1、 與與 HPV癌基因E6/E7mRNA 主要內容 報告解讀、處理建議1 臨床意義、適用范圍 32 主要內容1 HPV癌基因E6/E7mRNA 1v2.型別：120多種（依據L1 DNA）v1.結構： 外殼蛋白：L1蛋白（72個五聚體）， L2蛋白（12個）。 內部遺傳物質：閉環、雙鏈DNA 。 （不含 RNA）v3.分類：依據生物特性、致癌性 高危型HPV(HR-HPV)：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、66 低危型HPV（LR-HPV）：6、11、42、43、44 什么是E6/E7 mRNA ?L1: 主要衣殼蛋白，是疫苗的主要成分。 L2: 次

2、要衣殼蛋白，是市售抗體的主要識別位點。E4：結合并破壞細胞角蛋白網，形成挖空細胞的外觀。E2：負性調節E6和E7，維持凋亡和細胞周期的調控。通常在病毒發生整合時失活。HPV 的主要致癌基因E6通過抑制p53而阻斷凋亡E7 通過抑制pRB使細胞周期失控。XHPV的基因片段及功能E6/E7 mRNA ?高危亞型HPV感染宮頸上皮細胞，將產生兩種癌蛋白：E6和E7蛋白。癌蛋白可與宿主細胞的細胞周期調節蛋白（抑癌蛋白如P53、RB等）相結合，導致細胞周期控制失常，發生癌變。 （人民衛生出版社、婦產科學、2004年1月第6版）致癌原理 E6/E7 mRNA與宮頸癌的關系E6、E7mRNA-是宮頸病變是宮

3、頸病變開始和進展開始和進展的必由之的必由之路路!HPV感染在宮頸細胞內的表達過程基因改變早于細胞改變基因改變早于細胞改變E6/E7mRNA： 是致癌基因E6/E7表達的直接產物； 是最終致癌物-E6/E7癌蛋白合成的模板； 是宮頸病變開始和進展的必要條件！ 小結小結 主要內容1 E6/E7mRNA的臨床意義與適用范圍 2高危的HPV感染宮頸上皮細胞癌基因E6、E7 mRNAE6、E7 癌蛋白E6、E7 癌蛋白與抑癌蛋白P53、RB等結合宮頸細胞CIN或癌變癌基因E6、E7 DNAHPV病毒學檢測病毒癌基因學檢測細胞形態學檢測HPV L1 DNAHPV L1 mRNAHPV L1 蛋白HPV復制

4、繁殖HPV感染后演變路徑及宮頸癌篩查&診斷方法應用檢測方法檢測方法檢測靶標檢測靶標主要檢測意義主要檢測意義巴氏涂片巴氏涂片宮頸上皮細胞宮頸上皮細胞提示提示宮頸細胞宮頸細胞已發生的病變情況，篩查的基本已發生的病變情況，篩查的基本方法。主要用于評估現階段宮頸（病變）情況。方法。主要用于評估現階段宮頸（病變）情況。液基細胞學液基細胞學（TCTTCT）HPVHPV病毒學病毒學HPVHPV病毒病毒DNADNA提示是否有提示是否有病毒病毒感染。主要用于評估現階段宮感染。主要用于評估現階段宮頸是否有病毒感染。頸是否有病毒感染。癌基因癌基因E6/E7 mRNA檢測檢測病毒癌基因病毒癌基因E6/E7 mRNAE

5、6/E7 mRNA提示病毒提示病毒癌基因已經癌基因已經轉錄表達轉錄表達。可用于了解人體宮頸細胞或組織癌變的可用于了解人體宮頸細胞或組織癌變的發發展趨勢展趨勢。陰道鏡檢陰道鏡檢宮頸內表面宮頸內表面提示已經發展到提示已經發展到宮頸表面宮頸表面的病變及其位置。主的病變及其位置。主要是更直接輔助檢查現階段宮頸（病變）情況。要是更直接輔助檢查現階段宮頸（病變）情況。宮頸活檢宮頸活檢宮頸組織宮頸組織提示提示宮頸組織宮頸組織病變情況，確診金標準。病變情況，確診金標準。 臨床意義-特異性強、陽性預測值高正常宮頸感染HPV輕度宮頸上皮內瘤變(CIN )中度宮頸上皮內瘤變(CIN )高度宮頸上皮內瘤變(CIN )

6、原位癌浸潤癌依靠免疫力80%自行消退06-18 個月至少2年后5-10 年后一過性感染持續性感染62%轉為正常16%進一步進展22%維持原狀54%轉為正常30%進一步進展16%維持原狀100%HPV感染致宮頸癌模式圖什么樣的感染者會進一步進展呢？哪種檢測方法能提示？什么樣的感染者會進一步進展呢？哪種檢測方法能提示？E6/E7mRNA檢測 1、發現已感染HPV，且癌基因已經表達的宮頸病變高風險 者, 特異性強、陽性預測值高； 2、彌補：細胞學檢測敏感性； HPV檢測特異性； 陰道鏡/活檢的漏檢等。 3、預測發展趨勢，指導后續治療、隨訪。提供關鍵的癌變信息，治療更提供關鍵的癌變信息，治療更及時及時

7、，預防更，預防更有效有效！ 小 結 適用范圍（不局限于30歲以上人群）： 1、篩查：細胞學+ E6/E7 mRNA檢測； 2、輔助診斷： （1）細胞學+E6/E7 mRNA檢測； （2）若HPV（+） E6/E7 mRNA檢測； （3）病理組織+ E6/E7 mRNA檢測。 3、手術后及隨訪時: 組織學+癌基因E6/E7 mRNA； 細胞學+ E6/E7 mRNA檢測。v TCT結果正常的女性，在正常篩查間隔內一定是安全的嗎？v TCT結果：ASCUS，如何評估風險？ 直接鏡檢&活檢：過度檢查？ 隨訪：漏診？ v 30歲以下婦女，感染率高，清除率高，HPV（+）率高，該如何評估風險？篩查 常見

8、問題. .Intracellular Human Papillomavirus E6, E7 mRNA Quantification Predicts CIN 2 + in Cervical Biopsies Better Than Papanicolaou Screening for Women Regardless of Age. Arch Pathol Lab Med. 2012；136:956-960.E6/E7 mRNA檢測； 聯合TCT篩查 基因改變早于細胞形態改變，輔助提高細胞學敏感性，ASC-US分流 30歲以下女性篩查效率。 篩查應用v CIN1風險評估？隨訪時間確定。v C

9、INII-III的患者，手術方式 術后隨訪。 特殊病例：未生育女性、妊娠女性？ 隨訪間隔？ 輔助診斷 常見問題：正常宮頸感染HPV輕度宮頸上皮內瘤變(CIN )中度宮頸上皮內瘤變(CIN )高度宮頸上皮內瘤變(CIN )原位癌浸潤癌依靠免疫力80%自行消退06-18 個月至少2年后5-10 年后一過性感染持續性感染62%轉為正常16%進一步進展22%維持原狀54%轉為正常30%進一步進展16%維持原狀100%HPV感染致宮頸癌模式圖預測性能預測性能ASCUS & LSILASCUS & LSIL者，者，2年內跟蹤診斷至年內跟蹤診斷至CIN2+女性：女性：HPV HPV E6E6、E7 mRNA

10、作為監測手段：檢測呈陽性數量約是陰性數量的作為監測手段：檢測呈陽性數量約是陰性數量的69.8倍。倍。HPV HPV DNADNA作為監測手段：檢測呈陽性數量約是陰性數量的作為監測手段：檢測呈陽性數量約是陰性數量的5.7倍。倍。Tor Molden etc. Predicting CIN2+ when detecting HPV mRNA and DNA by PreTect HPV-Proofer and consensus PCR: a 2-year follow-up of women with ASCUS or LSIL Pap smear. International Journal

11、of Cancer. Int. J. Cancer, 2005,114: 973976.E6/E7 mRNA檢測 輔助活檢后人群的后續處理，提高診斷水平：n 組織學CIN1，建議采用E6/E7mRNA檢測： E6/E7mRNA檢測陽性，建議縮短隨訪時間； E6/E7mRNA檢測陰性，建議根據醫囑隨訪。n 組織學CIN2+，建議采用E6/E7mRNA檢測： E6/E7mRNA檢測陽性，建議積極治療； E6/E7mRNA檢測陰性，建議保守治療，密切隨訪。 輔助診斷應用v 手術后殘端是否會殘留病毒？復發的可能性多大？ v 術后隨訪間隔是多久，確定依據是什么？ 術后隨訪 常見問題：Detection

12、of Residual/Recurrent Cervical Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Successful LEEP Conization: the Disease after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-HPV Test.Possible Role of mRNA-HPV Test.LeepLeep錐切術成功后檢測剩余錐切術成功后檢測剩余/ /復發的宮頸疾病：復發的宮頸疾病：mRNA HPVmRNA HPV檢測可能發揮的作檢測可

13、能發揮的作用。用。14%-70%的陽性切緣患者的陽性切緣患者5-15%的干凈切緣患者的干凈切緣患者 存在復發宮頸疾病的風險。存在復發宮頸疾病的風險。E6/E7E6/E7mRNAmRNA檢測的隨訪檢測的隨訪 Detection of Residual/Recurrent Cervical Disease after Successful LEEP Conization: the Possible Role of mRNA-HPV Test. Current Pharmaceutical Design 2013,19,1450-1457. 術后，mRNA（+）比mRNA（-）復發的幾率更高n=11

14、6（CIN患者經LEEP刀治療后）E6/E7 mRNA檢測，輔助術后的后續處理：n 手術后，病理組織學診斷+E6/E7mRNA檢測n 術后隨訪，細胞學+E6/E7mRNA檢測。 術后隨訪應用病例分析-30歲已婚女性 2013.12.3體檢： E6/E7mRNA(+) 低度風險 TCT正常未進行干預性治療，3個月復查 2014.3.25 細胞學：ASC-US E6/E7mRNA(+) 高度風險 術后病檢結果：宮頸1點、6點慢性宮頸炎，部分區域呈濕疣性改變；12點處小灶區域CIN2LEEP3: 2012.9月，廣東一家醫院，一病人66歲TCT HSIL，E6、E7mRNA檢測陰 性，TCT閱片老師

15、認為那個標本報告為癌都不為過，所以進行活檢，但 活檢結果為CIN1-2級，臨床醫生對活檢不滿意，并考慮到該病人年齡 比較大，行使錐切后活檢，活檢結果CIN1。1：2012.3月，河北一醫院對一LEEP術后45歲病人加做E6，E7mRNA檢 測，發現拷貝值為2萬多，兩周后重新取樣檢測，發現E6,E7 mRNA 檢測仍有一萬多拷貝，于是重新取樣活檢，發現切緣為CIN3級。2：2012.7月浙江余姚市一醫院，一病人HPV 檢測陰性，TCT檢測正常， E6、E7mRNA檢測一萬多拷貝，主任對該檢測結果質疑，對該病人進行 活檢，病理結果CIN23級。病例病例 主要內容1 報告解讀及處理建議 3 細胞細胞

16、學學E6E6、E7E7mRNAmRNA結果解讀結果解讀臨床處理建議臨床處理建議 正常正常-未檢測到癌未檢測到癌基因轉錄。基因轉錄。1年后復查細胞學和年后復查細胞學和E6/E7 mRNA。 +癌基因轉錄癌基因轉錄，未觀察到，未觀察到細胞形態的細胞形態的改變。改變。酌情進行陰道鏡檢或酌情進行陰道鏡檢或6個月后復查細胞學和個月后復查細胞學和E6/E7 mRNA。ASC-ASC-USUS -未檢測到癌未檢測到癌基因轉錄。基因轉錄。6-12個月復查細胞學和個月復查細胞學和E6/E7 mRNA。 +癌基因已經癌基因已經開始轉錄，開始轉錄，細胞形態處細胞形態處于轉變期。于轉變期。異常異常-癌基因此時癌基因此

17、時處于轉錄不處于轉錄不活躍狀態。活躍狀態。 +癌基因已經癌基因已經開始轉錄，開始轉錄，細胞形態已細胞形態已經明顯改變經明顯改變，處于細胞，處于細胞形態改變狀形態改變狀態。態。陰道鏡/活檢如無病變，半年后復查E6/E7 mRNA如E6/E7 mRNA（+），查細胞學細胞學ASC-US,陰道鏡檢如E6/E7 mRNA（-），半年后查E6/E7 mRNA+細胞學。陰道鏡/活檢無病變：嚴密隨訪CIN2+:相應手術治療組織組織學學E6E6、E7E7mRNAmRNA結果解讀結果解讀臨床處理建議臨床處理建議 CIN1CIN1-未檢測到癌未檢測到癌基因轉錄。基因轉錄。 立即用病理標本的石蠟切片做立即用病理標本

18、的石蠟切片做E6/E7mRNA檢測檢測+癌基因處于癌基因處于轉錄活躍狀轉錄活躍狀態，進展風態，進展風險較大。險較大。1、建議用病理標本的石蠟切片做建議用病理標本的石蠟切片做E6/E7 mRNA檢測，作為檢測，作為 治療的輔助指標。治療的輔助指標。2、嚴格隨訪或進行積極處理（如冷凍、電灼的病灶處理嚴格隨訪或進行積極處理（如冷凍、電灼的病灶處理CIN2CIN2/3/3 -癌基因處于癌基因處于轉錄不活躍轉錄不活躍狀態。狀態。1、立即用病理標本的石蠟切片做立即用病理標本的石蠟切片做E6/E7 mRNA檢測，作為檢測，作為治療的輔助指標。治療的輔助指標。 2、臨床處理請參照宮頸癌診治指南臨床處理請參照宮

19、頸癌診治指南。3、建議術后建議術后6個月進行細胞學及個月進行細胞學及E6/E7 mRNA檢測。檢測。 +癌基因處于癌基因處于轉錄活躍狀轉錄活躍狀態，進展風態，進展風險較大。險較大。1、建議用病理標本的石蠟切片做建議用病理標本的石蠟切片做E6/E7 mRNA檢測，作為檢測，作為治療的輔助指標。治療的輔助指標。 2、臨床處理請參照指南臨床處理請參照指南,如宮頸如宮頸切除或消融。建議積極處理及嚴格隨訪。切除或消融。建議積極處理及嚴格隨訪。3、建議術后建議術后6個月殘端進行細胞學及個月殘端進行細胞學及E6/E7 mRNA檢測。檢測。E6/E7mRNA（-），），6個月復查細胞學及個月復查細胞學及E6/

20、E7mRNA檢測。檢測。E6/E7mRNA（+）、）、6個月復個月復查細胞學查細胞學ASCUS或或E6/E7mRNA(+)，建議積極處理，建議積極處理,如如冷凍、電灼或冷凍、電灼或LEEP。報告單解讀陰性報告單解讀陽性取樣方法取樣方法一、細胞樣本一、細胞樣本二、組織樣本二、組織樣本石蠟切片：石蠟切片：厚度厚度3-5um切片切片4-10片片宮頸上皮脫落細胞宮頸上皮脫落細胞同同TCT可與可與TCT共用共用（一般（一般5-10ml，不少于，不少于3ml）小結小結 高危HPV的E6/E7致癌基因表達產生E6/E7癌蛋白是宮頸癌的關鍵病因。 E6/E7mRNA： 是E6/E7癌蛋白合成的模板； 是宮頸癌

21、變的必由之路！ E6/E7mRNA檢測： 篩查、輔助診斷、術后隨訪。 檢測取樣： 脫落細胞同TCT 組織取樣：石蠟切片 感謝您的傾聽！祝：身體健康祝：身體健康 工作順利工作順利 心想事成！心想事成！高危亞型HPV感染宮頸上皮細胞，將產生兩種癌蛋白：E6和E7蛋白。癌蛋白可與宿主細胞的細胞周期調節蛋白（抑癌蛋白如P53、RB等）相結合，導致細胞周期控制失常，發生癌變。 （人民衛生出版社、婦產科學、2004年1月第6版）致癌原理 E6/E7 mRNA與宮頸癌的關系E6、E7mRNA-是宮頸病變是宮頸病變開始和進展開始和進展的必由之的必由之路路!E6/E7mRNA： 是致癌基因E6/E7表達的直接產物； 是最終致癌物-E6/E7癌蛋白合成的模板； 是宮頸病變開始和進展的必要條件！ 小結小結 適用范圍（不局限于30歲以上人群）： 1、篩查：細胞學+ E6/E7 mRNA檢測； 2、輔助診斷： （1）細胞學+E6/E7 mRNA檢測； （2）若HPV（+） E6/E7 mRNA檢測； （3）病理組織+ E6/E7 mRNA檢測。 3、手術后及隨訪時: 組織學+癌基因E6/E7 mRNA； 細胞學+ E6/E7 mRNA檢測