染色仔剝去皮膚和內臟，經脫水透吸及茜紅素染色后，檢查骨骼畸形，將后，檢查骨骼畸形，將1/3活胎

13、仔浸入活胎仔浸入Bouin氏氏溶液中固定，供檢查內臟畸形。溶液中固定，供檢查內臟畸形。 100 %畸胎率畸胎率% =畸胎總數畸胎總數活胎仔總數活胎仔總數活胎仔平均畸形數活胎仔平均畸形數 =畸形總數畸形總數活胎仔總數活胎仔總數100 %母體畸胎出現率母體畸胎出現率% =出現畸胎母體數出現畸胎母體數妊娠母體總數妊娠母體總數 凡受試物能引起生殖機能障礙，干擾配子的形成或使生凡受試物能引起生殖機能障礙，干擾配子的形成或使生殖細胞受損，其結果除可影響受精卵或孕卵的著床而導致殖細胞受損，其結果除可影響受精卵或孕卵的著床而導致不孕外，尚可影響胚胎的發生及胎仔的發育，如胚胎死亡不孕外，尚可影響胚胎的發生及胎仔

14、的發育，如胚胎死亡導致自然流產、胎仔發育遲緩以及胎仔畸形。如果對母體導致自然流產、胎仔發育遲緩以及胎仔畸形。如果對母體造成不良影響，出現妊娠、分娩和乳汁分泌的異常，亦可造成不良影響，出現妊娠、分娩和乳汁分泌的異常，亦可出現胎仔出生后發育異常。出現胎仔出生后發育異常。 本試驗檢測藥物對整個生殖過程的毒性作用，通過繁殖本試驗檢測藥物對整個生殖過程的毒性作用，通過繁殖試驗可以了解藥物對試驗動物的性腺功能、交配能力、受試驗可以了解藥物對試驗動物的性腺功能、交配能力、受孕能力、妊娠過程、分娩、哺乳及對后代生長發育的影響。孕能力、妊娠過程、分娩、哺乳及對后代生長發育的影響。 一般傾向于二代繁殖試驗。一般傾

15、向于二代繁殖試驗。 大鼠，至少設三個劑量級和一個對照組。每組大鼠，至少設三個劑量級和一個對照組。每組動物應至少能產仔動物應至少能產仔20窩；窩；F0代有生育能力的雄鼠至代有生育能力的雄鼠至少少10只，以后各代每組也應至少有只，以后各代每組也應至少有10只雄鼠。只雄鼠。 高、中、低三個劑量；高劑量應有毒性作用，高、中、低三個劑量；高劑量應有毒性作用，但不能引起但不能引起10%以上動物死亡，且超過人體預期接以上動物死亡，且超過人體預期接觸水平。低劑量應不產生可觀察到的有害作用。觸水平。低劑量應不產生可觀察到的有害作用。 以人體可能接觸的方式染毒。以人體可能接觸的方式染毒。 僅對僅對F0及及F1代動

16、物染毒。代動物染毒。 F0代動物自離乳起（代動物自離乳起（6 w之前）開始染毒，直到之前）開始染毒，直到F1代代離乳；離乳；F1代動物離乳（約代動物離乳（約30 d）后，部分動物（用來繼續）后，部分動物（用來繼續繁殖的動物）每天染毒，直到繁殖的動物）每天染毒，直到F2代離乳后代離乳后30天。天。 F0代給藥至少代給藥至少100天后，開始交配，產生天后，開始交配，產生F1代。代。 F1代給藥至少數代給藥至少數120天后，開始交配，產生天后，開始交配，產生F2代。代。 包括動物一般狀態、體重、進食量及死亡情況；著重觀察包括動物一般狀態、體重、進食量及死亡情況；著重觀察受孕率、妊娠率、出生存活率、產

17、仔總數及平均仔重等與生殖受孕率、妊娠率、出生存活率、產仔總數及平均仔重等與生殖機能有關指標。機能有關指標。 計算下述生殖指數：計算下述生殖指數：100 %1. 生育力指數：生育力指數： 受孕率受孕率% =妊娠雌鼠數妊娠雌鼠數交配雌鼠數交配雌鼠數100 %2. 受孕指數：受孕指數： 正常妊娠率正常妊娠率% =活產雌鼠數活產雌鼠數妊娠雌鼠數妊娠雌鼠數100 %3. 存活力指數：出生存活率存活力指數：出生存活率% =生后生后4 d 存活仔存活仔數數出生時活仔數出生時活仔數100 %4. 哺育指數：哺育指數： 哺育存活率哺育存活率% =生后生后21 d 存活仔數存活仔數出生后出生后4 d 存活數存活數

18、 母體在孕期受到可通過胎盤屏障的藥物作用母體在孕期受到可通過胎盤屏障的藥物作用,影響影響胚胎的器官發育胚胎的器官發育,導致結構和機能的缺陷導致結構和機能的缺陷,出現胎仔畸出現胎仔畸形。因此在受孕動物的胚胎著床后，并已開始進入形。因此在受孕動物的胚胎著床后，并已開始進入細胞及器官分化期時，可檢出該物質對胎仔的致畸細胞及器官分化期時，可檢出該物質對胎仔的致畸作用。作用。 致畸試驗（致畸試驗（teratogenic test）為鑒定動物致畸物）為鑒定動物致畸物的標準方法。不僅能檢測到藥物的致畸性，也可得的標準方法。不僅能檢測到藥物的致畸性，也可得到有關藥物致胚胎死亡及生長遲緩的資料。到有關藥物致胚胎

19、死亡及生長遲緩的資料。 要求選用對藥物敏感性高而自發畸形率低的動物，常用大要求選用對藥物敏感性高而自發畸形率低的動物，常用大鼠、小鼠和兔。一般至少采用鼠、小鼠和兔。一般至少采用2種動物，一種為嚙齒類，另一種動物，一種為嚙齒類，另一種要求非嚙齒類（狗和猴）。種要求非嚙齒類（狗和猴）。 未交配過的雌鼠，鼠齡未交配過的雌鼠，鼠齡3 m以下，體重以下，體重200 - 250 g，做陰道，做陰道分泌物涂片檢查，若發現白色分泌物較多，鏡下發現有核上皮分泌物涂片檢查，若發現白色分泌物較多，鏡下發現有核上皮細胞，則提示大鼠處于動情前期。此時，將其與雄鼠按細胞，則提示大鼠處于動情前期。此時，將其與雄鼠按2 1

20、或或3 2同籠過夜，次日檢查是否受孕。同籠過夜，次日檢查是否受孕。 檢查是否受孕。（檢查是否受孕。（1）檢查陰栓：陰栓是雄鼠精囊與凝固腺）檢查陰栓：陰栓是雄鼠精囊與凝固腺分泌液在雌鼠陰道凝結而成的白色塊狀物，形似米粒。大鼠陰分泌液在雌鼠陰道凝結而成的白色塊狀物，形似米粒。大鼠陰栓易脫落，小鼠陰栓不易脫落。（栓易脫落，小鼠陰栓不易脫落。（2）陰道涂片檢查精子。）陰道涂片檢查精子。 陰栓或精子檢出當日記為孕陰栓或精子檢出當日記為孕0天，次日為孕第天，次日為孕第1天。天。 分高、中、低三個劑量組；陰性對照組；陽性對照組。分高、中、低三個劑量組；陰性對照組；陽性對照組。 （1）高劑量應有母體毒性反應，

21、或為最大給藥量；低）高劑量應有母體毒性反應，或為最大給藥量；低劑量組應為母體和胚胎毒性反應劑量。劑量組應為母體和胚胎毒性反應劑量。 （2） 以以 LD50 的的 1/3 1/5 為高劑量組；以為高劑量組；以 LD50 的的 1/30 1/100 為低劑量。為低劑量。 （3） 以人實際接觸量做為低劑量組，并以其倍數（以人實際接觸量做為低劑量組，并以其倍數（10倍）做為高劑量。倍）做為高劑量。 大鼠、小鼠大鼠、小鼠 15 20 只；兔只；兔 8 10 只；狗和猴只；狗和猴 3 4 只。只。 給藥途徑根據藥物的性質及人類可能的接觸方式定，多給藥途徑根據藥物的性質及人類可能的接觸方式定，多為灌胃和腹腔

22、注射。為灌胃和腹腔注射。 給藥時間選在胚胎對致畸物的易感期（器官形成期）。給藥時間選在胚胎對致畸物的易感期（器官形成期）。 1 每只實驗動物在試驗期間的受精日期、給每只實驗動物在試驗期間的受精日期、給藥日期和劑量、體重等基本指標。藥日期和劑量、體重等基本指標。 2 對母體的觀察：每天檢查有無中毒癥狀，對母體的觀察：每天檢查有無中毒癥狀，對有流產或早產征兆者（陰道出血）及時處死對有流產或早產征兆者（陰道出血）及時處死檢查。檢查。 3 對胎仔的觀察對胎仔的觀察A 活仔外形的檢查活仔外形的檢查B 胎仔內臟檢查胎仔內臟檢查C 對胎仔骨骼檢查對胎仔骨骼檢查部位部位 畸畸 形形頭顱頭顱鼻鼻眼眼耳耳腭腭頜和

23、唇頜和唇肢肢趾趾脊柱脊柱腹部腹部尾尾肛門肛門腦突出，露腦，顱脊柱裂，單純性腦膜膨出腦突出，露腦，顱脊柱裂，單純性腦膜膨出單鼻孔，鼻孔擴張單鼻孔，鼻孔擴張小眼，無眼，開眼，眼異位小眼，無眼，開眼，眼異位無耳，小耳，耳異位無耳，小耳，耳異位腭裂腭裂頜小，無頜，無口，唇裂頜小，無頜，無口，唇裂短肢，畸形足短肢，畸形足多趾，少趾，缺趾，并趾多趾，少趾，缺趾，并趾脊柱膜膨出，脊柱骨缺失，脊柱側凸脊柱膜膨出，脊柱骨缺失，脊柱側凸臍疝臍疝短尾，卷尾，角形尾，螺旋尾，無尾短尾，卷尾，角形尾，螺旋尾，無尾肛門閉鎖肛門閉鎖（外觀畸形）（外觀畸形）部位部位 畸畸 形形顱頂骨顱頂骨枕骨枕骨頸椎骨頸椎骨胸骨胸骨肋骨肋骨

24、腰椎腰椎四肢骨四肢骨盤骨盤骨尾椎骨尾椎骨缺損，骨化遲緩缺損，骨化遲緩缺損，骨化遲緩缺損，骨化遲緩缺損，骨化遲緩缺損，骨化遲緩缺損，錯位，骨化遲緩缺損，錯位，骨化遲緩多肋，少肋，短肋，分叉肋，波狀肋，融合肋多肋，少肋，短肋，分叉肋，波狀肋，融合肋缺失，分裂，變形缺失，分裂，變形多骨，缺失多骨，缺失缺失缺失缺失，椎弓不連續，融合缺失，椎弓不連續，融合部位部位 畸畸 形形頭頭腭腭口腔口腔眼眼心血管心血管肺肺膈膈腸腸肝肝腎腎生殖器生殖器膀胱膀胱腦積水，腦室擴大腦積水，腦室擴大腭裂腭裂短舌，分叉舌短舌，分叉舌少眼，小眼，無眼少眼，小眼，無眼右位心，室中隔缺損，單房室心，主動脈弓橫位右位心，室中隔缺損，單

25、房室心，主動脈弓橫位氣管食管瘺，肺倒位，少葉氣管食管瘺，肺倒位，少葉橫膈缺損，并引起腹內臟疝或內臟側位橫膈缺損，并引起腹內臟疝或內臟側位腸疝腸疝肝異位，少葉肝異位，少葉馬蹄腎，腎積水，腎積水，腎缺失，腎異位馬蹄腎，腎積水，腎積水，腎缺失，腎異位子宮缺失，睪丸缺失或隱睪，睪丸發育不全（單子宮缺失，睪丸缺失或隱睪，睪丸發育不全（單側側/ /雙側），兩性畸形雙側），兩性畸形缺失缺失常見畸形及部位常見畸形及部位（內臟畸形）（內臟畸形） 1 對母體動物評定：對母體動物評定： 100 %100 %母體畸胎出現率（母體畸胎出現率（%）=妊娠母體數妊娠母體數交配率交配率% =已交配動物數已交配動物數實驗動物數實驗動物數死亡率死亡率% =死亡動物數死亡動物數實