1、 營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)實(shí)驗(yàn)營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)實(shí)驗(yàn)食品中亞硝酸鹽測(cè)定食品中亞硝酸鹽測(cè)定（分光光度法鹽酸萘乙二胺法，（分光光度法鹽酸萘乙二胺法，即格里斯試劑比色法）即格里斯試劑比色法） ）一一實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握比色法測(cè)定食品中亞硝酸鹽的原理與方法。掌握比色法測(cè)定食品中亞硝酸鹽的原理與方法。2. 熟悉食品中亞硝酸鹽監(jiān)測(cè)的意義。熟悉食品中亞硝酸鹽監(jiān)測(cè)的意義。3. 熟悉食品中亞硝酸鹽的食品安全標(biāo)準(zhǔn)（熟悉食品中亞硝酸鹽的食品安全標(biāo)準(zhǔn)（GB2762 2012食品污染物限量標(biāo)準(zhǔn)），掌握食品中亞硝酸食品污染物限量標(biāo)準(zhǔn)），掌握食品中亞硝酸鹽含量測(cè)定的基本方法（鹽含量測(cè)定的基本方法（GB-T 5009.33 食品

2、中硝食品中硝酸鹽亞硝酸鹽的測(cè)定）。酸鹽亞硝酸鹽的測(cè)定）。注：肉類(lèi)制品因亞硝酸鹽為允許使用食品添加劑，故其限量標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)注：肉類(lèi)制品因亞硝酸鹽為允許使用食品添加劑，故其限量標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB2760 2011GB2760 2011食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)。食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)。二二實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)原理：樣品經(jīng)沉淀分離蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在弱樣品經(jīng)沉淀分離蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在弱酸性條件下亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸酸性條件下亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮化重氮化, ,產(chǎn)生重氮鹽，產(chǎn)生重氮鹽，此重氮鹽再與偶合試劑此重氮鹽再與偶合試劑( (鹽酸萘乙二胺鹽酸萘乙二胺) )偶合形成紫紅色染偶合形成紫紅色染料，其顏色的深淺與亞硝酸鹽

3、成正比，可料，其顏色的深淺與亞硝酸鹽成正比，可與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。通過(guò)分光光度計(jì)比色測(cè)定，計(jì)算出樣品中亞硝酸鹽的含量。通過(guò)分光光度計(jì)比色測(cè)定，計(jì)算出樣品中亞硝酸鹽的含量。反應(yīng)如下：反應(yīng)如下： 重氮反應(yīng)：重氮反應(yīng)：偶合反應(yīng)：偶合反應(yīng)：三三操作步驟操作步驟1.1. 樣品處理：稱(chēng)取樣品約樣品處理：稱(chēng)取樣品約10.00g10.00g（糧食取（糧食取5g5g）經(jīng)絞碎）經(jīng)絞碎混勻樣品，置于打碎機(jī)中，加混勻樣品，置于打碎機(jī)中，加70mL70mL水和水和12mL12mL氫氧化氫氧化鈉（鈉（20g/L20g/L）溶液，混勻，用氫氧化鈉溶液（）溶液，混勻，用氫氧化鈉溶液（20g/L20g/L）調(diào)樣品至

4、調(diào)樣品至pH=8pH=8，轉(zhuǎn)移至，轉(zhuǎn)移至200mL200mL容量瓶中加容量瓶中加10mL10mL硫酸硫酸鋅溶液，混勻，如不產(chǎn)生白色沉淀，再補(bǔ)加鋅溶液，混勻，如不產(chǎn)生白色沉淀，再補(bǔ)加2 25mL5mL氫氧化鈉，混勻。置氫氧化鈉，混勻。置6060水浴中加熱水浴中加熱10min10min，取出，取出后冷至室溫，加水至刻度，混勻。放置后冷至室溫，加水至刻度，混勻。放置0.5h0.5h，用濾，用濾紙過(guò)濾，棄去初濾液紙過(guò)濾，棄去初濾液20mL20mL，收集濾液備用。，收集濾液備用。三三操作步驟操作步驟2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備：吸取標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備：吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL亞硝酸鈉標(biāo)

5、準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0，2.5，5，10，15，20，25ug亞硝酸鈉），分別置于亞硝酸鈉），分別置于25mL帶塞比帶塞比色管中。于標(biāo)準(zhǔn)管中分別加入色管中。于標(biāo)準(zhǔn)管中分別加入4.5mL 氯化胺緩沖液，氯化胺緩沖液，加加2.5m1 60乙酸后立即加入乙酸后立即加入5.0mL顯色劑，加水顯色劑，加水至刻度，混勻，在暗處?kù)o置至刻度，混勻，在暗處?kù)o置25min，用，用1cm比色杯比色杯（靈敏度低時(shí)可換（靈敏度低時(shí)可換2cm比色杯），以零管調(diào)零點(diǎn)，比色杯），以零管調(diào)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)于波長(zhǎng)550nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。注：低含量樣品以制備低含量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)系列為：吸取注：低含量樣品以制備低含量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)系列為：吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（分別相當(dāng)于亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液（分別相當(dāng)于0，2，4，6，8，10ug亞硝酸鈉）。亞硝酸鈉）。 三三操作步驟操作步驟3. 樣品測(cè)定：吸取樣品測(cè)定：吸取10.0mL樣品處理濾液于樣品處理濾液于25mL帶塞帶塞比色管中，其余步驟同標(biāo)準(zhǔn)管。比色管中，其余步驟同標(biāo)準(zhǔn)管。同時(shí)做試劑空白同時(shí)做試劑