1、劉 強南京農業大學 動物科技學院匯報內容匯報內容飼料中霉菌及其毒素的種類霉菌感染飼料的途徑及其生存條件我國飼料的霉菌及其毒素污染狀況 霉菌及其毒素對動物的毒害 霉菌毒素檢測中應注意的事項我國飼料中的主要霉菌我國飼料中的主要霉菌曲霉(Aspergillus)： 黃曲霉(A. flavus)、寄生曲霉(A. parasiticus)、赭曲霉(A. ochraceus)等；青霉(Penicillus)： 疣孢青霉(P. verrucosum)、展青霉(P. patulum)等；鐮孢菌(Fusarium)： 大刀鐮孢菌(F. culmorum)、輪生體鐮孢菌(F. verticillioides, S

2、acc.)、增生鐮孢菌(F. proliferatum, Matsushima)、禾谷鐮孢菌(F. graminearum)、擬枝鐮孢菌(F. sporotrichioides)等。主要霉菌毒素主要霉菌毒素v曲霉毒素： 黃曲霉毒素(Aflatoxins, AFs)、赭曲霉毒素(Ochratoxins, OTA)；v鐮孢菌毒素： 單 端 孢 霉 烯 族 ： T - 2 、 嘔 吐 素 / 脫 氧 瓜 萎 鐮 菌 醇(deoxynivalenol, DON)、雪腐鐮刀菌烯醇(nivalenol, NIV) 、蛇形菌素(diacetoxyscirpenol, DAS)； 煙曲霉毒素 (Fumonis

3、ins, FUMs)； 玉米赤霉烯酮(Zearalenone, ZEN) v麥角毒素： 麥角堿(Ergot alkaloids)。飼料中霉菌的飼料中霉菌的來來源源v田間感染：- 植物的病原菌，如鐮刀菌、甘薯黑斑病菌和麥角菌等；- 自然環境中感染的非病原菌，曲霉和青霉等；- 干旱、陰雨、霜凍和蟲害增加感染幾率。v倉儲滋生：- 儲存過發霉飼料的倉庫或器具；- 倉儲條件控制不好可引起霉菌大量滋生。v飼料加工過程中的污染： 機械死角未及時清除，霉變； 一種原料霉變可引起整批產品污染。霉菌的田間和倉儲感染霉菌的田間和倉儲感染霉菌生長的生長與產毒霉菌生長的生長與產毒v霉菌生長需要的條件： 水分水分水分活力

4、Aw =0.800.85； 溫度鐮刀菌2025；曲霉和青霉3035，煙曲霉40； 底物黃曲霉玉米和花生餅粕；鐮刀菌麥類；青霉稻谷。 氧氣大多數霉菌為耗氧菌； 酸堿環境中性偏堿。v產毒 生長受到“脅迫”時！霉菌生長需要的最低水分含量霉菌生長需要的最低水分含量菌種玉米/小麥/高粱/稻谷大豆花生/向日葵籽/干椰肉Aspergillus candidus15.015.514.515.010.011.0A. flavus18.018.517.017.511.012.0A. glaucus14.014.512.513.08.09.0A. halophilicus13.514.512.012.59.010.

5、0A. orchracecus15.015.514.515.010.011.0A. restrictus13.514.512.012.59.010.0Penicillium spp.16.519.016.018.511.013.0Wallemia sebi13.514.512.012.59.010.0水分活力與飼料含水量的關系水分活力與飼料含水量的關系并非正比并非正比例關系！例關系！含水量相含水量相同，同，Aw不等！不等！提示一提示一v全價配合料的水分含量是所有原料的加權平均值，不同原料的含水量并不相同，有可能形成適宜微生物生長的局部環境局部環境(Hot Spots)我國各地飼料的帶菌數及種類

6、我國各地飼料的帶菌數及種類注：飼料產品341份，飼料原料286份，樣品來自全國28省、區、市104個飼料廠或養殖場。陳必芳 等，1996，中國飼料飼料霉菌毒素污染程度飼料霉菌毒素污染程度檢出率/超標率FUMsDONZENT-2OTAAFLs玉米100%40.45%100%64.78%74.07%52.34%92.59%21.62%81.48%0%100%14.25%小麥96.36%3.42%93.39%50.48%87.37%25.52%87.52%53.97%81.39%0%100%0%玉米蛋白粉100%81.59%100%82.32%90.26%72.18%91.54%63.49%100%

7、0%100%0%麥麩97.16%5.46%94.49%58.56%88.49%30.45%90.10%54.09%84.57%0%100%0%餅粕類92.38%0%100%65.39%89.87%0%86.29%76.48%100%0%100%0%魚粉100%8.49%95.18%37.47%91.38%0%91.67%91.67100%0%100%0%農業部飼料質量監督檢驗測試中心 ( N=133, 2006)： 飼料工業2007 年第28 卷第13期飼料霉菌毒素污染程度飼料霉菌毒素污染程度歐洲進口商品分地區統計20032005g/kg中歐東南亞東北亞MeanMax%MeanMax%Mean

8、Max%DON5718020661621525149251899171T-21908292431349412573991ZEN2731392461814587244941037447FUM5805802833048663410111471449AFB14731133834748354573OTA23153028331439138224N=100320403420Binder E.M. et al, 2007, Worldwide occurrence of mycotoxins in commodities, feeds and feed ingredients. Ani. Feed Sci.

9、 and Tech. 137, 265282飼料霉菌毒素污染程度飼料霉菌毒素污染程度歐洲進口商品分品種統計20032005(東北亞)g/kgZENDONAFB1FUM玉米N=312128646841%11041062670%6045717小麥N=9877148924%3081899181%玉米蛋白粉N=37272315892%494442321%224510%619374065%大豆N=12257107817%26413477%1543317%Binder E.M. et al, 2007, Worldwide occurrence of mycotoxins in

10、commodities, feeds and feed ingredients. Ani. Feed Sci. and Tech. 137, 265282提示二提示二v配合飼料由多種原料混合而成，形成交叉污染；v我國的農產品生產規模小、田間管理變化大、儲藏條件普遍較差、質量參差不齊；v我國配合飼料中糧食加工副產物用量較高，質量變異度大；v上述因素均增加了配合飼料被霉菌污染的幾率我國飼料原料霉菌及其毒素污染非常普遍！飼料霉飼料霉變變的的危害危害v消耗飼料養分；霉變產熱加速養分破壞；降低養分的利用率；v產生不良氣味，影響飼料適口性；部分毒素刺激消化道黏膜，使動物采食量降低或拒食；v干擾動物正常的生

11、殖機能；v產生毒素死亡率升高；降低生產性能；致癌、致畸和致突變；動物抗病力下降。v畜產品中沉積影響人類健康。霉菌毒素的急性毒性霉菌毒素的急性毒性v半數致死劑量(LD50 mg/kg BW，經口)： AFB1：雛鴨 0.240.56；1228 ug/只；相當于飼料中 0.41.0 mg/kg；豬 0.62；雞 6.6； OTA：豬 6.0；雞 3.4； T-2：雞 2.0；豬 1.2 (肌注)； DON：小鼠 70 (腹腔注射)； ZEN：老鼠、大鼠和豚鼠 2.020.0； 麥角毒素：飼料中總量20 mg/kg 豬即中毒死亡。vAFB1的毒性是砒霜的68倍，氰化鉀的10倍！AFLs的毒理與的毒理

12、與慢性毒性慢性毒性v毒理： 經細胞色素P450活化后與DNA中鳥嘌呤N7結合，引起基因突變(p53, GT)、染色體斷裂，產生致癌、致畸性和免疫毒性。v毒性癥狀： 肝臟毒性，肝炎、黃疸、肝臟充血、出血、腫大、變性和壞死等； 胸腺萎縮、嗜中性粒細胞趨化能力和巨噬細胞吞噬能力下降，抑制遲發型超敏反應，抗體反應減弱等免疫抑制能力； 通過胎盤，導致胎兒初生重下降、畸形、肝臟和消化道等產生惡性腫瘤。 家畜中豬最敏感，雞和牛次之。鐮胞菌毒素的毒理與鐮胞菌毒素的毒理與慢性毒性慢性毒性v毒理： 抑制DNA、RNA和蛋白質合成，與核糖體60S亞基結合，引起細胞增殖速度下降，加速凋亡，消化道上皮組織壞死，免疫抑制

13、。v毒性表現： 食欲減退、腹瀉、嘔吐；皮膚過敏、發炎、結痂； LOAEL(豬mg/kg BW/d): DON0.050.1; NIV0.7; T-2 0.03； 豬最敏感(致嘔吐ED50 mg/kg BW)：北京仔鴨27，肉仔雞27，仔豬0.05，生長豬0.085； 斷奶仔豬4ppm25%拒食；1020ppm完全拒食；20ppm引起嘔吐(Eriksen & Pettersson, 2004)。ZEN的毒理與的毒理與慢性毒性慢性毒性v毒理： 與雌激素受體不可逆結合，引起哺乳動物生殖激素分泌失調，繁殖周期紊亂； 抑制免疫淋巴細胞增殖、分化，IL-2和IL-5升高； 豬最敏感，牛羊次之(5p

14、pm) ，禽的耐受力最高( 80 mg/kg 才見Sa/So升高。 肝、腎和體液游離二氫鞘氨醇(sphinganine)-鞘氨醇(sphingosine)比例(Sa/So)升高； 豬飼料FB11 mg/kg淋巴管和胸膜結締組織增生；5 mg/kg Sa/So升高；10 mg/kg消化系統、肝、肺、心血管和免疫系統受損；15 mg/kg豬肺水腫綜合征(porcine pulmonary edema PPE)； 飼喂含毒飼料37天后，表現呼吸困難，蒼白虛弱，直至死亡，尸檢可見肺小葉間隔或肺泡內水腫，胸膜和胸腔內嚴重積水，但無明顯的炎癥。 提示三提示三v飼料霉變不但影響飼料的營養價值，產生的毒素具有

15、強烈的急性毒性和廣泛的慢性毒性，包括致癌、致畸、免疫抑制、神經毒性與生殖毒性等。v長期低劑量毒素導致的動物亞健康狀態常被忽視！我國飼料中霉菌及其毒素限量我國飼料中霉菌及其毒素限量v霉菌數量：GB 13078-2001 410萬個/克限用，10萬個/克禁用。vAFB1：GB 13078-2001 大豬和蛋雞料20 mg/kg，仔豬和肉雞料10 mg/kg，豆粕30 mg/kg，玉米和花生粕50 mg/kg。vZEN： GB 13078.2-2006 配合料和玉米 500 ug/kg；vOTA： GB 13078.2-2006 配合料和玉米 100 ug/kg；vDON： GB 13078.3-2

16、007 豬配合料 1.0 mg/kg，禽配合料 5.0 mg/kg；vT-2： GB 21693-2008 豬禽配合料 1.0 mg/kg。飼料霉菌毒素含量檢測的特殊性飼料霉菌毒素含量檢測的特殊性v原料批量大 vs 毒素含量少；v毒素分布不均勻，破口處、淋雨/受潮處、堆積不通風處；v來源復雜，來自眾多農戶，品種和產地不明確；v原始基質中干擾因素多(蛋白質、脂肪、色素、酚酸等)；v分析方法繁瑣、儀器和操作要求高。霉菌毒素分析的一般程序霉菌毒素分析的一般程序v取樣： 獲得代表性樣品，關鍵步驟，結果變異的最主要來源！ 等幾率、多次抽樣初級樣品(1020 kg)混合、分樣送檢樣品(45 kg) 粉碎、混合、分樣分析樣品(400500 g)v提取：不同極性的溶劑組合；v純化與濃縮： 液-液萃取、SPE、免疫親和層析等；v定量：TLC, HPLC, LC-MS,