1、方案編號(hào)：VOL-QWX-012 版本號(hào)：00 第 2 頁(yè) 共10頁(yè)板藍(lán)根顆粒微生物限度計(jì)數(shù)方法適用性驗(yàn)證方案方案編號(hào)：VOL-QWX-012 年 月驗(yàn)證方案審批表驗(yàn)證方案名稱板藍(lán)根顆粒微生物限度計(jì)數(shù)方法適用性驗(yàn)證方案驗(yàn)證方案編號(hào)VOL-QWX-012 方案起草人起草日期方案審核部門審核人審核日期審核意見(jiàn)化 驗(yàn) 室質(zhì) 量 部批準(zhǔn)意見(jiàn)批 準(zhǔn) 人批準(zhǔn)日期 執(zhí)行日期方案編號(hào)：VOL-QWX-012 版本號(hào)：00 第 11 頁(yè) 共10頁(yè)板藍(lán)根顆粒微生物限度計(jì)數(shù)方法適用性驗(yàn)證方案目錄1. 概述2. 目的3. 依據(jù)4. 范圍5. 驗(yàn)證小組人員及職責(zé)6. 驗(yàn)證實(shí)施條件7. 合格標(biāo)準(zhǔn)8. 驗(yàn)證方法9. 驗(yàn)證結(jié)

2、果10. 驗(yàn)證報(bào)告1.概述1.1樣品資料品名： 板藍(lán)根顆粒 標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)：中國(guó)藥典2015版四部通則 批號(hào)： 試驗(yàn)日期： 1.2處方 ：板藍(lán)根顆粒為中國(guó)藥典2015版一部中藥成方制劑法定標(biāo)準(zhǔn)。由板藍(lán)根制成，輔料為：蔗糖、糊精。1.3 功能主治：清熱解毒，涼血利咽。用于肺胃熱盛所致的咽喉腫痛、口咽干燥；急性扁桃體炎見(jiàn)上述證候者。1.4 有效期：18個(gè)月。1.5依據(jù)中國(guó)藥典2015版四部通則“非無(wú)菌不含藥材原粉的中藥制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)”，根據(jù)劑型與產(chǎn)品處方判斷，板藍(lán)根顆粒微生物限度檢查內(nèi)容包括需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)，控制菌檢查大腸埃希菌；擬采用“平皿法”進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)方法檢查，采用“常

3、規(guī)法”進(jìn)行控制菌檢查。2.目的：確認(rèn)所采用的方法適用于該產(chǎn)品的微生物計(jì)數(shù)和控制菌檢查，以確保測(cè)定方法的可靠性，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。若檢驗(yàn)程序或產(chǎn)品發(fā)生變化，可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，計(jì)數(shù)方法應(yīng)重新進(jìn)行適用性試驗(yàn)。3.依據(jù)中國(guó)藥典2015年版四部“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查微生物計(jì)數(shù)法”中國(guó)藥典2015年版四部“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查控制菌檢查法”中國(guó)藥典2015年版四部“非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)”4.范圍：本驗(yàn)證方案適用于？制藥有限公司板藍(lán)根顆粒微生物限度計(jì)數(shù)方法的適用性試驗(yàn)。5. 驗(yàn)證小組人員及職責(zé)姓 名所在部門職 責(zé)6. 驗(yàn)證實(shí)施條件6.1 檢驗(yàn)用水：公司制備的經(jīng)檢驗(yàn)合格的純化水。6.2檢驗(yàn)儀

4、器設(shè)備：驗(yàn)證涉及的檢驗(yàn)儀器（設(shè)備）與檢驗(yàn)方法，經(jīng)過(guò)確認(rèn)或再確認(rèn)后合格。所用檢驗(yàn)設(shè)備如下：SPX-250型生化培養(yǎng)箱PYX-DHS-400型隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱DHP-9272型恒溫培養(yǎng)箱DHP-9032型恒溫培養(yǎng)箱YX-400型醫(yī)用雙層普型不銹鋼雙層立式電熱蒸汽壓力消毒器DSX-280KB24 立升手提式壓力蒸汽滅菌器GSP-9080型隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱6.3 驗(yàn)證培養(yǎng)基：驗(yàn)證所使用的培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)培養(yǎng)基的適用性檢查，結(jié)果符合藥典要求。所用培養(yǎng)基如下：名 稱來(lái) 源批 號(hào)胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基麥康凱液體培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基6.4 驗(yàn)

5、證菌株：名 稱來(lái) 源批 號(hào)金黃色葡萄球菌菌株枯草芽孢桿菌菌株銅綠假單胞菌菌株白色念珠菌菌株黑曲霉菌菌株大腸埃希菌菌株7. 合格標(biāo)準(zhǔn)7.1在需氧菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)的三次獨(dú)立平行試驗(yàn)中，試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組菌落數(shù)的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.52范圍內(nèi)。7.2在控制菌檢查的試驗(yàn)中試驗(yàn)組應(yīng)檢出試驗(yàn)菌，陽(yáng)性對(duì)照組應(yīng)檢出試驗(yàn)菌，陰性對(duì)照組不得檢出試驗(yàn)菌。8. 驗(yàn)證方法8.1 菌液制備所有使用的菌株均為西林瓶包裝的定量菌株。定量菌株適用于培養(yǎng)基適用性檢查、控制菌檢查、促生長(zhǎng)試驗(yàn)、靈敏度檢查等。使用前將金黃色葡萄球菌株西林瓶、枯草芽孢桿菌株西林瓶、白色念珠菌株西林瓶、銅綠假單胞菌菌株、黑曲霉

6、菌株西林瓶從冰箱中拿出平衡至室溫，加入含有11ml無(wú)菌生理鹽水的試管中，蓋上瓶蓋，靜置約30s，震蕩10s，吸取1ml加至適宜培養(yǎng)基中培養(yǎng)，即得含量為10100cfu的菌落。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在28，可在24小時(shí)內(nèi)使用。8.2 菌液的檢驗(yàn)8.2.1取上述金黃色葡萄球菌株、枯草芽孢桿菌株、大腸埃希菌菌株、銅綠假單胞菌菌株的稀釋液各1ml，分別用45的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基20ml注皿，各平行測(cè)定兩皿，3035培養(yǎng)5天，計(jì)數(shù)，應(yīng)為10100cfu/ml，結(jié)果見(jiàn)表1。8.2.2取上述白色念珠菌菌株、黑曲霉菌株的稀釋液各1ml，分別用45的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基20ml注皿

7、，各平行測(cè)定兩皿，2025培養(yǎng)7天，計(jì)數(shù)，應(yīng)為10100cfu/ml，結(jié)果見(jiàn)表1。8.3需氧菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)8.3.1供試液制備：取供試品10ml，加ph7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，制成供試液，作為1：10的供試液。8.3.2試驗(yàn)組：取供試液分別按1ml/皿加入平皿后，加入上述10100cfu的試驗(yàn)菌，立即傾注至中國(guó)藥典2015版規(guī)定的瓊脂培養(yǎng)基中，置規(guī)定的溫度培養(yǎng)35天，觀察結(jié)果。8.3.3菌液組：除不加供試液外，同試驗(yàn)組測(cè)定方法。8.3.4供試品對(duì)照組：除不加菌液外，同試驗(yàn)組測(cè)定方法。8.3.5將以上平皿需氧菌置3035培養(yǎng)不超過(guò)5天，霉菌、酵母菌置202

8、5培養(yǎng)不超過(guò)7天，并在5天和7天分別進(jìn)行計(jì)數(shù)。8.3.6回收比值的計(jì)算：試驗(yàn)組的菌落數(shù)供試品對(duì)照組菌落數(shù)菌液對(duì)照組菌落數(shù)8.3.7實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見(jiàn)表28。8.4 控制菌計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)8.4.1供試液制備：同“需氧菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)”供試液制備。8.4.2試驗(yàn)組：取供試液10ml加入100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，加入上述大腸埃希菌菌液，置3035培養(yǎng)24小時(shí)后，取培養(yǎng)物1ml接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中，4244培養(yǎng)2448小時(shí)后，取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，3035培養(yǎng)1872小時(shí)。8.4.3陰性對(duì)照組：以等體積的PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩

9、沖液代替供試液，除不加菌液外，其他操作同試驗(yàn)組。8.4.4陽(yáng)性對(duì)照組: 以等體積的PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液代替供試液，其他操作同試驗(yàn)組。8.4.5供試品對(duì)照組：取供試液10ml加入100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，置3035培養(yǎng)24小時(shí)，除不加菌液外，其他操作同試驗(yàn)組。8.4.6實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見(jiàn)表9。9.驗(yàn)證結(jié)果表1、試驗(yàn)用菌液檢查（菌落計(jì)數(shù)單位：cfu）試驗(yàn)次數(shù)計(jì) 數(shù)方 法大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌銅綠假單胞菌白色念珠菌黑曲霉菌1平皿法平均2平皿法平均3平皿法平均表2、白色念珠菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證（菌落計(jì)數(shù)單位：cfu，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）方法試 驗(yàn)次 數(shù)菌液組試驗(yàn)組供試品對(duì)照

10、組比值菌落數(shù)平均菌落數(shù)平均菌落數(shù)平均平皿法123表3、黑曲霉計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證（菌落計(jì)數(shù)單位：cfu，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）方法試 驗(yàn)次 數(shù)菌液組試驗(yàn)組供試品對(duì)照組比值菌落數(shù)平均菌落數(shù)平均菌落數(shù)平均平皿法123表4、金黃色葡萄球菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證（菌落計(jì)數(shù)單位：cfu，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基）方法試 驗(yàn)次 數(shù)菌液組試驗(yàn)組供試品對(duì)照組比值菌落數(shù)平均菌落數(shù)平均菌落數(shù)平均平皿法123表5、枯草芽孢桿菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證（菌落計(jì)數(shù)單位：cfu，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基）方法試 驗(yàn)次 數(shù)菌液組試驗(yàn)組供試品對(duì)照組比值菌落數(shù)平均菌落數(shù)平均菌落數(shù)平均平皿法123表6、銅綠假單胞菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證（菌落計(jì)數(shù)單位：cfu，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基）方法試 驗(yàn)次 數(shù)菌液組試驗(yàn)組供試品對(duì)照組比值菌落數(shù)平均菌落數(shù)平均菌落數(shù)平均平皿法123表7、白色念珠菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證（菌落計(jì)數(shù)單位：cfu，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基）方法試 驗(yàn)次 數(shù)菌液組試驗(yàn)組供試品對(duì)照組比值菌落數(shù)平均菌落數(shù)平均菌落數(shù)平均平皿法123表8、黑曲霉計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證（菌落計(jì)數(shù)單位：cfu，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基）方法試 驗(yàn)次 數(shù)菌液組試驗(yàn)組供試品對(duì)照組比值菌