1、清大天一個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基針對(duì)在生物制藥行業(yè)使用個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基的必然趨勢(shì)以及我國(guó)生物醫(yī)藥行業(yè)對(duì)個(gè)性 化細(xì)胞培養(yǎng)基的潛在需求，清大天一依托于在細(xì)胞培養(yǎng)基研發(fā)和動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)方面具 有豐富經(jīng)驗(yàn)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)， 潛心研究，開發(fā)出了國(guó)有個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基，成功應(yīng)用于生物制藥企業(yè)，獲得一致的市場(chǎng)好評(píng)。一.清大天一個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基簡(jiǎn)介清大天一個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基主要是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基如DMEM、199、MEM、MBRM、BBSM的基礎(chǔ)上，針對(duì)生物制藥中常用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)而研制開發(fā)的，主要產(chǎn)品及其特點(diǎn)（參見表1）。表1清大天一個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基主要特點(diǎn)產(chǎn)品名稱產(chǎn)品代 號(hào)特點(diǎn)DMEMMD205改良DMEM，具有較強(qiáng)細(xì)胞維持

2、能力， 可增加收液次數(shù)，提高病毒表達(dá)率。MD208DMEM培養(yǎng)基的改良低血清培養(yǎng)基，可用于CHO細(xì)胞的低血清培養(yǎng)。MD210改良DMEM，適用于 Marc145細(xì)胞培養(yǎng)。199MD502改良199,具有高緩沖性能，提高病毒滴度MD504199培養(yǎng)基的改良低血清培養(yǎng)基。可用于Vero細(xì)胞、地鼠腎細(xì)胞的低血清培養(yǎng)。MD505199培養(yǎng)基的改良低血清培養(yǎng)基。可用于Vero細(xì)胞微載體反應(yīng)器低血清培養(yǎng)。MEMMD610適用于二倍體細(xì)胞的培養(yǎng)MD611MEM培養(yǎng)基的改良低血清培養(yǎng)基。可用于BHK21細(xì)胞的低血清培養(yǎng)。MBRMMD900不含苯酚紅，可用于 Marc145細(xì)胞微載體反應(yīng)器低血清懸浮培養(yǎng)。BBS

3、MMD910可用于BHK21細(xì)胞反應(yīng)器低血清懸浮培養(yǎng)。SAF-CHO-G-001SAF106無(wú)血清無(wú)動(dòng)物來(lái)源組分細(xì)胞培養(yǎng)基，CHO懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基，不含苯酚紅。SAF-CHO-F-001SAF107無(wú)血清無(wú)動(dòng)物來(lái)源組分細(xì)胞培養(yǎng)基，CHO細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑，不含苯酚紅。SAF-NS0-G-001SAF110無(wú)血清無(wú)動(dòng)物來(lái)源組分細(xì)胞培養(yǎng)基，NS0懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基。二.清大天一個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)用實(shí)例應(yīng)用一：BHK21細(xì)胞生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)基和維持液的應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)基：清大天一 BHK21細(xì)胞懸浮培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基MD910/MD920。MD910 :用于BHK21細(xì)胞增殖培養(yǎng)，血清濃度可降低為3%。M

4、D920 ,用于病毒培養(yǎng)，無(wú)需使用血清和水解乳蛋白。生物反應(yīng)器：ClavorusTM650L反應(yīng)器進(jìn)行馴化培養(yǎng)，挑選良好的馴化細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞克隆，并進(jìn)行口蹄疫病毒敏感性實(shí)驗(yàn)，篩選出口蹄疫病毒敏感性懸浮培養(yǎng)BHK21細(xì)胞，確定為BHK21C13-BR細(xì)胞，作為口蹄疫疫苗生產(chǎn)的種子細(xì)胞。500L反應(yīng)器：使用反應(yīng)器逐級(jí)放大技術(shù)，BHK21細(xì)胞密度可達(dá)1-3 x 16Cells/ml。抗原產(chǎn)量：口蹄疫抗原產(chǎn)量是轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的10-20倍，換算為單位細(xì)胞產(chǎn)量為轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的3-7倍。應(yīng)用二：Marc145細(xì)胞微載體培養(yǎng)基的應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)基：清大天一反應(yīng)器Marc145細(xì)胞專用培養(yǎng)基 MD900微載體：cytodex

5、-1 , GEHC , 8-10g/L生物反應(yīng)器：ClavorusTM 120L反應(yīng)器細(xì)胞密度可達(dá)3.6 x 10cells/ml工藝路線：轉(zhuǎn)瓶細(xì)胞直接接種培養(yǎng)工藝應(yīng)用二：Vero細(xì)胞微載體培養(yǎng)基的應(yīng)用某企業(yè)使用清大天一反應(yīng)器高密度培養(yǎng)基（細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞培養(yǎng)后期培養(yǎng)液灌流體積可達(dá)到密度達(dá)到1 x 10cells/ml以上。病毒培養(yǎng)收獲：接種狂犬病毒后可連續(xù)收液20天以上，收獲病毒液使用小鼠腦內(nèi)法檢測(cè)病毒毒力在9.0以上。疫苗制備：使用工作體積為10L的反應(yīng)器，收獲的病毒液制備狂犬疫苗，每罐可制備23萬(wàn)人份，疫苗效力效價(jià)在4IU/瓶以上。應(yīng)用四：Vero細(xì)胞微載體培養(yǎng)基的應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)基：清大天一

6、反應(yīng)器咼密度Vero細(xì)胞專用培養(yǎng)基微載體：GE 的 Cytodex-1 5g/L細(xì)胞培養(yǎng)體積：65LVero細(xì)胞密度在4.5 x 10ells/ml時(shí)的照片：均勻、致密。應(yīng)用五：Vero細(xì)胞微載體培養(yǎng)基的應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)基：清大天一反應(yīng)器咼密度Vero培養(yǎng)基。微載體：GE 的 cytodex-1。在5升B.Braun生物反應(yīng)器灌注培養(yǎng)Vero細(xì)胞，120hr時(shí)微載體上的細(xì)胞如下圖，144hr細(xì)胞密度提高至7.1 x 1&cells/ml。左: 5升反應(yīng)器培養(yǎng) Vero細(xì)胞，120hr, 100x應(yīng)用六：無(wú)血清無(wú)動(dòng)物組分的研究050100150200Time（小時(shí)）)lm/ sle 密胞 細(xì)右：5升

7、反應(yīng)器灌注培養(yǎng)CHO細(xì)胞培養(yǎng)基全懸浮培養(yǎng)細(xì)胞株：CHO工程株(上海某抗體藥物公司構(gòu)建)。無(wú)血清培養(yǎng)基：A :清大天一公司的 SAF-CH0-G-003 ;B :國(guó)外某培養(yǎng)基公司的無(wú)血清培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)方法：5X 10cells/ml接種，每天計(jì)數(shù)，留樣測(cè)定IgG。結(jié)論：(1)批培養(yǎng)的最高細(xì)胞密度均可達(dá)到4.5 x 106cells/ml,細(xì)胞存活率基本一致。(2) IgG產(chǎn)量比較抗體濃度：清大天一：148ug/ml國(guó)外某公司：114ug/ml。清大天一提高 30%。00Vero細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線CHO細(xì)胞表達(dá)人源化單克隆抗體6050403020010國(guó)外某公司345Time/d%/yLDav706090

8、8020JTl/50 11111111012345678Time/d細(xì)胞活力比較0清大天一ii678160o2804001234567Time/dIgG產(chǎn)量比較抗體濃度應(yīng)用七：無(wú)血清無(wú)動(dòng)物組分 CHO細(xì)胞培養(yǎng)基在200升Wave反應(yīng)器中培養(yǎng) CHO細(xì)胞生產(chǎn)人 源化抗體細(xì)胞培養(yǎng)基：清大天一無(wú)血清無(wú)動(dòng)物組分CHO培養(yǎng)基及CHO營(yíng)養(yǎng)添加劑(無(wú)酚紅)。細(xì)胞培養(yǎng)：在200升的Wave反應(yīng)器中懸浮培養(yǎng) CHO細(xì)胞, 活細(xì)胞密度達(dá)到1 x 10cells/ml，連續(xù)灌注1個(gè)月以上。抗體表達(dá)情況：抗體表達(dá)水平超過進(jìn)口的無(wú)血清培養(yǎng)基。應(yīng)用八：營(yíng)養(yǎng)添加劑在流加培養(yǎng)CHO細(xì)胞表達(dá)抗體中的作用00246 810分組實(shí)

9、驗(yàn)：批培養(yǎng)：對(duì)照培養(yǎng)（con trol）流加培養(yǎng)：SAF-CHO-Feed-1營(yíng)養(yǎng)添加劑實(shí)驗(yàn)方法：每天取樣，計(jì)數(shù)、測(cè)定IgGtime/day當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 3 x 1&ells/ml左右時(shí)，隔天補(bǔ)加定量的營(yíng)養(yǎng)添加劑。細(xì)胞生長(zhǎng)和抗體生成情況應(yīng)用九：EPO專用細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng) CHO細(xì)胞生產(chǎn)重組促紅細(xì)胞生成素培養(yǎng)基：清大天一 EPO生產(chǎn)專用細(xì)胞培養(yǎng)基；反應(yīng)器： NBS7.5L反應(yīng)器，F(xiàn)ibraCel? Disks 細(xì)胞培養(yǎng)：CHO細(xì)胞密度約為6-8 x 10cells/ml。EPO產(chǎn)量（轉(zhuǎn)瓶）：多收液1次，EPO產(chǎn)量提高了 27.5%。應(yīng)用十：ST細(xì)胞專用細(xì)胞培養(yǎng)基的應(yīng)用生物反應(yīng)器：B.Braun反應(yīng)器，工作體積5L 微載體：Cytod