1、專題22.2.2動物細胞融合與單克隆抗體目標導航1.掌握動物細胞融合的原理和方法。2.結合圖224，歸納單克隆抗體的制備過程及應用。1預習導學 挑戰自我，點點落實 2 課堂講義 重點難點，個個擊破3對點練習 即時訓練，體驗成功預習導學 挑戰自我，點點落實一、動物細胞融合(閱讀P5253)1概念：或 動物細胞結合形成的過程，也稱細胞雜交。2原理： 。3誘導融合的方法：(1)物理、化學方法：與植物體細胞雜交相同，如聚乙二醇、電激等。(2)生物方法： 。兩個多個一個細胞細胞膜的流動性滅活的病毒5 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體遺傳信息雜交5結果：形成 細胞。6意義：突破了 方法的局限，使 成為

2、可能。成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和 等的重要手段。如：利用 ，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。雜交有性雜交遠緣雜交生物新品種培育動物細胞融合技術6 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體二、單克隆抗體(閱讀P5254)1傳統抗體的獲得(1)方法：向動物體內反復注射某種，使動物產生抗體；從動物血清中分離所需。(2)缺陷：、純度低、?？贵w抗原產量低特異性差7 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體2單克隆抗體的制備(1)制備原理漿細胞特點：一種B淋巴細胞產生一種單一抗體，B淋巴細胞在體外 (能/不能)無限增殖。骨髓瘤細胞特點：能無限增殖。雜交瘤細胞特點：B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合得到雜交瘤細胞，既

3、能 ，又能產生特異性抗體。不能無限增殖8 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體(2)制備過程制備特異性 向小鼠注射特定從小鼠中獲取相應B淋巴細胞B淋巴細胞獲得雜交瘤細胞 將鼠的 與脾中形成的 融合用特定的選擇培養基篩選出，該雜種細胞既能 又能產生抗原蛋白脾臟骨髓瘤細胞B淋巴細胞雜交瘤細胞迅速大量繁殖專一的抗體9 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體克隆化培養和抗體檢測將雜交瘤細胞在 培養或注射到小鼠中增殖提取單克隆抗體：從細胞培養液或小鼠的腹水中提取(3)單克隆抗體優點：、并可大量制備。(4)單克隆抗體的應用作為診斷試劑，具有準確、 、簡易、 的優點。用于治療疾病和 。體外腹腔特異性強、靈敏度

4、高高效快速運載藥物10 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體預習診斷判斷正誤：(1)動物細胞融合也稱細胞雜交，使遠緣雜交成為現實。()(2)動物細胞融合常用的誘導因素有聚乙二醇、滅活的病毒、電激等。()(3)動物細胞融合的主要用途是制備克隆動物。()(4)雜交瘤細胞是由經免疫的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合而成的，具有既能無限增殖又能產生特定抗體的能力。()11 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體(5)單克隆抗體最主要的優點是特異性強、靈敏度高，并能大量制備。()(6)單克隆抗體可以用于治療疾病。()(7)動物雜交瘤細胞產生單克隆抗體能體現細胞的全能性。()(8)動物細胞核融合發生在雜種細胞的有

5、絲分裂過程中。()一、動物細胞融合課堂講義 重點難點，個個擊破1對細胞膜融合過程的理解13 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體(1)細胞融合的過程包括細胞膜的融合、細胞質融合和細胞核融合，其中細胞膜的融合是細胞融合的先導，在細胞膜融合中體現出細胞膜具有流動性。(2)誘導融合的方法有滅活的病毒(最常見)、聚乙二醇(PEG)和電激等。14 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體2動物細胞融合與植物體細胞雜交的對比比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞的全能性細胞膜的流動性細胞融合方法用纖維素酶、果膠酶去除細胞壁后誘導原生質體融合用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細胞分散后，誘導細胞融合1

6、5 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體誘導手段離心、電激、振動、聚乙二醇等誘導與植物體細胞雜交相比，還可用滅活的病毒誘導結果形成雜種植株形成雜種細胞，以生產細胞產品用途克服遠緣雜交不親和的障礙，擴展雜交親本范圍，培育新品種制備單克隆抗體、病毒疫苗、干擾素等意義突破有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能16 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體1動物細胞融合與植物原生質體融合所用的誘導方法有何不同？答案動物細胞融合可用滅活的病毒進行誘導。2細胞融合技術與有性雜交相比有哪些優點？答案有性雜交有著十分嚴格的時空關系和物種界限。動物細胞融合則不同，它通過人工的方法克服了存在于物種之間的遺傳屏障，從而

7、能夠按照人們的意愿，把不同物種的不同組織類型的細胞融合在一起。思維激活17 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體3動物細胞融合和受精作用的區別有哪些呢？答案(1)受精作用是在同種生物之間進行的，精子與卵細胞的融合不需要任何誘導劑就能形成受精卵，受精卵內具備同種生物的兩個親本的遺傳物質。(2)動物細胞融合是在不同物種間進行的細胞融合，由于物種間存在生殖隔離，所以在自然條件下不能融合成雜交細胞，必須有誘導劑作用才能融合。形成的雜交細胞具備兩個親本細胞的遺傳物質，從而體現兩個親本的遺傳特性。18 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體4動物細胞融合完成的標志是什么？答案動物細胞融合完成的標志是來自不同

8、細胞的兩個或多個細胞核融合成一個細胞核。19 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體應用示例1與植物體細胞雜交相比，動物細胞融合的原理及其特有的誘導因素分別是()A細胞膜的流動性、離心B細胞膜的流動性、滅活的病毒C細胞的全能性、電刺激D細胞的全能性、滅活的病毒20 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體問題導析 (1)植物體細胞雜交的原理是、細胞的全能性，動物細胞融合的原理是。(2)動物細胞融合的常用誘導因素有聚乙二醇、 、電激等，其中 是其特有的誘導因素，而 、電激均可用于誘導植物體細胞雜交。答案B細胞膜的流動性細胞膜的流動性滅活的病毒滅活的病毒聚乙二醇21 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體

9、一題多變 判斷正誤：(1)動物細胞融合也稱細胞雜交，是指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程。()(2)動物細胞融合后形成的具有原來兩個或多個動物細胞遺傳信息的雙核或多核細胞稱為雜交細胞。()(3)常用的誘導動物細胞融合的因素有：聚乙二醇、滅活的病毒、電激、離心等。()(4)細胞融合技術突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。()22 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體二、單克隆抗體1單克隆抗體和常規抗體的比較項目分泌抗體的細胞特點生產單克隆抗體雜交瘤細胞特異性強、靈敏度高產量高，易純化分離常規抗體B淋巴細胞特異性差、靈敏度低產量低，分離困難23 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗

10、體2.單克隆抗體的制備及應用(1)原理：要獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細胞，形成細胞群；將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，其原因如下：每一個B淋巴細胞只能分泌一種特異性抗體；不同種類的B淋巴細胞分泌的抗體不同。B淋巴細胞在體外培養時不能無限增殖；骨髓瘤細胞能無限增殖。B淋巴細胞與骨髓瘤細胞的雜交細胞既能無限增殖，又能產生特異性抗體。24 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體(2)單克隆抗體的制備過程：25 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體(3)單克隆抗體的應用作為診斷試劑：能準確識別各種抗原物質的細微差異，并跟一定抗原發生特異性結合，具有準確、高效、簡易、快速的優點。用于治療疾病和

11、運載藥物單獨使用：直接用于癌癥或其他疾病的治療(作為藥物本身)。綜合使用：與放射性同位素、化學藥物或細胞毒素相結合，制成“生物導彈”，主要用于治療癌癥，也可少量用于其他疾病的治療。26 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體思維激活1仔細觀察教材P53圖224，探討下列問題：(1)制備單克隆抗體過程中的幾種細胞有何特點？答案免疫的B淋巴細胞：能產生單一抗體，但不能無限增殖。骨髓瘤細胞：能無限增殖，不能產生抗體。雜交瘤細胞：既能產生特定的抗體，又能在組織培養條件下進行無限增殖。27 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體(2)單克隆抗體制備過程中有兩次篩選，其目的分別是什么？答案第一次篩選是在B淋巴

12、細胞與骨髓瘤細胞融合之后，篩選出只有B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合的雜種細胞。第二次篩選需先在多孔培養皿上培養，在每個孔只有一個雜交瘤細胞的情況下開始培養，然后再篩選出能產生特異性抗體的細胞群。28 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體2用單克隆抗體及相關物質制成的“生物導彈”中真正起治療作用的物質是什么？是單克隆抗體嗎？答案“生物導彈”中真正發揮治療作用的物質是相關“藥物”，單克隆抗體所起的作用在于將藥物定向帶到靶細胞所在位置，借助其導向作用，在原位殺死癌細胞，這樣既不損傷正常細胞，又減少了用藥劑量。因此，“生物導彈”可作為一種療效高、毒副作用小的新型藥物。29 2.2.2 動物細胞融合與單克隆

13、抗體3若不采用動物細胞融合的方法，能否生產出單克隆抗體？試簡要說明。答案能?？蓮慕浢庖叩腂淋巴細胞中獲取決定所需抗體的基因(目的基因)，導入骨髓瘤細胞，然后培養骨髓瘤細胞并從培養液中提取分泌物，便可得到單克隆抗體。30 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體應用示例2單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞融合后，要用特定的培養基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養基上不能存活增殖的細胞是()B淋巴細胞小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞自身融合細胞小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞雜交瘤細胞A BC D31 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體問題導析 (1)單克隆抗體的制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞融合時，有三

14、種情況： 融合的細胞； 融合的細胞；細胞與單個B淋巴細胞融合的雜交瘤細胞。(2)在特定的培養基上只有瘤細胞才能存活增殖。答案A未發生自身骨髓瘤雜交32 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體一題多變 判斷正誤：(1)制備單克隆抗體所用的B淋巴細胞是經過免疫的B淋巴細胞。()(2)細胞融合之后需要一次篩選，方可獲得能產生單一抗體的雜交瘤細胞。()(3)利用單克隆抗體制成的“生物導彈”，其選擇性是由藥物決定的，與抗體無關。()33 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體課堂小結細胞膜的流動性單克隆抗體B淋巴雜交瘤診斷試劑34 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體對點練習 1下列關于動物細胞融合和植物體

15、細胞雜交的比較中，敘述正確的是()A誘導融合的方法完全相同B所用的技術手段完全相同C所采用的原理完全相同D都能形成雜種細胞35 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體解析兩種細胞工程技術都要進行細胞融合，但融合的方法不完全相同；誘導的方法，除動物細胞的融合常用滅活的病毒做誘導劑外，其他的兩者基本相同；兩者采用的原理不同，動物細胞融合的原理是細胞膜的流動性，最終形成的是雜種細胞。植物體細胞雜交的原理有細胞膜的流動性和細胞的全能性。故正確答案為D。答案D36 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體2單克隆抗體在醫療、診斷等方面發揮著越來越重要的作用。英國科學家米爾斯坦和科勒設計了一個用已免疫的B淋巴細

16、胞制備單克隆抗體的實驗，下圖為其實驗流程圖。則相關的敘述或說法中，不正確的是()37 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體Aa是骨髓瘤細胞，表示在選擇培養基上進行培養B制備單克隆抗體時，選擇B淋巴細胞的原因是它只能分泌多種特異性抗體C過程如在體外培養，則需要無菌、無毒，營養充足，溫度、pH適宜等環境條件D誘導動、植物細胞融合常用的一種化學誘導劑是聚乙二醇38 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體解析對于B淋巴細胞來說，每一種B淋巴細胞經特定抗原刺激只能產生一種特異性抗體。根據單克隆抗體制備的流程判斷：a是骨髓瘤細胞、b是雜交瘤細胞。是誘導B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合的過程。表示在選擇培養基上進行

17、培養、篩選能產生單一抗體的雜交瘤細胞。包括體外培養和注入小鼠腹腔內培養。選擇培養基只允許雜交瘤細胞生長、增殖，其他細胞不能生存。動物細胞培養需具備的條件是：無菌、無毒，營養充足，溫度適宜，pH適宜，充足的空氣。誘導細胞融合時常用聚乙二醇作誘導劑。答案B39 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體3下面為制備單克隆抗體過程示意圖，下列相關敘述錯誤的是() A中的篩選是為了獲得能產生多種抗體的雜交瘤細胞B中培養基應加入選擇性抑制骨髓瘤細胞DNA分子復制的物質C上圖中有一處明顯錯誤D可以無限增殖40 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體解析中的篩選是為了獲得能產生特定抗體的雜交瘤細胞；中培養基應加入選

18、擇性抑制骨髓瘤細胞DNA分子復制的物質，這樣才能篩選出雜交瘤細胞；圖中的小鼠沒有經過免疫處理，應該注射相應的抗原，小鼠才能形成相應的B淋巴細胞。答案A 41 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體4科學家從某些能無限增殖細胞的細胞質中分離出無限增殖調控基因(prG)，該基因能激發許多動物細胞的分裂，這為單克隆抗體的制備提供了更為廣闊的前景。請回答下面的問題：42 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體(1)利用細胞融合技術制備單克隆抗體，一般選用的是_和_融合。解析 制備單克隆抗體選用的融合細胞一般為骨髓瘤細胞(能無限增殖)與經過免疫的B淋巴細胞(能產生特異性抗體)。骨髓瘤細胞 經過免疫的B淋巴細胞(漿細胞)43 2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體(2)有人提出，可