1、LOGOBring Technology to Life1PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置、儀器配制技術(shù)服務(wù)部技術(shù)服務(wù)部 曾飛曾飛2PCRPCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則PCR實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)等級實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)等級0102各區(qū)的工作內(nèi)容及配置各區(qū)的工作內(nèi)容及配置03實(shí)驗(yàn)室配置及預(yù)算實(shí)驗(yàn)室配置及預(yù)算043生物安全的概念生物安全的概念生物安全是指由動物、植物、微生物等生物體給人類健康和自然環(huán)境造成的危害以及人們所采取的防范措施。生物安全是一個廣義的概念，它涉及三個方面：外來物種遷入導(dǎo)致的原生態(tài)系統(tǒng)不良改變或破壞；人為造成的環(huán)境劇烈變化危機(jī)生物的多樣性；科學(xué)研究、開發(fā)、生產(chǎn)和應(yīng)用中，病原或變異生物體的泄

2、露對人類健康或生存環(huán)境所造成的危害。41. 1. 危害等級危害等級I I （低個體危害，低群體危害低個體危害，低群體危害）不會導(dǎo)致健康工作者和動物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。2. 2. 危害等級危害等級 ( (中等個體危害，有限群體危害中等個體危害，有限群體危害) )能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴(yán)重危害的病原體。實(shí)驗(yàn)室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險(xiǎn)有限。3. 3. 危害等級危害等級 III III （高個體危害，低群體危害）高個體危害，低群體危害）能引起人類或動物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸

3、而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原體。4. 危害等級危害等級 ( (高個體危害，高群體危害高個體危害，高群體危害) )能引起人類或動物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與動物間傳播的病原體。生物因子危害程度分級生物因子危害程度分級5根據(jù)安全防護(hù)等級，分子生物實(shí)驗(yàn)室一般分為以下四級：6依據(jù)：l 衛(wèi)生部頒發(fā)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號） l醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增管理辦法（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)2010194號） 7 各區(qū)獨(dú)立 注意風(fēng)向 因地制宜 方便工作“十六字口訣”8各區(qū)獨(dú)立各區(qū)獨(dú)立：1.PCR實(shí)驗(yàn)室

4、分區(qū)及各區(qū)獨(dú)立：實(shí)驗(yàn)室分區(qū)及各區(qū)獨(dú)立：1.1試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)；1.2標(biāo)本制備區(qū)；1.3擴(kuò)增區(qū)；1.4擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)；如使用全自動分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并；2.各區(qū)物品獨(dú)立：各區(qū)物品獨(dú)立：各區(qū)必須有明確的標(biāo)記，避免不同區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。9注意風(fēng)向：注意風(fēng)向：1. 工作流向（進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室方向）：為避免交叉污染，進(jìn)入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)；2.空氣流向：應(yīng)在樣本制備區(qū)、擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)等相對可能出現(xiàn)的“污染物”的區(qū)域安裝負(fù)壓系統(tǒng)（排風(fēng)裝置），在試劑準(zhǔn)備區(qū)安裝正壓系統(tǒng)（新風(fēng)進(jìn)氣系統(tǒng)），以實(shí)現(xiàn)空氣按照試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)

5、本制備區(qū)擴(kuò)增（及產(chǎn)物分析）區(qū)方向流動；10理想的PCR診斷實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)方案工作流向?qū)Ｓ米呃犬a(chǎn)物分析區(qū)擴(kuò)增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向11合理的PCR診斷實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)方案12傳遞窗：雙刃劍傳遞窗：雙刃劍方便試劑物品在不同實(shí)驗(yàn)區(qū)間的傳遞；增加交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)；設(shè)計(jì)原則：設(shè)計(jì)原則：1.必須為雙開門密封嚴(yán)實(shí)的；2.兩邊門最好是連鎖裝置；3.傳遞窗內(nèi)應(yīng)有紫外照射裝置；13試劑準(zhǔn)備區(qū)主要進(jìn)行試劑的儲存、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。該區(qū)對于氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。該區(qū)所需的主要物品包括：1、冰箱（2-8、-20），用于試劑的儲存；2、超凈工作臺（最好配備），

6、試劑配制的區(qū)域；3、移液器一套（覆蓋1-1000ul，一般0.1-10ul、5-50ul、20-200ul、100-1000ul）及配套吸頭（帶濾芯） ，用于試劑配制；4、掌上迷你離心機(jī)；5、震蕩混勻儀；6、離心管架、廢液缸（利器盒）等；7、消耗品：一次性無粉乳膠手套、耐高壓處理的離心管、一次性吸水紙；8、安全級防護(hù)品：移動紫外線燈、專用工作服、9、專用辦公用品（簽字筆及記錄本等）；14標(biāo)本制備區(qū)主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA時(shí)cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域（擴(kuò)增區(qū)）為正壓，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污

7、染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。該區(qū)所需的主要物品包括：1、冰箱（2-8、-20或-80 ）；2、生物安全柜；3、移液器一套（覆蓋1-1000ul，一般0.1-10ul、5-50ul、20-200ul、100-1000ul）及配套吸頭（帶濾芯） ；154、高速臺式離心機(jī)（冷凍）、掌上迷你離心機(jī)（雙轉(zhuǎn)子）；5、水浴鍋或金屬浴；6、震蕩混勻儀；7、離心管架、廢液缸（利器盒）等；8、消耗品：一次性無粉乳膠手套、耐高壓處理的離心管、一次性吸水紙；9、安全級防護(hù)品：移動紫外線燈、專用工作服、10、專用辦公用品（簽字筆及記錄本等）；11、核酸提取儀；標(biāo)本制備區(qū)是唯一直接與標(biāo)本接觸的區(qū)域，因此要注意生物安全問題，應(yīng)有洗眼器、并配備一個急救箱，箱內(nèi)可放置75%乙醇、棉簽、創(chuàng)可貼等急用藥具。16該區(qū)主要進(jìn)行PCR擴(kuò)增，本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域（樣本制備