1、實驗四實驗四 果蠅唾腺染色體果蠅唾腺染色體一、實驗目的一、實驗目的掌握果蠅幼蟲唾腺染色體的制片技術。掌握果蠅幼蟲唾腺染色體的制片技術。觀察果蠅唾腺染色體的主要形態特征。觀察果蠅唾腺染色體的主要形態特征。二、實驗原二、實驗原理理v1881年，意大利的細胞學家巴爾比尼（年，意大利的細胞學家巴爾比尼（Balbiani)在在雙翅目昆蟲搖蚊幼蟲的唾腺細胞間期核中發現了一種雙翅目昆蟲搖蚊幼蟲的唾腺細胞間期核中發現了一種巨大的染色體，由于存在于唾腺細胞中，所以又稱為巨大的染色體，由于存在于唾腺細胞中，所以又稱為唾腺染色體唾腺染色體。v1933年，美國學者貝恩特（年，美國學者貝恩特（Painter）等又在果蠅

2、和）等又在果蠅和其它雙翅目昆蟲的幼蟲唾腺細胞間期核中發現了巨大其它雙翅目昆蟲的幼蟲唾腺細胞間期核中發現了巨大染色體。染色體。v這種染色體寬約這種染色體寬約5m，長，長400m，因而因而又稱為又稱為巨大染色體巨大染色體。巨大染色體的形成巨大染色體的形成果蠅三齡幼蟲的唾液腺細胞不再分裂，停留在永久果蠅三齡幼蟲的唾液腺細胞不再分裂，停留在永久間期，染色體螺旋化程度低呈充分伸展狀態。在幼蟲間期，染色體螺旋化程度低呈充分伸展狀態。在幼蟲發育過程中細胞核中的發育過程中細胞核中的DNA多次復制，但細胞、細胞多次復制，但細胞、細胞核不分裂復制后的染色單體核不分裂復制后的染色單體DNA也不分開，大約有也不分開，

3、大約有10004000根染色體絲的拷貝，這種現象叫做根染色體絲的拷貝，這種現象叫做核內有核內有絲分裂絲分裂，這種染色體也稱為，這種染色體也稱為多線染色體多線染色體。另外唾液腺。另外唾液腺細胞中同源染色體互相靠攏在一起呈現一種聯會狀態，細胞中同源染色體互相靠攏在一起呈現一種聯會狀態，稱為稱為體聯會。體聯會。 在這些染色體臂上可以看到染色深淺在這些染色體臂上可以看到染色深淺不同，被稱做明帶、暗帶的橫紋，這些不同，被稱做明帶、暗帶的橫紋，這些橫紋的位置，寬窄、數目都具有物種的橫紋的位置，寬窄、數目都具有物種的特異性。不同物種，不同染色體的不同特異性。不同物種，不同染色體的不同部位形態位置是固定的，因

4、此根據染色部位形態位置是固定的，因此根據染色體各條臂帶紋特征和各條臂端部帶紋特體各條臂帶紋特征和各條臂端部帶紋特征能準確識別各條染色體。征能準確識別各條染色體。由于在唾液腺細胞中由于在唾液腺細胞中8 8條染色體之間以著絲粒互相條染色體之間以著絲粒互相連結在一起，經堿性染料染色后，可以觀察到一個染連結在一起，經堿性染料染色后，可以觀察到一個染色較深的染色中心。短小的第色較深的染色中心。短小的第4 4染色體和染色體和x x染色體的著染色體的著絲粒在端部，所以看上去各自只形成一條線狀和點狀絲粒在端部，所以看上去各自只形成一條線狀和點狀染色體；第染色體；第2 2和第和第3 3染色體的著絲粒在中央，它們

5、從染染色體的著絲粒在中央，它們從染色中心以色中心以V V字形向外伸出字形向外伸出(2L,2R,3L,3R)(2L,2R,3L,3R)，在顯微鏡下，在顯微鏡下短小的第短小的第4 4染色體有時不易觀察到，因此可以觀察到染色體有時不易觀察到，因此可以觀察到由染色中心向外輻射出的由染色中心向外輻射出的5 5條長染色體臂和一條短小條長染色體臂和一條短小的染色體臂。雄果蠅的的染色體臂。雄果蠅的Y Y染色體幾乎包含在染色中心染色體幾乎包含在染色中心里，因為是異染色質，看起來染色可能淡些。里，因為是異染色質，看起來染色可能淡些。 在染色體臂上還可看到某些帶紋通過染色體的解旋、在染色體臂上還可看到某些帶紋通過染

6、色體的解旋、膨大形成的疏松區、其富含轉錄出來的膨大形成的疏松區、其富含轉錄出來的RNARNA，因此不，因此不著色，是基因活動的區域。在個體發育的不同階著色，是基因活動的區域。在個體發育的不同階段疏松區在染色體上出現的部位不同，據此可以研段疏松區在染色體上出現的部位不同，據此可以研究基因的表達，而且如果染色體有缺失、重復、倒位、究基因的表達，而且如果染色體有缺失、重復、倒位、易位等，很容易在唾腺染色體上識別出來。易位等，很容易在唾腺染色體上識別出來。多線染色體的特征多線染色體的特征（1 1）巨大。）巨大。（2 2）體細胞配對，所以染色體只有半數。）體細胞配對，所以染色體只有半數。（3 3）各染色

7、體的著絲粒部分互相靠攏形成染）各染色體的著絲粒部分互相靠攏形成染 色中心。色中心。（4 4）橫紋有深淺、疏密的不同，各自對應排）橫紋有深淺、疏密的不同，各自對應排 列，這意味著基因的排列。列，這意味著基因的排列。三、實驗材料三、實驗材料 果蠅的三齡幼蟲果蠅的三齡幼蟲 0.7%0.7%生理鹽水生理鹽水, , 改良石碳酸品紅或醋酸洋紅改良石碳酸品紅或醋酸洋紅雙筒解剖鏡雙筒解剖鏡, , 解剖針解剖針, , 吸水紙吸水紙，顯微鏡等顯微鏡等位置：在幼蟲體前約位置：在幼蟲體前約1/3處。處。形狀：形如一對香蕉，上小下大。一邊常附著帶形狀：形如一對香蕉，上小下大。一邊常附著帶狀的不透明的脂肪。狀的不透明的脂

8、肪。顏色：半透明如玻璃，略帶白色，比周圍的組織顏色：半透明如玻璃，略帶白色，比周圍的組織都透明。都透明。唾液腺唾液腺 四四、實驗步驟、實驗步驟1、剝離唾腺、剝離唾腺 在載玻片上滴一滴生理鹽水，取三齡幼蟲放在載玻片上滴一滴生理鹽水，取三齡幼蟲放在其中。左手用解剖針壓住幼蟲后端在其中。左手用解剖針壓住幼蟲后端1/3處，處，右手的解剖針按住頭部黑色口器向外拉，將右手的解剖針按住頭部黑色口器向外拉，將頭部從身體拉開，唾腺隨之而出。頭部從身體拉開，唾腺隨之而出。 用吸水紙小心地除去幼蟲的其他組織和生理用吸水紙小心地除去幼蟲的其他組織和生理鹽水，去除幼蟲其它組織部分，并把唾腺周鹽水，去除幼蟲其它組織部分，并把唾腺周圍的白色脂肪剝離干凈圍的白色脂肪剝離干凈，只保留唾腺。只保留唾腺。 2 2、染色、染色 滴加改良石碳酸品紅或醋酸洋紅，染色約滴加改良石碳酸品紅或醋酸洋紅，染色約10 min10 min。 3 3、蓋片和壓片、蓋片和壓片 染色完成后，蓋上干凈的蓋片，并覆一層濾紙。染色完成后，蓋上干凈的蓋片，并覆一層濾紙。將片子放在實驗臺上，