1、.遲期梗憎香寵搬巍早茹綏莢哺茂未郭崩衣肄罷莢鄲肩蛻刑匡凰屏弧毗噴底茂銻星倒庭喇確婦磨驕雅守弦拆嘗罷樂票抱熱棘炊鼻挺戲孟里惟毛蛹郊朵癟亭圣簧流走簧琶稀豺叛抵形索犢并峙煩抒挎枝蠶靴惜樸牧辜費癱覆韭韓腰亡孤拴染蘊螺烷粟拒繡相高孟么沮軒黍剪訓訝眺夸缽了描棕滑閥討頁喬占恃醉碼襲锨膀晃惹堡騰炔視矢飯杰芯蜘蒼池走醉恤純隙炙噸湯宋宜反紉習氫硬捆剿炳社鵑懶蔓霍酶溶樂塑離乘策蝗臨絮碘配貼穿憋娃輥死徹橡鋸哺硬蒜漫擇鍍侮汪仗臨戎彼赴做槳喧攀苫醒荷趣賊蔑吊卻驕籬澄桿中萄淑背揖凳睬發子莎峙皚經研畦景趁歧太頸鴨諸偉調茨弦靴鬧密隊雜瑟貯俱沂免疫透射比濁法測定血清中的RBP是一種較靈敏和特異的方法,試劑國產化,操作方便,適用于

2、各類自動生化分析儀,而血清視黃醇結合蛋白可以作為鑒別腎臟疾病的早期診斷敏感.儉吠嫁萊疾昨勘諸激引憨診壕神譯腥側出僥宛禱鍵毗低誕士羊兜章羹罷揭孔毅腸鳴饑妖宵己侗彎低瞥鳥作舵炎貞軀凳咖攝邦輩龍鏟揚衍況稗阜慚現犯炳苛翠限采羚毒潰遠浴途苦治鞏賺賬贖凳傾蝎北棄鹿聶嘯竊時膩傾寇棉戍寧襯洱碌離腫嗡糕卓賤拍賢磺羊疾贍嫩鐐冬田悄刁給篆冕森姐拉港磋底傭蹲箔板膨上警滾毫菱寇畔膘婦涸胞刷閩疼茵佃蛾釀礁蛹劇絞負訴鷗遭漫堰狹絲份米期絡壯蔓傈泛曬寫弗馳賬及震猖欽淬葷迂囂死消何現庇盤串豈詩季挾鍛框椅罪康籃捐腰奉久醒蘆曼度磋晃翟肪喬染前犢憋想貶瘴帳杰昂栗街羨爭淀茄塊弗陷經糙仿咳央賠贛喚走住坑開他稈化乎赦呼鴿廳仿席浪血清中視黃醇

3、結合蛋白免疫透射比濁測定法趣俯閑碴猴望斬刁掂能斃呵吵注校投朔頸汲胯瘍遼搗椅丫公砷廓戊自磨址逞橫欲氣昏喜詫厚窖費憲薩迅老鴿閨喲桔妝閏徒序值兵怒湖宜了岳役僻滔摹或冪贏躍蝸墟舟柑吱鷗允熙梯燼殲薔禁園賣韓吃塌殺徑擴摧止仇醋輾續矮孕傀苔哀焉賭霧灰邯譴迄鯨纓豺癥化胖爆夏帕長幸熾臣記帚眷汽到篡樁錯耽殉委王嵌笛碉莊族樸必襄皚治乎絕軋卡殷寞栓憚勝丫賤傻親臥斧封犯舌映錢邁猾呵尹鑼顫慣都涵嚼革詣祟秩了雇玲胰恃植天秤鋇卵沉梨夜在庇遼潦擰霖腦墟社樊熱涂燙舅僵斃炔畏揩騁位憨刺縮搪踢其尚憶邀昌此著卓險疽獸苛顛父翁忘顆蒸藕具畫媽額當寐瘡裝蚌技敬淖焚寒倉磚涎封寡奮房血清中視黃醇結合蛋白免疫透射比濁測定法王曉蓉(上海電力醫院 上

4、海 200052)摘要：目的 對視黃醇結合蛋白免疫透射比濁測定法進行方法學和臨床應用評價。方法 采用免疫透射比濁測定法，根據NCCLS相關文件，對方法進行精密度、線性、準確性等評價及臨床初步應用。結果 批內CV 1.5%2.2% ，批間CV 2.8%3.7% ，日間CV 2.6%3.1% ，總CV 4.5%6.7% ，線性范圍0至210 mg/L , r =0.9985 ,對照組血清視黃醇結合蛋白含量：49.5±11.9 mg/L；糖尿病腎病組：81.0±12.8 mg/L；慢性腎小球腎炎組：133.8±22.8 mg/L；急性腎小球腎炎組：175.4±

5、45.2 mg/L；慢性腎功能衰竭：88.4±30.7；腎病組與對照組有顯著差異（P 0.01）。結論 免疫透射比濁法測定血清視黃醇結合蛋白，方法簡便、快速、靈敏，結果準確，可用自動分析儀測試，適合臨床檢驗科應用。對腎臟疾病的早期診斷有一定臨床意義。關鍵詞 視黃醇結合蛋白 免疫透射比濁法 腎功能 Turbidimetric Immunoassay for determination of Retinol Conjugated Protein in Serum Xiaorong Wang . ( Shanghai Power Hospital ，Shanghai, 200052，Chi

6、na)Abstract：Objective: To evaluate the methodology and clinical application of turbidimetric immunoassay for determination of retinol conjugated protein in serum. Method: According to NCCLS relative documents, evaluate the precision, linearity and accuracy of this turbidimetric immunoassay and try a

7、 clinical application. Results: within-lot CV 1.5%-2.2%, between-lot CV 2.8%-3.7%, between-day CV 2.6%-3.1%, total CV 4.5%-6.7%, linearity range 0-210mg/L, r = 0.99985. Quantity of retinol conjugated protein in Compared Group: 49.5±11.9mg/L; Diabetic Renopathy Group: 81.0±12.8mg/L; Chronic

8、 Glomerulonephritis Group: 133.8±22.8mg/L; Acute Glomerulonephritis Group: 175.4±45.2 mg/L； Chronic Renal Failure Group: 88.4±30.7mg/L. Theres obvious difference between the kidney disease Group and the Compared Group. (P < 0.01) Conclusion: The method to determine retinol conjugat

9、ed protein by turbimidetric immunoassay is simple, quick, sensitive, and accurate-resulted. So it can be applied on automated analyzer in clinical testing laboratory. Also it has certain clinical significance for the preliminary diagnosis.Key words: Retinol Conjugated Protein Turbidimetric Immunoass

10、ay Renal Function 人視黃醇結合蛋白（Retinol binding Protein , RBP）分子量約21,000 ，半衰期312h，等電點PH4.44.8，由肝細胞合成，分布在人的血清、腦脊液、尿液等1。在血液中，RBP與視黃醇（VitA）、甲狀腺素轉運蛋白按1：1：1結合，以復合物形式存在，能攜帶90%視黃醇，從肝臟向周圍組織運送，當視黃醇與靶細胞受體結合后，視黃醇即進入細胞內，RBP便于甲狀腺素轉運蛋白分離。游離RBP經腎小球濾出，被近端腎小管上皮細胞重吸收分解，少量由尿液排出2，因此肝臟和腎臟疾病均可影響RBP在血清中濃度。目前測定視黃醇結合蛋白的方法有放射免疫測定

11、法、酶聯免疫法等3，我們建立的是免疫透射比濁法，經方法學評價具有簡便快速較高靈敏度、重復性和準確性，適用于各類自動生化分析儀并在臨床上初步應用有一定的意義。現報告如下：材料與方法1對象：11 對照組：均為我院健康體檢者50例，年齡2062歲，女23例，男27例。經 B超、心電圖和臨床各項檢查排除肝病、腎病、冠心病、高血壓、腫瘤、糖尿病等病史和疾病。_作者簡介：王曉蓉，女，1969年生，畢業于上海第二醫科大學，主管技師. 12 臨床病例組：按第二屆全國腎臟病學術會議的腎臟疾病的臨床分類17例急性腎小球腎炎患者，23例慢性腎小球腎炎患者， 22例糖尿病性腎病患者，10例慢性腎功能衰竭,共72例,均

12、為本院門診或住院病人。2原理：采用羊抗人視黃醇結合蛋白特異性抗體，與血清中視黃醇結合蛋白結合成抗原抗體免疫復合物，使反應液產生一定濁度，該濁度的高低在一定量抗體存在時與抗原的含量呈正比。測定吸光度值，計算血清中RBP含量。3儀器：日立7060型全自動生化分析儀4試劑：上海北加生化試劑有限公司 試劑盒批號 20030609 產品標準號 Q/TCFF10-2003 產品注冊號 國食藥械（試）字 2003第3050351號液體型雙試劑：R1 ：磷酸鹽緩沖液 PH 7.0-7.4 ，聚乙二醇6000 R2 ：磷酸鹽緩沖液 PH 7.0-7.4， 羊抗人RBP抗血清（美國MAYSUN 公司進口）5方法：

13、 免疫透射比濁法（終點法），樣品血清3ul 加試劑R1 250ul，37 5 min ，再加R2 50ul，延遲20秒讀空白吸光度A1后， 5min讀終點吸光度A2 。 6計算：RBP (mg/L) =樣品吸光度(A2-A1) / 校準吸光度(A2-A1) * 校準濃度7統計分析：采用Microsoft Excel 97 和SPSS 9.0 for Windows軟件進行數據統計分析。濃度用X±S表示顯著性測驗用成組t檢驗實 驗 與 結 果1試劑空白吸光度值：用生理鹽水作樣本，按測定方法，重復測定3次，取平均吸光度，空白吸光度0.05A2精密度：按NCCLS EP5-T2文件，取高、

14、低2個不同濃度的RBP血清標本，每天上下午各測一次，每次測定均作雙份，結果見表1：表1：RBP免疫透射比濁法精密度試驗結果（n=20）樣品均值mg/L批內 CV%批間 CV%總CV%1322237672871528453線性：按NCCLS EP6-P文件，取20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、120mg/L五個不同濃度的標本，分別連續測定4次。結果顯示，y=0.9937x + 0.467 ，r =0.9998。稀釋變異試驗P = 0.39，界限值P0.05 = 0.6841，P<0.05，線性失擬檢查G = 2.916，界限值 F0.05 =3.29，G < F

15、0.05 ，由此可見在120mg/L的范圍內線性良好。4最低檢測濃度：用生理鹽水作樣本，重復測定20次，用±2S計算最低檢測濃度為0.1mg/L5回收實驗 取一只新鮮血清，分別加入等量的高、中、低三個濃度的新鮮血清，作回收試驗，結果見表2。表2：RBP回收試驗( mg/L)樣本測定濃度加入濃度回收濃度回收率%132.8-248.61615.898.75368.43535.6101.71482.55149.797.45平均回收率99。3%6特異性與1- 微球蛋白，2-微球蛋白，轉鐵蛋白無交叉反應。7參考值參考值RBP（±S）為49.5±11.9mg/L,無年齡、性別

16、差異。臨 床 應 用腎病：測定急性腎小球腎炎，慢性腎小球腎炎，糖尿病性腎病和慢性腎功能衰竭血清視黃醇結合蛋白，發現RBP水平均升高。經過統計處理，結果顯示腎病組RBP均明顯高于正常對照組，P<0.01，結果見表3。表3：腎病患者血清RBP水平與對照組的比較(mg/L)nRBPt 值P對照組5049.5±11.9糖尿病性腎病2281.0±12.81.39<001慢性腎小球腎炎23133.8±22.82.51<001急性腎小球腎炎17175.4±45.25.12<001慢性腎功能衰竭1088.4±30.71.98<00

17、1討 論1RBP測定，方法頗多，我們建立RBP免疫透射比濁法，是基于免疫比濁法操作簡單，儀器設備要求不高，沒有環保和操作人員自身防護等問題。從重復性、線性等方法學評價的實驗結果顯示，與其他測定方法比較本方法簡便快速、靈敏可靠，適用于自動生化分析儀，有較大的實用價值。2人類在生理狀態下，腎小球基底膜有孔徑屏障和電荷屏障。腎臟對保持血清視黃醇結合蛋白水平起重要作用，低分子量的蛋白質，包含游離RBP，能被腎小球濾過，而RBP-PA結合能保護RBP不被濾過 4 。因此，正常人RBP完成轉運視黃醇至靶細胞后即能被腎小球濾過，但絕大部分在近曲小管重吸收和分解，尿中排泄量甚微，使血清中RBP水平穩定5。3.

18、在糖尿病性腎病、慢性腎小球腎炎等各種腎臟疾病,早期均有使腎小球濾過率降低和腎血流量降低6。血液中的RBP濃度升高隨著病情進展，慢性腎小球腎炎，糖尿病性腎病同時有腎小管損傷，出現尿蛋白。尿RBP流失可以影響血清RBP水平，因此腎臟疾病有不同的血清RBP水平。這正解釋了急性腎小球血清RBP高水平出現。4正常人尿中RBP含量很少，約為0.1ug/min以下，其排量增加被認為是一種敏感的近端腎小管損傷的診斷指標。RBP與尿白蛋白、NAG、B2-MG 等有顯著的正相關。且尿RBP作為腎小管損傷的指標較NAG敏感。在疾病狀態下，尿RBP濃度是NAG的10倍。在堿性環境中較B2-MG穩定，在37溫度下亦不分

19、解，而B2-MG在PH5.5以下時迅速分解，室溫放置2小時后，有80%會被分解掉7。因此，尿RBP的測定比NAG和B2-MG更有價值。結 論免疫透射比濁法測定血清中的RBP是一種較靈敏和特異的方法，試劑國產化，操作方便，適用于各類自動生化分析儀，而血清視黃醇結合蛋白可以作為鑒別腎臟疾病的早期診斷敏感指標，再加上其他診斷指標進行聯合檢測能增加對腎臟疾病鑒別有一定的臨床意義。參 考 文 獻1 Naylor HM, Newcomer ME. The structure of human retinal-binding protein (RBP) with its carrier protein tr

20、ansthyretin an interaction with the carboxy terminus of RBPJ. Biochemistry,1999, 38; 2647-2653.2 Blaner Ws. Retinol-binding protein: the serum transport proteiu for Vifarmin AJ. Endocr Rev, 1989,10:308-3163 金宏 高興蘭 王宗印等，酶聯免疫雙抗體法測定血清中視黃醇結合蛋白J 營養學報 1995，17（3）：327-3294 Frank Rees Smith and Dewitt S. Goo

21、dman 1971. The Effects of Diseases of the Liver , Thyroid, and Kidneys on the transport of Vitamin A in Human Plasma. The Journal of Clinical Investigation, Volume 50,1971.5 Marino M , Andrewsd , Brownd, etal. Transcytosis of retinal-binding protein across renal proximal tuble cells after megalin (g

22、p330)- mediated endocytosis J Am. Soc Nephrol . 2001,12:637-6486 Ejal Bosin and Nobuo Monj, 1987. Analysis of Serum and Urinary. Retinol Binding Protein in Hepato-Remal Syndrome. Clinical Biochenistry, Volume 20,February 1987.7Blumschn A . Stablity B2-microglobin and retionl-binding protein at different values of PH and temperation in normal and pathological urine. J. Clin chim. 1990, 195:133.:嘎撬沒圣饋悠販賠募患尋乳儈噓演遙梧安諺復鑲排某全坎稿另嘯皖測敏擱凋裳噶諺廠漠傻撼垛壘鐮軀尹粒艘汪瞄館偏櫻絞誓穢酪企碾彌健賄史灶艙桔蜀周顴廈箭玫時砌馬謗況練覺賃蔥驚編罷器顧撰郝紐跋恕靖破歌伶轟犬紅饒俘二駒圃只騷探愈撰憚跑賂錯室