1、靈芝孢子油抗腫瘤藥效學研究及相關機理探討項目名稱：靈芝孢子油抗腫瘤藥效學研究及相關機理探討Researches on the Antineoplastic Pharmacodynamics and Relative Mechanisms of Ganoderma Lucidum Spore Oil主管單位： 流動站名：基礎醫學二級學科：藥理學合作導師： 目 錄中文摘要3Abstract5一. 前 言81 背 景82 計劃及目標16二. 博士后期間需要解決的問題及思路17三. 計劃進度及完成情況18四. 研究內容19（一） 祛邪作用（直接抑制腫瘤細胞生長的作用）201. 靈芝孢子油注射乳劑的急性

2、毒性試驗202. 體內抗腫瘤作用小鼠移植瘤試驗232.1 靈芝孢子油注射乳劑iv對S180小鼠肉瘤的抑制作用232.2 靈芝孢子油注射乳劑iv對H22小鼠肝癌的抑制作用273. 體外抗腫瘤試驗靈芝孢子油注射乳劑對體外培養人癌細胞的生長抑制作用294. 體內抗腫瘤作用人癌裸小鼠移植瘤試驗34靈芝孢子油注射乳劑iv對人胃癌SGC-7901裸小鼠移植瘤的抑制作用靈芝孢子油注射乳劑iv對人卵巢癌HO-8910裸小鼠移植瘤的抑制作用（二） 扶正作用（調節機體免疫功能）靈芝孢子油注射乳劑的扶正作用研究451. 對動物免疫功能的影響451.1 對H22荷瘤小鼠體液免疫功能的影響451.2 對正常小鼠體液免疫

3、功能的影響461.3 對H22荷瘤小鼠網狀內皮系統(RES)吞噬功能的影響471.4 對正常小鼠網狀內皮系統(RES)吞噬功能的影響491.5 對H22荷瘤小鼠特異性細胞免疫功能的影響 (DTH試驗法)501.6 對正常小鼠延遲性超敏反應的影響 (DTH試驗法) 512. 對荷瘤動物生物調節因子的影響靈芝孢子油注射乳劑對H22荷瘤小鼠生物調節因子的影響523. 對荷瘤動物的抗癌作用（見（一）祛邪作用）53（三） 減 毒 作 用靈芝孢子油注射乳劑對放、化療毒副反應的減毒作用541 靈芝孢子油注射乳劑 iv對H22荷瘤小鼠環磷酰胺(CTX)化療的減毒作用542 靈芝孢子油注射乳劑 iv對正常小鼠環

4、磷酰胺(CTX)化療的減毒作用543 靈芝孢子油注射乳劑 iv對H22荷瘤小鼠60Co放療的減毒作用554 靈芝孢子油注射乳劑 iv對正常小鼠60Co放療的減毒作用56（四） 作用機理的研究591. 靈芝孢子油注射乳劑對腫瘤細胞增殖的影響592. 靈芝孢子油注射乳劑對腫瘤細胞調亡的研究64（五） 其它實驗研究（口服靈芝孢子油等系列研究）731. 口服靈芝孢子油的體內抗腫瘤作用（小鼠和裸小鼠模型）732. 口服靈芝孢子油對動物免疫功能的影響813. 口服靈芝孢子油對荷瘤動物生物調節因子的影響854. 口服靈芝孢子油對放、化療毒副反應的減毒作用855. 康萊特注射液的體內抗腫瘤作用（小鼠及人癌裸小

5、鼠移植瘤實驗）896. 口服靈芝孢子油對正常小鼠的免疫調節作用90五、研究工作總結104六、討 論106七、參考文獻109八、博士后期間主要工作內容匯總113九、縮 略 語114十、博士后期間發表論著匯總117十一、致 謝118靈芝孢子油抗腫瘤藥效學研究及相關機理探討中文摘要靈芝是擔子菌綱多孔菌科（Polyproraceae）靈芝屬（Ganoderma）真菌的總稱，中國藥典（2021 版一部）收載了赤芝Ganoderma lucidum (Ley ss. Ex Fr.)Karst和紫芝Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang。自古以來，靈芝是祖國中醫藥寶庫中的珍品

6、，素有仙草之譽。近年來，對靈芝屬真菌的化學成分及臨床作用的研究頗多，對靈芝的生殖細胞-靈芝孢子藥用價值的研究也日益加強,特別是由靈芝孢子提取出來的靈芝孢子油已經成為現代研究的焦點。本課題以靈芝孢子油注射乳劑為主要研究對象，對靈芝孢子油的抗腫瘤藥效學及相關機理進行了系統而全面的研究。不僅從離體和整體層面闡述了靈芝孢子油的抗腫瘤藥效作用，而且從分子水平深入探討了其抗腫瘤的作用機理。(一) 祛邪作用（直接抑制腫瘤細胞生長的作用）在ICR小鼠移植瘤模型上的實驗結果表明，靈芝孢子油注射乳劑（0.25，0.5，1.0 g/kg，i.v）對小鼠移植瘤H22（肝癌）和S180（肉瘤）具有確切的抑制作用，腫瘤生

7、長抑制率在40 %以上（P0.05）。在BALB/cA 裸小鼠人癌移植瘤模型上的實驗結果表明，靈芝孢子油注射乳劑（1 g/kg，i.v）均對人胃癌SGC-7901和人卵巢癌HO-8910有確切的抑制作用，相對腫瘤增殖率T/C（%）均在60 % 以下（P 0.05）。靈芝孢子油注射乳劑對體外培養的SGC-7901，HO-8910 ，Hu-7等15種人癌細胞具有不同程度的生長抑制作用。(二) 扶正作用（增強機體免疫功能的作用）1. 靈芝孢子油注射乳劑對動物免疫功能的影響靈芝孢子油注射乳劑（0.25，0.5，1.0 g/kg）i.v給藥可顯著提高H22荷瘤和正常小鼠的廓清指數K 、吞噬系數和脾臟系數

8、；靈芝孢子油注射乳劑高、中劑量iv給藥可顯著提高H22荷瘤和正常小鼠由2,4-二硝基氟苯（DNFB）引起的遲發性過敏反應；靈芝孢子油注射乳劑iv給藥對H22荷瘤和正常小鼠血清半數溶血值無顯著影響。2. 靈芝孢子有注射乳劑對H22荷瘤小鼠生物調節因子的影響靈芝孢子油注射乳劑高劑量(1.0 g/kg)iv給藥明顯提高H22荷瘤小鼠血清IFN-水平（P 0.05）。扶正作用實驗結果表明，靈芝孢子油注射乳劑可顯著增強機體的免疫功能。(三) 減毒作用（對放、化療毒副反應的減毒作用）靈芝孢子油注射乳劑高劑量（1.0 g/kg）iv給藥可顯著對抗由環磷酰胺（CTX）和60Co造成的H22荷瘤和正常小鼠外周血

9、白細胞、骨髓有核細胞數和脾臟系數的下降。減毒實驗結果表明，靈芝孢子油注射乳劑對放化療引起的毒性反應有一定的減毒作用。(四) 作用機理的研究用MTT法對靈芝孢子油注射乳劑的作用進行了檢測，結果表明靈芝孢子油注射乳劑對各種組織來源的腫瘤細胞的生長具有不同程度的抑制作用。用流式細胞儀和DNA Ladder的方法檢測了靈芝孢子油注射乳劑作用后DNA片段形成，一種細胞凋亡的典型表現。結果靈芝孢子油注射乳劑對能明顯抑制細胞增殖的腫瘤細胞發現DNA片段形成，而靈芝孢子油注射乳劑對不能抑制細胞增殖的腫瘤細胞則不出現DNA片段形成。結果表明靈芝孢子油注射乳劑可通過誘導細胞凋亡殺傷腫瘤細胞，抑制腫瘤細胞增殖。靈芝

10、孢子油注射乳劑可以直接抑制腫瘤細胞的增殖，誘導腫瘤細胞調亡，這是靈芝孢子油注射乳劑抗腫瘤作用的機理之一。(五) 其它實驗研究（口服靈芝孢子油等系列研究，限于篇幅，在此略）關鍵詞：靈芝孢子油，注射乳劑，抗腫瘤，免疫功能，祛邪作用，扶正作用，減毒作用，細胞凋亡.Researches on the Antineoplastic Pharmacodynamics and Relative Mechanisms of Ganoderma Lucidum Spore OilAbstractGanoderma (Ling Zhi or Renzhi in Chinese; Saruno Koshikake

11、or Mannendake in Japanese), a medicinal mushroom, has been used extensively as “the mushroom of immortality” in China and other Asian countries. This medicinal mushroom is highly ranked in traditional Chinese medicine and has been used as a panacea for many types of chronic diseases, as described 20

12、21 years ago in Shen Nungs Herbal. These diseases include cancer, neurasthenia, hypertension, type II diabetes, and hepatopathy. Ganoderma is the generic name of fungous, which belongs to Ganoderma genus, Polyproraceae, Bas diomycetes. It is received in Chinese Pharmacopoeia (2021 ) that Ganoderma l

13、ucidum (Ley ss. Ex Fr.) Karstand Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang. Recently, a lot of researches on the chemical constituents, the pharmacologically active new compounds and clinical uses of Ganoderma Lucidum have been made. Studies on the germocyte of Ganoderma Lucidum (spore) are also increased

14、 dramatically, especially on sporoderm-broken Ganoderma Lucidum Spore Oil. Focused on the Ganoderma Lucidum Spore Oil injection emulsion (here named HFL, the same below), we have carried out systematic and full-scale experiments on the antineoplastic pharmacodynamics and mechanisms of Ganoderma Luci

15、dum Spore Oil. Our goals are to elucidate its antineoplastic pharmacodynamics from ex vivo and in vivo, furthermore, to make deep insights into the molecular mechanism.1. Effect on eliminating pathogenic factors (Directly inhibit tumor cells growth)In vivo animal models, tumor transplantation in ICR

16、 mouse，HFL (0.25，0.5，1.0 g/kg，i.v) showed significant inhibition effects in mice bearing transplanted hepatoma H22 and sarcoma 180, the inhibition rate of tumor growth all above 40 % (P0.05).On models of human cancer (human gastric carcinoma SGC-7901 and ovarian cancer HO-8910, respectively) transpl

17、anted into BALB/cA nude mice, HFL (1 g/kg, i.v) both showed remarkably inhibition activity, their relative tumor growth rates all below 60 % (P0.05).By using MTT method, in ex vivo experiments of different human cancer cells, such as SGC-7901，HO-8910，Hu-7,etc 15 human cancer strains, HFL has been fo

18、und different growth inhibition effects on different cancer cells. 2. Effect on reinforcing the healthy qi (Enhance the body immune function)(1) Effects on the host immune function of normal and bearing cancer mouseHFL（0.25，0.5，1.0 g/kg, i.v）could notably raise clearance index K, phagotrophic coeffi

19、cient and spleen coefficient in normal and bearing H22 cancer mice, respectively. The high and middle groups of HFL significantly boosted the delayed hypersensitivity reaction induced by 2,4-dinitro-1-fluorobenzene (DNFB) in bearing cancer and normal mice. HFL showed no significant influence on the

20、serum HC50 of bearing cancer and normal mice.(2) Effects of HFL on biological regulatory factors in bearing H22 cancer mouseThe high dose group of HFL(1.0 g/kg, i.v) increased the IFN- level in the serum of H22 bearing cancer mouse(P0.05).All data in experiments of strengthening the body resistance

21、showed that HFL could enhance the host immune function significantly.3. Effect on reducing the toxicity (Reduce the toxicity of radiotherapy and chemotherapy)The high dose group of HFL (1.0 g/kg, i.v) could counteract the decrease of peripheral white blood cells (PWBC), marrow nucleated cells and sp

22、leen index of bearing cancer and normal mice induced by Cytoxan (CTX) or 60Co.Results here showed that HFL could counteract the toxicity of radiotherapy and chemotherapy in some way.4. Researches on the mechanismsIn MTT reduction assay experiments, HFL showed different growth inhibition effects on d

23、ifferent human cancer cells.By using the methods of flow cytometry and DNA Ladder, the formation of DNA fragment after using HFL was detected. Its a typical appearance of apoptosis. The formations of DNA fragments have been detected in cancer cells, which are inhibited by HFL significantly. On the c

24、ontrary, no fragments could be found. These results showed that HFL could kill the cancer cell by inducing apoptosis and inhibit cell proliferation.HFL could inhibit cancer cells proliferation directly and induce cancer cells apoptosis. These might be one of the antineoplastic mechanisms. 5. Other e

25、xperiments (Series studies of oral Ganoderma Lucidum Spore Oil, etc, details not been showed here.)Key Words: Ganoderma Lucidium Spore Oil, Injection Emulsion, Antineoplastic, Immune Function, Eliminate Pathogenic Factors，Reinforce the Healthy Qi， Reduce Toxicity, Apoptosis.十一、致 謝本項目是在合作導師雷林生教授（南方醫科

26、大學）、劉菊妍（廣州醫藥集團總工程師、教授級高工）、葛發歡（廣州漢方現代中藥研究開發 副總經理教授級高工）的共同悉心指導下完成的。他們高尚的人格、淵博的學識、嚴謹的治學態度使我獲益匪淺，衷心感謝他們對我的諄諄教誨和無微不至的關懷。 感謝廣州醫藥集團人事科陳頌明科長、技質部吳義忠科長等領導，南方醫科大學博士后管理處鐘軍、許兆峰等老師在工作和生活上的諸多指導、關心和幫助。工作中得到廣州漢方現代中藥研究開發各位同事的熱情幫助和極大支持，在此深表謝忱。最后，我還要向我的妻子王纓、女兒蔣天美表示衷心的感謝，是她們在生活和工作中給予了我無私的奉獻和支持。 論大學生寫作能力 寫作能力是對自己所積累的信息進行

27、選擇、提取、加工、改造并將之形成為書面文字的能力。積累是寫作的基礎，積累越厚實，寫作就越有基礎，文章就能根深葉茂開奇葩。沒有積累，胸無點墨，怎么也不會寫出作文來的。寫作能力是每個大學生必須具備的能力。從目前高校整體情況上看，大學生的寫作能力較為欠缺。一、大學生應用文寫作能力的定義那么，大學生的寫作能力究竟是指什么呢？葉圣陶先生曾經說過，“大學畢業生不一定能寫小說詩歌，但是一定要寫工作和生活中實用的文章，而且非寫得既通順又扎實不可。” 對于大學生的寫作能力應包含什么，可能有多種理解，但從葉圣陶先生的談話中，我認為：大學生寫作能力應包括應用寫作能力和文學寫作能力，而前者是必須的，后者是“不一定”要

28、具備，能具備則更好。眾所周知，對于大學生來說，是要寫畢業論文的，我認為寫作論文的能力可以包含在應用寫作能力之中。大學生寫作能力的體現，也往往是在撰寫畢業論文中集中體現出來的。本科畢業論文無論是對于學生個人還是對于院系和學校來說，都是十分重要的。如何提高本科畢業論文的質量和水平，就成為教育行政部門和高校都很重視的一個重要課題。如何提高大學生的寫作能力的問題必須得到社會的廣泛關注，并且提出對策去實施解決。二、造成大學生應用文寫作困境的原因： （一）大學寫作課開設結構不合理。 就目前中國多數高校的學科設置來看，除了中文專業會系統開設寫作的系列課程外，其他專業的學生都只開設了普及性的大學語文課。學生寫

29、作能力的提高是一項艱巨復雜的任務，而我們的課程設置僅把這一任務交給了大學語文教師，可大學語文教師既要在有限課時時間內普及相關經典名著知識，又要適度提高學生的鑒賞能力，且要教會學生寫作規律并提高寫作能力，任務之重實難完成。 （二）對實用寫作的普遍性不重視。 “大學語文”教育已經被嚴重地“邊緣化”。目前對中國語文的態度淡漠，而是呈現出全民學英語的大好勢頭。中小學如此，大學更是如此。對我們的母語中國語文，在大學反而被漠視，沒有相關的課程的設置，沒有系統的學習實踐訓練。這其實是國人的一種偏見。應用寫作有它自身的規律和方法。一個人學問很大，會寫小說、詩歌、戲劇等，但如果不曉得應用文寫作的特點和方法，他就

30、寫不好應用文。 （三）部分大學生學習態度不端正。 很多非中文專業的大學生對寫作的學習和訓練都只是集中在大學語文這一門課上，大部分學生只愿意被動地接受大學語文老師所講授的文學經典故事，而對于需要學生動手動腦去寫的作文，卻是盡可能應付差事，這樣勢必不能讓大學生的寫作水平有所提高。 （四）教師的實踐性教學不強。 學生寫作能力的提高是一項艱巨復雜的任務，但在教學中有不少教師過多注重理論知識，實踐性教學環節卻往往被忽視。理論講了一大堆，但是實踐卻幾乎沒有，訓練也少得可憐。閱讀與寫作都需要很強的實踐操作，學習理論固然必不可少，但是閱讀方法和寫作技巧的掌握才是最重要的。 由于以上的原因，我們的大學生的寫作水平著實令人堪憂，那么如何走出這一困境，筆者提出一些建議，希望能對大學生寫作水平的提高有所幫助。 三、提高大學生應用寫作能力的對策 （一）把應用寫作課設置為大學生的必修課。 在中國的每一所大學，應用寫作應該成為大學生的必修課。因為在這個