1、佐劑：傳統講：當一種物質先于抗原或與抗原混合或同時注射于動物體內，能非特異性地改變或增強機體對該抗原的特異性免疫應答，發揮其輔佐作用者，都稱之為佐劑新概念：凡是可增強抗原特異性免疫應答的物質均稱為佐劑。保護劑：又稱穩定劑，指一類能防止生物活性物質在冷凍真空干燥時受到破壞的物質。保護劑是保護微生物和寄生蟲等活力和免疫力及酶和激素等生物活性的一類物質，還包括細菌或病毒的營養液、賦形劑和抗氧化劑。 聯苗：指利用不同微生物增殖培養物，按免疫學原理和方法組合而成。異源疫苗：用不同微生物的菌株制備的疫苗，接種動物后能使其獲得對疫苗并未含有的病原體產生抵抗力。用同一種中一種型微生物菌株制備的疫苗，接種動物后

2、能使其獲得對異型病原體的抵抗力。元代細胞：由新鮮組織經剪碎并用胰酶消化后制備的細胞。填空：診斷液可分為診斷抗原、診斷抗體兩類。GMP涉及的范圍十分廣泛，主要包括人員、廠房設備和原料、管理制度和要求三個方面。細菌的生長曲線可分為：延緩期、對數期、穩定期和衰亡期。病毒培養方法可分為：動物接種、細胞培養、雞胚培養。 根據微生物學控制程度將實驗動物分為四級：普通級動物、無菌級動物、SPF動物、清潔級動物。滅活的方法包括：物理學滅活和化學滅活。根據佐劑在體內存留的時間將佐劑分為：貯存型和非貯存型。凍干保護劑通常由三類物質組成：營養液、賦形劑、抗氧化劑。效力檢驗的內容包括：免疫原性、免疫持續期、抗原的熱穩

3、定性和抗原量的測定。口蹄疫疫苗主要包括兩大類：弱毒疫苗和滅活疫苗。豬丹毒活疫苗主要包括兩大類：滅活疫苗和活疫苗。判斷：1.錯 鋁膠佐劑即能誘導體液免疫，又能明顯的誘導細胞免疫。2.對 抗獨特型疫苗實際上是一種免疫蛋白。3.對 弗氏佐劑屬于油乳佐劑。4.對 抗病毒血清多用同種動物來制備。5.對 母原抗體對弱毒疫苗的免疫影響很大。6.錯 用青霉素治療炭疽是一種特異性治療方法。7.錯 弱毒苗和滅活苗可以混合使用。8.錯 生物制品中中的抗原量越多越好。9.錯 滅活苗一般在0以下保存。10.錯 豬瘟的超前免疫是指對懷孕母豬的免疫。簡答題：1活疫苗與死疫苗的優缺點比較活疫苗優點：可以在免疫動物體內繁殖，能

4、刺激機體產生全面的系統免疫反應和局部免疫反應；免疫力持久，有利于清除局部野毒；產量高，生產成本低。缺點：該類疫苗殘毒在自然界動物群體內持續傳遞后有毒力增強和返祖危險；有不同抗原的干擾現象；要求在低溫、冷暗的條件下運輸和儲存。死疫苗的優點：不能在免疫動物體內繁殖，比較安全，不發生全身性副作用，無毒力返祖現象；有利于多價或多聯等混合疫苗；制備穩定，受外界環境影響小，有利于保存和運輸。缺點：該類疫苗生產成本高，需多次免疫。而且一般只能誘導機體產生體液免疫和免疫記憶，故常需用佐劑或攜帶系統來增強其免疫效果。2簡述生物制品成品的安全檢驗a檢驗外源性污染b檢查殺菌、滅菌和脫毒情況c檢查殘余毒力或毒性物質d

5、檢查對胚胎的毒性。3簡述抗病毒免疫血清的制備抗病毒免疫血清的制備：以病毒為免疫原，須通過反復凍融或超聲裂解法，將病毒從細胞中釋放出來，并盡可能地提高病毒滴度或和疫原性。如抗豬瘟血清，基礎免疫的抗原，可用豬瘟兔化弱毒疫苗；高度免疫抗原，則用豬瘟血毒或臟淋毒乳劑等強毒。豬接種豬瘟強毒發病后5-7d，當出現體溫升高及典型豬瘟癥狀時，由動脈放血，收集全部血液，經無菌檢驗合格后即可作為抗原使用。4簡述雞胚絨毛尿囊膜的接種方法選用孵化1012日齡的雞胚，劃出氣室及絨毛尿囊膜的發育面，在絨毛尿囊膜處蛋殼上用碘酊及酒精消毒后，銼一個三角形裂痕，除去蛋殼照成蛋窗。另在氣室中心鉆小孔，將蛋橫臥于蛋盤上，在殼膜上滴

6、無菌鹽水一滴，以針尖將蛋殼膜劃破一小孔，然后用洗耳球置于氣室端的小孔處往外吸氣，使鹽水滲入殼膜與絨毛尿囊膜的裂隙內，使之與殼膜完全分離，而形成人工氣室。然后注射0.05毫升病毒液與絨毛尿囊膜表面，再用石蠟密封，同時封閉氣室端小孔。橫臥3537培養。論述題雞新城疫1系弱毒疫苗的制造程序1 種毒繁殖：將毒種用滅菌生理鹽水作適當稀釋(如10-4或10-5)，尿囊內接種10日齡SPF雞胚，每胚0.1ml。選接種后72120小時之間死亡且病痕明顯的雞胚，分別收獲雞胚液(尿囊液及羊水)，裝于滅菌容器內，定量分裝于安領瓶中，冷凍保存。2 接種：取生產用毒種，用滅菌生理鹽水作適當稀釋(如10-4或10-5)，

7、每胚尿囊內接種0.1ml。接種后密封針孔。置3637孵育。3 收獲：取出96120h死亡雞胚和120h活雞胚，冷卻424h，以無菌手術吸出雞胚液并混合分裝到滅菌瓶中。4制苗：油相制備及水相制備。乳化：水相與油相比例為1：3加入混合。5分裝：定量分裝，加蓋密封，成品。6疫苗質量的鑒定：物理性狀、無菌檢驗、安全檢驗、效力檢驗等獸醫生物制品學：是以預防獸醫學和生物工程學理論為基礎，研究動物傳染病和寄生蟲病的免疫預防、診斷和治療用生物行制品的制造理論和技術、生產工藝、制品質量檢驗與控制及保藏和使用方法，以增強動物機體特異性和非特異性免疫力，及時準確診斷動物疫病，并給予特異性治療，防止疫病傳播的綜合性應

8、用學科。獸醫生物制品：是根據免疫學原理，利用微生物、寄生蟲及其代謝產物或免疫應答產物制備的一類物質，專供相應的疫病診斷、治療或預防之用。疫苗：凡接種動物后能產生自動免疫和預防疾病的一類生物制劑均稱為疫苗，包含細菌性疫苗、病毒性疫苗和寄生蟲性疫苗。獸醫生物制品學的應用：免疫預防；診斷；治療生物制品安性質分類：疫苗、類毒素、診斷制品、抗病血清、微生物制劑、副免疫制品。疫苗安抗原的性質和制備工藝分為：活疫苗、死疫苗、基因疫苗滅活：指破壞微生物的生物學活性、繁殖能力和致病性，但盡可能不影響其免疫原性。或指破壞診斷血清或待檢血清中的補體活性，以避免補體對診斷試驗的干擾作用。用于滅活微生物的化學試劑或藥物

9、。微生物致弱：是指通過各種方法使病原微生物的致病性降低或喪失，但其它生物學活性以及免疫原性并未發生本質性改變。滅活劑：用于滅活微生物的化學試劑或藥物滅活劑的種類：1.甲醛溶液2.常用烷化劑：3.苯酚：4.結晶紫甲基青蓮甲紫5.-丙酰內酯影響滅活作用的因素（1）滅活劑特異性（2）微生物種類與特性（3）滅活劑濃度（4）滅活劑溫度（5）滅活時間（滅活時間與滅活劑濃度和作用溫度密切相關）（6）酸堿度（在微酸性時滅活速度慢，抗原性保持較好；堿性時滅活速度快，擔抗原性易受破壞（7）有機物存在。疫苗凍干保護劑組成1. 營養液：可修復因凍干而受損的細胞，使凍干制品含有一定量水分；可促進高分子物質形成骨架，使凍

10、干制品呈多孔的海綿狀，增加溶解度2. 賦形劑：防止低分子物質的碳化和氧化，保護活性物質不受加熱影響使凍干制品形成多孔性、疏松的海綿狀物，增加溶解度。3. 抗氧化劑：抑制凍干制品中的酶作用，增加生物活性物質在凍干后貯存期間的穩定性，如維生素C、維生素E和硫代硫酸鈉等。 防止活性物質失去結構水及阻止結構水形成結晶而導致生物活性物質的損傷； 降低細胞內外的滲透壓差、防止細胞內結構水結晶，以保持細胞的活力； 保護或提供細胞復蘇所需的營養物質，有利于生活力的復蘇和迅速修復自身。 佐劑種類：1. 按佐劑物理性質：顆粒型佐劑、非顆粒型佐劑2. 按佐劑的生物學性質（即Ballanti分類法）：微生物及其組分、

11、非微生物物質3. 按佐劑在體內存留的時間：貯存型佐劑、非貯存型油乳佐劑：屬于一種儲存型佐劑，是指一類由油類物質和乳化劑按一定比例混合形成的佐劑。乳劑：是將一種溶液或干粉分散成細小的微粒，混懸于另一不相溶的液體中所成的分散體系。被分散的物質稱為分散相（內相），承受分散相的液體稱連續相（外相），兩相間的界面活性物質稱為乳化劑。乳化劑的種類：1.天然乳化劑：來自植物、動物2.人工合成乳化劑：分離子型（陰離子型、陽離子型）和非離子型：多元醇或聚合多。油乳佐劑的制備（以制備白油佐劑為例）：1、白油佐劑制備：取7號白油470ml，司本-80 30ml，硬脂酸鋁10g，混合后用力振搖，116度高溫滅菌，取3

12、0-40ml，冷卻至50度左右，再用力振搖至透明均質狀，即為白油佐劑。2、乳化：（1）、取自制的組織滅活液5ml，加入24%的吐溫-80混勻。（2）、將白油佐劑與水按3:12:1混勻。（3）、用勻漿機或者注射器乳化（4）、取乳化后的乳劑滴入水中，檢測乳化效果。生物制品菌（毒）種標準： 生物學特性明顯、歷史清楚；遺傳學上相對純一與穩定；反應原性與免疫原性優良；毒力應在規定范圍以內弱菌（毒）種選育自然弱毒株的選育：1.同源動物（如ND LaSota 株）、2.異源動物（如MD FC126株）人工誘變致弱： 1.化學途徑：亞硝基胍、醋酸鉈、洗衣粉2.物理途徑：高溫、紫外線3.生物途徑：適應非易感動物

13、或細胞；雜交減毒細菌培養技術（一）細菌分離與培養 1.需氧菌的分離培養：常用營養瓊脂平板分離 方法：劃線接種法；傾注培養法2.厭氧菌的分離培養：多數在二氧化碳條件下進行。最簡便的培養方法使用有蓋玻璃容器，放入接種的培養物后，點燃蠟燭，加蓋密閉容器，由于燃燒產生二氧化碳，燃燭即刻熄滅。此時容器內含有較高的二氧化碳濃度，再將容器放入適宜溫度培養即可。（二）細菌的規模化培養1.種子接種量：通常為1%2%2.培養時間：多數在對數繁殖后期至穩定前期活菌數量高，生命力最強，宜于收獲。3.培養方法：固體表面培養法 液體靜置培養法 適于一般性細菌疫苗生產 液體深層通氣培養發法 透析培養法培養基的原料標準：1.

14、水（生活用水標準）2.肉肝胃消化肉湯3.蛋白胨4.瓊脂5.明膠（化學純CP）級以上即可 6.酵母7.抑菌劑8.指示劑培養基分類:1按原料來源分：天然培養基；人工合成培養基2按理化性狀分：液體半固體固體生化培養基3按用途分：基礎營養選擇鑒別增菌厭氣生化病毒培養方法：一、動物增殖病毒技術動物選擇標準：（1）大動物應來源于非疫區,最好是未接種過相應病毒疫苗、青壯年和健康(經臨床檢查、檢疫）（2）對相應病毒易感，并十分敏感（3）經隔離飼養和觀察檢查證明健康（4）家兔、小鼠、大鼠應符合普通級或清潔級實驗動物標準；雞應屬非免疫雞或SPF級標準；犬貓應品種明確，且符合實驗動物標準。（5）體重、年齡要基本一致

15、，個體差別不宜過大二、接種方法:根據病毒及研究目的的不同，可采用不同途徑進行接種：皮下接種、皮內接種、肌肉接種、靜脈接種、腹腔接種和腦內接種疫苗制造流程：1.活疫苗制備：種毒鑒定、種毒批制備，細菌、病毒或寄生蟲培養、鑒定，抗原純化或提取、配苗凍干及成品檢驗 2.滅活疫苗制備：種毒鑒定、種毒純制備，細菌、病毒或寄生蟲培養、鑒定、抗原提取、滅活、配苗及成品檢驗細胞培養的方法：1.靜置培養：將細胞懸液接入培養瓶或培養板中，置恒溫箱內靜置培養，細胞長成致密的單層將細胞懸液接入轉瓶(塑料或玻璃瓶)，放于恒溫箱的轉鼓上，進行培養2.轉瓶培養通過振蕩或轉動的裝置，使細胞始終處于分散懸浮于培養液內的培養方法3

16、.懸浮培養懸浮培養的優點：能連續培養和連續收獲，不需胰酶消化，采用吹打即可分散，傳代細胞不受任何處理的損失，從而可大量提高細胞數量，提高生物制品的產量和質量4.微載體培養微載體(microcarrier)：直徑為60105nm的細小顆粒、無毒性、透明、顆粒密度與培養液近似、略重于培養液、低速攪拌即可懸浮、表面光滑、硬度小、有彈性、不吸收培養液、易于吸附細胞5.中空纖維細胞培養中空纖維：由乙酸纖維、聚氯乙烯-丙烯復合物、或多聚碳酸硅等材料制成，外徑50-100um，壁厚2575um，壁呈海綿狀，上有許多微孔，內腔表面是一層半透性的超濾膜，允許營養物質和代謝廢物出入，而對細胞和大分子物質(如單抗)

17、有滯留作用6.微囊化細胞培養：適用于單克隆抗體的生產。先將雜交瘤細胞微囊化，置于培養液中進行懸浮培養，一定時間后，從培養液中分離出微囊，沖洗后打開微囊，離心后可獲得高濃度的單抗弱毒疫苗：充分致弱，不含本病原或其它病原的強毒滅活疫苗：徹底滅活；選用優質佐劑，減少應激反應保障疫苗效果的關鍵環節1.選擇(育)優良的菌種和毒種，并保持其穩定性2.選用合適的繁殖細菌和病毒的方法，以獲得高滴度的抗原量，并保持其良好的抗原性3.使用合適的生產工藝4.嚴格按標準進行質量檢定菌種：免疫原性優良的強毒菌株，老制品的菌種可向有關單位索取，新制品的菌種需作全面鑒定種子液：將菌種接種于規定的培養基進行培養，經純粹檢驗合

18、格即為種子液菌液培養：將種子液接種于固體或液體培養基，用固體表面培養法、液體靜置培養法、液體搖振培養法、液體深層通氣培養法、透析培養法等方法進行培養純檢：菌液培養完成后，取少量作純粹檢查，同時計算菌數滅活：用適當的滅活劑(如0.1%甲醛)、在一定條件下(如37過夜)滅活，同時或隨后加入防腐劑濃縮：為提高抗原量以獲得更好的免疫效果，或在培養過程中未能達到所需菌數，需用離心沉淀、氫氧化鋁吸附沉淀、羧甲基纖維沉淀法濃縮菌液配苗與分裝：滅活后的細菌可作為菌素苗適用；加入氫氧化鋁膠、蜂膠、油乳佐劑，制成鋁膠苗、蜂膠苗、油苗；制成油乳劑滅活苗時，需加入適量油乳佐劑，以保證抗原量，并充分乳化貼標簽：制品名稱

19、、用法用量、保存方法、有效期、制造日期、批準文號、批號、檢驗號碼、制備細菌性活疫苗的程序與滅活菌苗基本一致，不同之處在于：其種毒為弱毒菌種、無滅活過程、菌苗需加保護劑凍動物組織苗制作一.動物的選擇1.應符合相應的等級要求，如清潔級以上2.動物的品種、年齡和體重也需符合要求3.制備組織滅活苗時，所選動物應是對所接種的病毒易感性高的4.制備組織弱毒苗時，所選動物則是培育該弱毒株時所用動物，如制備豬瘟兔化弱毒疫苗，選用兔子二、種毒與接種三、觀察與收獲1.組織滅活苗：按一定比例加入稀釋液(滅菌生理鹽水)制成勻漿，加滅活劑滅活2.弱毒組織苗：無菌操作剔除臟器上的脂肪與結蹄組織，稱重后，加入適量保護劑，制

20、成勻漿，過濾，加入足量保護劑，及一定量的青、鏈霉素，充分混勻，于0-4冰箱處理一定時間，無菌檢驗，分裝，凍干四、疫苗的配制許多病毒疫苗合適于用禽胚特別是雞胚制備，如雞痘疫苗、禽流感疫苗、雞新城疫疫苗、鴨瘟疫苗、鴨肝炎弱毒疫苗等雞胚選擇：SPF雞胚高免血清的制備：一、動物選擇與管理動物品種：制備抗菌和抗毒素的血清多用異種動物，抗病毒血清的制備多用同種動物 動物年齡和健康狀況：體型較大、性情溫馴、體質強健的青壯年動物，自繁自養、專門動物場飼養、從非疫區購買 動物的管理 ：精心管理 、隔離飼養 、建立動物檔案 二、免疫原的制備 免疫原：異物性、結構的復雜性和一定的物理性狀 1.細菌抗原的制備與免疫

21、2.病毒抗原的制備與免疫3.抗毒素血清制備三、免疫程序：第一階段為基礎免疫、第二階段為高度免疫接種途徑：皮下注射、肌肉注射 、皮內注射、腹腔注射，抗原量大時，多部位注射四、采血與分離血清試血：免疫過程中，經試血決定是采血或繼續免疫采血：一般在最后一次免疫后的710天，血清抗體效價可達到高峰，便可采血；分一次采血和多次采血分離血清：自然凝固析出、自然凝固加壓法 五、免疫血清的使用原則：正確診斷、盡早使用用法：皮下或肌肉注射，嚴重者靜脈注射 用量：依動物體重不同而異；大動物為1020 ml；豬羊等中等動物為510ml，禽類為0.51ml GMP：是獸藥企業管理生產和質量的基本準則，適用于獸藥生產的

22、全過程；或者說是對獸藥企業(包括獸醫生物制品企業)生產全過程的質量管理GMP內容：涉及人員、廠房和設備、原料采購入庫、檢驗、發料、加工、半成品檢驗、分包裝、成品檢定、產品運輸、銷售、用戶意見及處理等在內的全過程的質量管理概括起來分為：1.人員：管理人員、專業技術人員和生產人員2.硬件：廠房和設施、設備、原材料3.軟件：管理制度和要求GMP的作用和特點一、GMP的實施涉及兩個方面：1.政府獸醫藥政管理部門：從管理角度出發，把GMP看成政府對獸藥企業(包括獸醫生物制品生產企業)提出的最低要求，并作為獸藥藥政部門檢查獸藥企業和獸藥質量的依據2.獸藥企業：應把GMP視為本企業所必須具備的技術水平，包括

23、生產管理、質量管理和質量監測二、GMP是根據通用的原則性規定，針對我國所有獸藥企業而制定的。各獸藥企業應按照GMP要求，制定更具體的實施細則和條例三、GMP的主要目的是防止獸藥生產過程中的污染、混淆或其他事故，根除生產中的不良習慣，防患于未然，保證產品質量安全有效四、GMP強調有效性的證實：對一個工序或一件用具或設備在用于生產之前，要經過驗證，證明是符合要求和有效的，以保證產品質量五、GMP要求生產管理部門和質量控制部門的權力分立：生產部門和質控部門是構成GMP的兩大要素，但在組織上其地位平行，其領導應由兩人分別承擔六、GMP強調人員素質、衛生要求、無菌要求、核對制度以及質量監督和檢查制度豬瘟

24、免疫失敗的原因有哪些？1沒有按規定妥善保存和運輸疫苗，使其免疫原性降低2注射時操作不正規，劑量不足3生產實踐中免疫程序不合理4母源性中和抗體對豬瘟弱毒活疫苗的干擾豬瘟疫苗有幾種類型？1豬瘟活疫苗I-豬瘟兔化弱毒兔體組織活疫苗2豬瘟活疫苗II-豬瘟兔化弱毒犢牛睪丸細胞活疫苗3豬瘟-豬丹毒-豬肺疫三聯活疫苗II號炭疽芽孢疫苗與無莢膜炭疽芽孢疫苗的異同點？1相同點：制苗菌種為炭疽桿菌弱毒C40-202株，校檢菌種為炭疽桿菌C40-48弱毒菌株，所選菌株應符合炭疽桿菌生物學特性，28攝氏度保存期10a 2不同點：II號炭疽芽孢疫苗的毒力應為以37攝氏度培養24h的普通肉湯培養物0.2ml皮下接種200

25、250g豚鼠四只，于7d內全部死亡或大部死亡；以0.5ml皮下接種體重1.52kg家兔2只，觀察10d不致病，無任何反應。無莢膜炭疽芽孢疫苗的毒力應為以37攝氏度培養24h的普通肉湯培養物0.25ml皮下接種小鼠四只，0.5ml皮下接種家兔2只和豚鼠2只，均應產生劇烈水腫，但兔不應死亡豚鼠允許死亡1只，小鼠應全部或大部死亡，死亡動物脾臟涂片染色鏡檢應不見莢膜。豬丹毒疫苗有滅活疫苗和活苗兩類，滅活疫苗交互免疫的效果不如活苗。（一）滅活苗 豬丹毒滅活苗的免疫效果與制苗用菌株的免疫原性有關，又與培養基及佐劑的種類有關。目前應用的有以下三種：氫氧化鋁吸附滅活疫苗、裂解疫苗、豬丹毒豬肺疫氫氧化鋁二聯滅活

26、疫苗（二）弱毒疫苗：國內外關于培育豬丹毒弱毒菌株的報道很多，但安全和效力可靠的廣泛應用的并不多。1、豬丹毒GC42活疫苗 2 豬丹毒G4T10活疫苗.G4T10弱毒菌株是江蘇省農科院獸醫研究所與南京獸藥廠協作，用通過豚鼠致弱的G370菌株通過含0.01%錐黃素的血瓊脂培養基傳40代，再提高錐黃素濃度為0.04%繼續傳10代而培育成的3、豬丹毒-豬瘟-豬肺疫弱毒三聯凍干苗（簡稱豬三聯苗）口蹄疫，1弱毒疫苗：口蹄疫O型A型鼠化弱毒疫苗、口蹄疫O型、A型鼠化弱毒雙價疫苗、2滅活疫苗大腸桿菌大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起動物，特別是幼齡動物疾病的總稱。臨床上表現為腹瀉、敗血癥或毒血癥。大腸桿菌病特點：易感動物多，分布范圍廣。血清型多，但在某地或某種動物引起發病的只有少數幾個特定血清型。臨床表現類型多。大腸桿菌易產生耐藥性。防治比較困難。 分類：產腸毒素大腸桿菌(ETEC) 產類志賀毒素大腸桿菌(SLTEC) 腸致病性大腸桿菌(EPEC)敗血性大腸桿菌(SEPEC)尿道致病性大腸桿菌(UPEC)豬大腸桿菌1.仔豬黃痢又叫早發性大腸桿菌病，是出生1周內仔豬發生的一種急性、高度致死性的傳染病。以腹瀉（排黃色或黃白色液狀糞便）、消瘦、迅速死亡為特征。2.仔豬白痢又叫遲發性大腸桿菌病，由致病性大腸桿菌引起1030日齡仔豬發生的腸道傳染病。以排乳白色或灰白色漿狀、糊狀糞便為特征，致死率低。3