1、實驗2菠菜中色素的提取和別離揚州大學化學化工學院張磊 091301223一.實驗目的：1 了解別離與提純過程在科學研究和生產生活中的應用；2. 掌握別離與提純實驗設計的一般思路和方法；3. 掌握菠菜中色素提取的原理，步驟和影響因素；二實驗原理：1葉綠體中的色素是有機物，不溶于水，易溶于乙醇等有機溶劑中，所以用石油醚、 乙醇等能提取色素。2本實驗選用的是吸附色譜，氧化鋁作為吸附劑極性，色素提取液為吸附液，色 素提取液中各成分極性大小為：葉綠素b黃綠色葉綠素a藍綠色葉黃素黃色3類胡蘿卜素橙色。3. 柱層析法的別離原理是根據物質在氧化鋁上的吸附力不同而使各組分別離。一般情況下極性較大的物質易被吸附，

2、極性較弱的物質不易被吸附，所以由上到下為：葉綠素b黃綠色，葉綠素a藍綠色，葉黃素黃色， 3類胡蘿卜素橙色。三、實驗材料：儀器：研缽、分液漏斗、層析柱 20 x 10 cm，外表皿，普通漏斗，量筒試劑：石油醚、乙醇95%、菠菜葉、丙酮化學純、中性氧化鋁，無水硫酸鈉四、實驗步驟與內容【探究：菠菜或青菜的處理方式】1小組討論處理菠菜的各種方式，然后按照“手撕，“劃幾刀，再手撕，“剪成丁狀，“剪碎后稍加研磨，“研磨成漿共五種方式分為五組進行實驗，最后確定控制菠菜葉取25克，參加有機溶劑15mL9mL石油醚+6mL乙醚，浸泡時間取25min為統一條件；2開始分組實驗，各自處理好各組的菠菜，放置在燒杯中，

3、參加15mL有機溶劑并蓋上外表皿浸泡 25min。3在浸泡的時間內開始裝柱，首先在滴管下口裝上橡皮管并夾上彈簧夾夾緊，在管的出口處放入一小撮棉花，在棉花上放置已剪好的和滴管內徑一般大小的圓形濾紙，然后 用普通漏斗往里面裝入中性氧化鋁，最后在氧化鋁上再加上和滴管內徑一般大小的圓形濾 紙，夾在鐵架臺上備用。425min后，把浸取液用紗布過濾，濾液轉移至分液漏斗中，加等體積的水洗一次， 棄去下層的水-乙醇層。石油醚層再用等體積的水洗二次。有機相用無水硫酸鈉枯燥后轉移至燒杯中做柱層析別離。5把得到的葉綠素分幾次倒入柱中，緩慢放開彈簧夾，再用9:1的石油醚一丙酮溶液滴加，一段時間后在層析柱上出現了一條條

4、的不同顏色的條紋，即葉綠素b,葉綠素a,葉黃素，伕類胡蘿卜素實現別離。五、實驗現象與總結越多，但當菠菜研磨成漿的時候，雖然溶解色素很多，但其中混有很多細小的纖維素，對過 濾的時候不方便，會堵在漏斗口，用紗布過濾時又不能完全除去，對實驗的后續操作有很大 影響。所以菠菜要研磨時只可適當，不可研磨得太爛而成湖狀。六、實驗主意事項1. 分液時注意有機層和水層的選取；2. 裝柱時邊裝邊輕輕敲打，使其嚴實；3. 實驗后回收玻璃滴管和螺旋夾。4. 萃取時不要劇烈振蕩，以防止發生乳化現象。七、問題與討論1. 實驗時為什么要準備紗布過濾？ 答：過濾時不要使用濾紙而使用紗布，否那么纖維素會堵在漏斗口，不容易別離。

5、2. 在完成實驗別離時，黃色不是很明顯，為什么？ 答：當有顏色在柱上顯現出來時，黃色的葉黃素不是很明顯，由于葉黃素易溶于醇而 在石油醚中溶解度較小，從嫩綠菠菜得到的提取液中，葉黃素含量很少，柱色譜中不易分出 黃色帶。3. 在用柱別離時，柱中的填料會發生斷層，出現這種現象的原因？ 答：為了保持柱子的均一性，使整個吸附劑浸泡在溶劑或溶液中是必要的，否那么當柱中 溶劑或溶液流干時，就會使柱身干裂，影響滲透和顯色的均一性。因此要保證整個裝樣過程 中溶劑要高于三氧化二鋁的外表。4. 有的同學實驗不是很成功，當把色素倒入柱中時，未出現分層，而是聚集在一起的原 因？答：這與層析柱填裝緊密與否有關，假設各局部松緊不勻，會影響滲透速度和顯色的均 勻。因此壓緊填料，色素別離不開；也不要過慢，使柱裝得太松，導致層析過程中，填料床高 度下降，色素洗脫很慢。水洗