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文檔簡介

1、植物細胞的大規模培養植物細胞大規模培養方法懸浮培養固體化培養懸浮培養 是一種使組織培養物分離成單細胞接種于液體培養基中,在保持良好的分散狀態下培養并不斷擴增的方法。在進行細胞培養時,需要提供容易破裂的愈傷組織進行液體振蕩培養,愈傷組織經過懸浮培養可以產生比較純一的單細胞,而緊密不易碎的愈傷組織就不能達到上述目的。懸浮培養懸浮培養優點:增加培養細胞與培養液的接觸面積,改善營養供應避免細胞代謝產生的有害物質在局部積累而對細胞自身產生毒害保證氧氣的充分供應等。懸浮細胞培養的類型有:成批培養:只有一定的氣體交換,營養物質耗盡,細胞和產物一次性收獲。連續培養:新鮮培養液連續添加,用過的培養液平衡排出,營

2、養物質不斷補充,細胞保持在增值最快的對數生長期封閉式:回收流出的細胞于培養系統中,細胞數目增加開放式:流出的細胞不回收于培養系統中,但進行細胞收獲半連續培養:新鮮培養液每隔一段時間添加,用過的培養液平衡排出,營養物質不斷補充細胞培養同步化:1 1、物理法 1)體積分選 2)冷處理法2 2、化學法 1)饑餓法 2)抑制法影響懸浮細胞生長的因素: 起始愈傷組織的質量 接種細胞密度 培養條件:方式、溫度 繼代周期細胞生長情況分析測定方法:1 1、細胞計數:單位體積細胞濃度;2 2、細胞體積:培養物離心后測定細胞層所占的體積;3 3、細胞鮮重或干重:過濾或干燥后稱重4 4、有絲分裂指數:有絲分裂細胞占

3、總細胞的百分數細胞活力測定1 1、相差顯微鏡觀察法 細胞質環流,正常細胞核2 2、FDAFDA(熒光素雙乙酸酯)染色法 由于熒光素不能自由的穿越細胞質膜,而能在活細胞中積累,但死細胞、破損細胞不能積累。3 3、伊凡藍染色法 不被染色的為活細胞固定化培養:將游離的細胞包埋在多糖或多聚化合物制備成的網狀支持物中,培養液呈流動狀態,進行無菌培養的一種技術。特點:細胞固定,而培養液循環流動細胞固定化意義(優點):1 1)細胞生長較慢,有利于次生代謝物的積累。2 2)易控制化學環境、收獲次生代謝產物。3 3)細胞經包埋后受剪切力損傷小。4 4)有利于進行連續培養和生物轉化。植物細胞培養的應用植物細胞含有人類所需的成分,包括初生代謝物(蛋白質、碳水化合物、脂肪等)和次生代謝物(多酚類、香精油、生物堿、樹脂等),傳統提取分離這些物質由于資源短缺和需求量的加大,難以滿足需求,通過細胞培養生產植物產品成為解決的有效途徑。 植物細胞固定化的技術按其支持物

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