1、免疫學(xué)檢驗基礎(chǔ)理論知識免疫學(xué)檢驗基礎(chǔ)理論知識抗原: 凡能刺激機體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細胞并能與之發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)稱為抗原(antigen、Ag)。抗原物質(zhì)具有免疫原性與反響原性。 免疫原性抗原作用: 指能刺激機體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細胞的特性。 反響原性抗原反響: 指抗原與相應(yīng)的抗體或致敏淋巴細胞發(fā)生反響的特性。完全抗原與半抗原 完全抗原: 具有免疫原性與反響原性的物質(zhì)，多為分子量大于5000的蛋白質(zhì)。 半抗原: 只具有反響原性而無免疫原性的物質(zhì)，一般為小分子化合物，例如某些激素、藥物等。抗體: 機體受到抗原物質(zhì)刺激后，由B淋巴細胞轉(zhuǎn)化為漿細胞產(chǎn)生的，能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白(I

2、g)。抗體的根本構(gòu)造 所有種類Ig的單體分子構(gòu)造都是相似的，即由兩條一樣的重鏈(H)和兩條一樣的輕鏈(L)四條肽鏈構(gòu)成的“Y字形的分子。 IgM:分子量最大的免疫球蛋白，抗原刺激誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答中最先產(chǎn)生的抗體。在感染過程中血清IgM水平升高，說明有近期感染，有助于早期診斷。IgG:血清中含量最高，是再次免疫應(yīng)答的主要抗體，是唯一能夠通過胎盤的抗體。感染后出現(xiàn)時間較晚，持續(xù)時間較長，是既往感染的標志。IgA:分為血清型和分泌型，分泌型IgA是參與粘膜局部免疫的主要抗體。IgE:血清中含量最少，介導(dǎo)1型超敏反響。IgD:血清型IgD作用尚不清楚。定義：抗原與相應(yīng)抗體之間的特異性結(jié)合反響。原理：

3、抗原抗體的特異性結(jié)合是基于抗原決定簇與抗體超變區(qū)分子間的構(gòu)造互補性和親和性。這種特性是有抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的。 特異性 空間構(gòu)造互補，如同鑰匙和鎖，一一對應(yīng)。 共同抗原：物質(zhì)外表往往不止一種抗原決定簇，兩種不同抗原物質(zhì)可具有局部一樣或類似構(gòu)造的抗原決定簇。能與彼此相應(yīng)的抗體出現(xiàn)穿插反響。 比例性比例性 指抗原與抗體特異性結(jié)合反響時，生指抗原與抗體特異性結(jié)合反響時，生成肉眼可見結(jié)合物的量與反響物濃度成肉眼可見結(jié)合物的量與反響物濃度的關(guān)系，只有當二者濃度比例適當是，的關(guān)系，只有當二者濃度比例適當是，才出現(xiàn)可見反響。才出現(xiàn)可見反響。 鉤狀效應(yīng)倒鉤：抗體過量鉤狀效應(yīng)倒鉤：抗體過量- -前帶，

4、前帶，抗原過量抗原過量- -后帶。后帶。 可逆性可逆性 抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性稱為抗原抗體結(jié)合的可逆性。 復(fù)合物解離因素：1.抗體對相應(yīng)抗原的親和力。2.環(huán)境因素。PH值，離子強度。 反響物自身因素反響物自身因素抗原：理化性狀，外表抗原決定簇的種抗原：理化性狀，外表抗原決定簇的種類和數(shù)目類和數(shù)目抗體：抗體： 來源：來源不同動物的免疫血清，等來源：來源不同動物的免疫血清，等價帶寬窄不同。價帶寬窄不同。 濃度：與相應(yīng)抗原濃度適宜才易出濃度：與相應(yīng)抗原濃度適宜才易出現(xiàn)可見反響。現(xiàn)可見反響。 特異性與親和力：早期獲得的抗血特異性與親和力：早期獲得的抗血清

5、親和力低，特異性好；后期獲得的清親和力低，特異性好；后期獲得的往往親和力高。診斷試劑盡可能選高往往親和力高。診斷試劑盡可能選高特異性、高親和力的抗體。才能提高特異性、高親和力的抗體。才能提高試驗的可靠性。試驗的可靠性。 反響環(huán)境條件反響環(huán)境條件電解質(zhì)電解質(zhì) 反響必須要有電解質(zhì)參與。反響必須要有電解質(zhì)參與。酸堿度酸堿度 一般以一般以pH6pH69 9為易為易溫度溫度 一般以一般以15 15 40 40，最適溫度為，最適溫度為37 37 。范圍內(nèi)溫度越高反響速度越快，。范圍內(nèi)溫度越高反響速度越快，溫度越低反響越慢但結(jié)合的越結(jié)實。溫度越低反響越慢但結(jié)合的越結(jié)實。56 56 會導(dǎo)致解離甚至變性。會導(dǎo)致

6、解離甚至變性。雙抗體夾心法 適用于檢測分子中具有至少兩個抗原決定簇的多價抗原，而不能用于小分子半抗原。 利用連接在固相載體上的抗體和酶標抗體可分別與樣品中被檢測抗原分子上的兩個不同抗原決定簇結(jié)合，形成固相抗體-抗原-酶標抗體免疫復(fù)合物。151、抗體包 被于載體外表3、加酶標抗體 與抗原結(jié)合4、加酶作用的底物產(chǎn)生顏色2、加待檢物抗原與抗體結(jié)合4、加酶作用的底物 不產(chǎn)生顏色洗滌洗滌洗滌洗滌1、抗體包 被于載體外表2、加待檢物無抗 原與抗體結(jié)合3、加酶標抗體 無抗原結(jié)合+ +- -Y YY YY YE EY YE EY YE EY YY YE EY YE EY YE EY YY YY YY YE E

7、Y YE EY YE EY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y雙抗體夾心法測抗原雙抗體夾心法測抗原間接法 此法是測抗體的常用方法。將抗原連接在固相載體上，樣本中待檢抗體與之結(jié)合成 固相抗原-待檢抗體復(fù)合物，再用酶標二抗針對待檢抗體的抗體與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合。171、抗原吸附于載體外表2、加待檢物無抗體與抗原結(jié)合3、加酶標抗Ig與抗體結(jié)合4、加酶作用的底物產(chǎn)生顏色1、抗體吸附于載體外表2、加待檢物有抗體與抗原結(jié)合3、加酶標的抗Ig抗體4、加酶作用的底物不產(chǎn)生顏色洗滌洗滌洗滌洗滌- -Y YE EY YY YY YE EY

8、YE EY YY YY YE EY YY YE EY YY YE EY YY YE EY YY YE EY YE EY Y間接法測抗體間接法測抗體競爭法 競爭法可用于抗原和半抗原的定量測定，也可對抗體進展測定。 酶標記抗原抗體與待測品中的抗原抗體具有一樣的與固相抗體結(jié)合的能力；反響體系中，固相抗體抗原和酶標抗原抗體是固定限量，且前者的結(jié)合位點少于酶標記與待測抗原抗體分子數(shù)量和；反響后，結(jié)合于固相載體上的復(fù)合物中被測定的酶標抗原抗體的量與待測品中的抗原抗體的濃度成反比。19洗滌洗滌+ +- -Y YY YY YY YY YY YE EY YY YE EY YY YY YY YE EY YY YE

9、 EY YE EY YE EY YE E2 2、加待檢物、加待檢物抗原與酶標抗抗原與酶標抗原競爭與抗體原競爭與抗體結(jié)合結(jié)合3 3、加酶作用、加酶作用的底物不顯色的底物不顯色或顯色弱或顯色弱3 3、加酶作用、加酶作用的底物顯色的底物顯色1 1、抗體包、抗體包被于載體外表被于載體外表1 1、抗體包、抗體包被于載體外表被于載體外表2 2、加待測物、加待測物和酶標抗原，和酶標抗原，酶標抗原與抗酶標抗原與抗體結(jié)合體結(jié)合Y YE E競爭法測抗原競爭法測抗原捕獲法 最常用于IgM抗體檢測。先將針對IgM的第二抗體連接于固相載體，用以結(jié)合樣品中所有的IgM抗體，然后參加特異抗原與待檢IgM抗體結(jié)合；再參加抗原

10、特異的梅標抗體，最后形成固相二抗- IgM-抗原-梅標抗體復(fù)合物。21洗滌洗滌洗滌洗滌+ +- -E EY YE EY YE EY YE EY YE EY YY YY YY YY Y Y YY Y 1 1、固相化抗人、固相化抗人IgMIgMY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y1 1、固相化抗人、固相化抗人IgMIgM2 2、加待測物、加待測物特異性特異性IgMIgM與與非特異性非特異性IgMIgM和抗人和抗人IgMIgM結(jié)合結(jié)合3 3、加特異性、加特異性抗原，與特異抗原，與特異性抗體結(jié)合性抗體結(jié)合4 4、加酶標抗體、加酶標抗體與特異性抗原結(jié)與特異性抗原結(jié)合，加底物顯色