1、綜述.腦膜炎奈瑟菌莢膜多糖合成及相關(guān)基因的研究進展于飛飛綜述；應(yīng)蓮芳，張海紅審校蘭州生物品研究所有限責(zé)任公司中試研究室甘肅省疫苗工程技術(shù)研究中心，H.肅蘭州730046摘要:腦膜炎奈瑟菌(Neisseriamemngilules,Nm)是流行性腦脊跳膜炎的主要致病菌莢膜多糖(Capsularpolysaccharides,CPS)是該倘主要的致病因子。近年來，隨著基因組與分子生物學(xué)的不斷發(fā)展.CPS合成相關(guān)基因越來越受到關(guān)注。重點對NmCPS的合成及相關(guān)基因作用作一綜述。關(guān)鍵詞:腦膜炎奈瑟萌;英膜多糖;合成;基因中圖分類號：R378.1*5文獻標(biāo)志碼：A文章編號：1005-5673(2016)

2、04-0048-06DOI：10.13309/ki.pmi.2016.04.011ProgressinsynthesisandrelevantgeneofNeisseriameningitidiscapsularpolysaccharidesYUFei-fei,YlNGLian-fang.ZHANGHai-hongPilotPhinlTestLaboratory,hinzhouInstituleofBiologicalProductsCo.,Lld.,CenterforGtmsuProvincialVaccineEngineeringResearch,Lanzhou730046,GansuPr

3、ovince,ChinaCorrespondingauthor:YINGLian-fang,E-mail:yinglfl965Abstract:Neisseriameningitides(Nm),amajorpathogenofepidemiccerebrospinalmeningitidis,containsandexpressesacapsularpolysaccharides(CPS)thatisaprimarypathogenicfactor.Recently,withthedevelopmentofgenomicsandmolecularbiology,牌geneforCPSsynt

4、hesishasattractedmoreandmoreattention.ThisreviewfocusedonthesynthesisandrelevantgeneofNmCPS.Keywords:Neisseriameningitidis；Capsularpolysaccharides；Synthesis；Gene腦膜炎奈瑟曲(NeisseriarneningUidis,Nm)俗稱腦膜炎球菌,是流行性腦脊髓膜炎(簡稱“流腦”)的主要致病菌;流腦是具有發(fā)病急、傳播快、病死率高、周期性流行等特征的呼吸道傳染性疾病日。莢膜多糖(Capsularpolysaccharides,CPS)是Nm的主

5、要致病因子，也是血清學(xué)分群依據(jù)。依據(jù)免疫反應(yīng)和CPS抗原結(jié)構(gòu)，Nm被分為13種血清群，其中具有致病性的為A、B、C、W135、X和Y群。CPS可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生特異性抗體,具有良好的免疫原性，是Nm多糖疫苗的主要成分，在疫苗研發(fā)中得到廣泛地應(yīng)用。近年來，隨著基因組學(xué)與分子生物學(xué)的不基金項目：國家“敢大新與創(chuàng)制”專項(20I3ZX094023)2.215)作者簡介：于飛飛(1990-),男，碩土研究生，主要從事細(xì)館性疫苗方面研發(fā)。通訊作者:應(yīng)蓮芳.研究員,E-mail:yinglfl965斷發(fā)展，細(xì)菌CPS合成基因簇被破譯,CPS合成相關(guān)基因越來越受到關(guān)注。重點對Nm的CPS合成及相關(guān)基因作一綜述。

6、1腦膜炎奈瑟菌莢膜多糖CPS是細(xì)菌表達在細(xì)胞表面的成分，Nm菌體表面的CPS厚度小于0.2呻1,是由兒種單糖通過不同的糖昔鍵連接唾液酸或磷酸的孤復(fù)單元構(gòu)成;在侵襲宿主組織細(xì)胞時，Nm的CPS具有抵抗宿主北特異性免疫、逃避宿主特異性免疫及阻礙Nm與宿主細(xì)胞緊密黏附等作用。CPS的分子結(jié)構(gòu)不同，其免疫原性和生物學(xué)功能也會存在差異。1.1 莢膜多概的分子結(jié)構(gòu)除A、X群外，B、C、W135和Y群的CPS結(jié)構(gòu)均為唾液酸衍生物foA群的CPS由磷酸基團連接M乙酰甘露糖胺的重復(fù)單元構(gòu)成;X群CPS由磷酸基團與M乙酰葡萄糖胺連接構(gòu)成。因B群CPS與胎兒神經(jīng)細(xì)胞黏附分子(Neuralcelladhesionmo

7、lecule,NCAM)相似，機體對其免疫反應(yīng)很弱，故CPS不能作為B群疫苗的抗原成分；據(jù)文獻56報道，B群外膜蛋白囊泡(Outermembranevesicle,OMV)可作為制備結(jié)合疫苗的載體。B、C、W135、Y群的CPS結(jié)構(gòu)均含有唾液酸成分。B群和C群CPS的重復(fù)單元只有唾液酸，兩者的差別在于糖樣鍵不同。在W135、Y群CPS分子中，唾液酸與一分子半乳糖或菊萄糖通過。-1,4糖廿鍵連接構(gòu)成重復(fù)單元,W135群中連接的是半乳糖，而Y群中連接的是菊萄糖。據(jù)文獻報道，NmCPS在不同位點存在不同程度的氧乙酰化，如A群C3、C4,C群C7、C8,W135,Y群C7、C9的氧乙酰化“wo】，見表

8、ioLongworth等'山從英國患者體內(nèi)分離的Nm中，Y群CPS約79%被氧乙酰化，C群的氧乙酰化高達88%,而W135群僅有8%。不同程度、不同位點氧乙酰化對Nm的免疫原性產(chǎn)生的影響不同。C群、Y群CPS氧乙酰化會影響CPS的分子構(gòu)象，可能造成抗原的活性表位被遮蔽,而氧乙酰基卻能提高A群CPS的免疫原性“°。因此，在制備多糖蛋白結(jié)合疫苗時,必須對氧乙酰基含量及氧乙酰化位點進行質(zhì)控。流腦結(jié)合疫苗常利用NaIO4或氧化劑對多糖進行活化，通過還原胺化或酰胺縮合等方法使蛋白、多糖結(jié)合的。表1六種腦膜炎奈瑟曲莢膜多糖化學(xué)結(jié)構(gòu)Tab.1StructuresofsixtypesofN.

9、meningitidiscapsularpolysaccharides血清群化學(xué)結(jié)構(gòu)氧乙酰化位點A-6)-ManNAc-a-1-(PO4-C-3,C-4B-8)-NeuAc-a(2-/C-9)-NeuAc-a(2-07,08W135-6)-Gal-a(1,4)-NeuAc-a(2-C-7.C-9X-4)-GlcNAc-a-l-(PO4-/Y-6)-Glc-a(1,4)-NeuAc-a(2-C-7.C-9注:/為無。1.2莢膜多糖的生物學(xué)功能1.2.1抵抗宿主非特異性免疫CPS抵抗宿主非特異性免疫主要表現(xiàn)為:抵抗陽離子抗菌肽:陽離子抗菌肽能破壞細(xì)菌胞質(zhì)膜結(jié)構(gòu)，引起膜兩側(cè)離子流通不受控制，帶有負(fù)電

10、荷的CPS能結(jié)合陽離子抗菌肽保護細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)。Spinosa等研究顯示，NmCPS合成基因(siaD和HpK)與一種參與抵抗陽離子抗菌肽的外排泵編碼基因在感染期的細(xì)胞內(nèi)表達上調(diào)，表明CPS保護Nm使其在宿主細(xì)胞內(nèi)存活，可能與CPS抵抗宿主體液中的陽離子抗茵肽有關(guān);抑制吞噬作用:調(diào)理素蛋白C3b能與細(xì)菌表面抗原結(jié)合促進吞噬細(xì)胞的吞噬功能，NmCPS能有效抑制C3b在細(xì)菌表面的沉積。Ram等"研究發(fā)現(xiàn),B群和C群CPS所含的唾液酸結(jié)構(gòu)能減少C31)蛋白與自身莢膜的結(jié)合；A群CPSC6位的羥基被磷酸化，同時細(xì)胞表面C3b的數(shù)量減少，原因可能是C3b與細(xì)胞表面共價結(jié)合時所需要的親合試劑匱乏;C

11、PS結(jié)構(gòu)中的甘油側(cè)鏈對親合的羥基產(chǎn)生空間位阻，也會導(dǎo)致細(xì)胞表面C3b的數(shù)量減少，但在W135群和Y群CPS中，會出現(xiàn)相反現(xiàn)象;抵抗補體介導(dǎo)的殺傷作用：NmCPS處于菌細(xì)胞的最外層，能保護萌體避免補體的損傷作用。Lewis等3研究報道,NmCPS能抵抗補體介導(dǎo)的殺傷作用，無CPS或者CPS變異的Nm菌株對人體血清殺傷作用高度敏感。12.2逃避宿主特異性免疫大多數(shù)細(xì)菌在宿主特異性免疫反應(yīng)下會被清除，但B群CPS與人體內(nèi)NCAM結(jié)構(gòu)相似,不能引起機體的特異性免疫反應(yīng)。NmCPS易發(fā)生莢膜互換是逃避宿主特異性免疫的另一機制O1.2.3影響細(xì)菌與宿主細(xì)胞的黏附Nm與宿主細(xì)胞的黏附分兩個階段:起初黏附階段

12、和緊密黏附階段0Deghmane等發(fā)現(xiàn)，在起初黏附階段，CPS與菌毛能促進Nm黏附于細(xì)胞表面;但在緊密黏附階段，由于CPS遮蓋了Nm菌體表面的結(jié)合位點而阻礙細(xì)菌與細(xì)胞緊密接觸;CPS是阻礙Nm與宿主細(xì)胞緊密黏附的表面結(jié)構(gòu)，當(dāng)Nm與宿主細(xì)胞的黏附由第-階段轉(zhuǎn)為第二階段時，通過CrgA蛋白介導(dǎo)使合成CPS的基因表達下調(diào)，以促進Nm對宿主細(xì)胞的黏附和入侵。2腦膜炎奈瑟菌莢膜多糖的合成NmCPS的合成途徑為ATP-結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體依賴途徑(乂稱為ABC轉(zhuǎn)運體依賴途徑)r，7*，8JoCPS的合成一般分為多糖合成的起始、糖重復(fù)單元的合成和多糖的輸出三個部分。CPS合成的起始位點在內(nèi)膜的胞質(zhì)面，由糖基轉(zhuǎn)移酶(

13、Glycosyltransferase,GT)催化合成多糖重復(fù)單元后通過ABC轉(zhuǎn)運體依賴途徑由內(nèi)膜胞質(zhì)面轉(zhuǎn)運至細(xì)胞表面。ABC轉(zhuǎn)運體系統(tǒng)由兩個相同的核昔酸結(jié)合域(Nucleotide-bindingdomain,NBD)的多肽和兩個跨膜結(jié)構(gòu)域(Transmembranedomain,TMD)的多肽組成，完成多糖從內(nèi)膜轉(zhuǎn)運到細(xì)胞表面還需要另外的兩種組分，多糖聚合酶(Polysaccharideco-polymerase-3,PCP-3)和外膜蛋白(Outermembranepolysaccharideexporter,OPX)職。這兩種組分形成蛋白復(fù)合物促使CPS流出。CPS具有保守的糖脂還原末

14、端，通過多聚2-酮基.3-脫氧辛酸與CPS還原端相連接，在CPS的輸出過程中起錨定多糖的作用加。2.1多糖合成的起始NmCPS合成起始位點在細(xì)胞膜的胞質(zhì)而。起始階段需要糖基核昔酸供體和一種未知的內(nèi)源性受體的參與，并旦鏈的延伸需要漸進性GT20,o細(xì)胞質(zhì)中存在大量的糖基核昔酸，GT轉(zhuǎn)移糖核苜酸供體上的糖殘基到受體上形成多糖延伸的起始結(jié)構(gòu)糖鏈在不同的GT作用下開始延伸形成一個個重復(fù)單元)。2.2糖重復(fù)單元的合成糖再復(fù)單元的合成一般經(jīng)歷三個過程:延伸，翻轉(zhuǎn)和聚合。在NmABC轉(zhuǎn)運體依賴途徑中,GT在多糖垂復(fù)單元的合成中起重要作用。結(jié)構(gòu)變化多樣的GT,催化特異糖基轉(zhuǎn)移到CPS非還原端使糖鏈延伸,4*2

15、2,O糖重復(fù)單元的聚合發(fā)生在細(xì)胞膜的胞質(zhì)面，糖鏈通過末端糖脂錨定在細(xì)胞膜上,經(jīng)內(nèi)膜移位到周質(zhì)間隙時發(fā)生翻轉(zhuǎn)聚合。2.2.1 A群和X群CPS的合成Fiebig等)在A群CPS的合成中，利用M乙酰葡萄糖胺異構(gòu)曲催化UDP-GlcNAc生成UDP.ManNA,其在多聚甘露糖磷酸轉(zhuǎn)移前作用下，轉(zhuǎn)移ManNAc-lP到糖鏈的非還原端。其中/乙酰前萄糖胺異構(gòu)酶由cps基因簇中的csaA編碼，多聚甘露糖磷酸轉(zhuǎn)移酶由csaB編碼。Muindi等報道，合成X群CPS的GT是*乙酰菊萄糖基磷酸轉(zhuǎn)移酶，在該酶的催化作用下，Glc-NAc-lP從UDP-GlcNAc轉(zhuǎn)移到GlcNAc-IP寡糖的4-0H上形成多糖重

16、復(fù)單元。在合成X群CPS的過程中,乙酰葡萄糖磷酸轉(zhuǎn)移酶在pH為7.07.6的HEPES緩沖液中活性最大。合成A群、X群CPS的GT與隱形蛋白家族具有顯著的序列相似性B群和C群CPS的合成B群和C群CPS中的cr-2,8-M乙酰神經(jīng)氨酸(a-2,8-A-acetylneuramieacid,a-2,8NeuAc)或a-2,9NeuAc結(jié)構(gòu)均由單一結(jié)構(gòu)域的多聚唾液酸轉(zhuǎn)移W(Polysialyltransferase,PST)合成日，。起初,siaA基因產(chǎn)物催化6-磷酸氮乙酰葡萄糖胺生成6-磷酸氮乙酰甘露糖胺,上述產(chǎn)物去磷酸化，與磷酸烯醇式丙酮酸縮合生成Neu5Ac,Neu5Ac被活化后生成CMP-

17、伊Neu5Ac；在PST的催化作用下，CMP缶NeuAc結(jié)構(gòu)中的NeuAc轉(zhuǎn)移到延伸的唾液酸聚合鏈上。PST具有廣泛的底物特異性，針對不同連接方式的底物，都可延伸為”2,8或m2,9糖昔鍵連接的唾液酸鏈。嵌合PST試驗表明，控制產(chǎn)物連接的部分蛋白位于前100個氨基酸上，該區(qū)域的微弱變化會導(dǎo)致供體和受體結(jié)合口袋方位的改變，從而使唾液酸分子間產(chǎn)生各種不同的連接方式126-27102.2.2 W135群和Y群CPS的合成W135群和Y群CPS的結(jié)構(gòu)相似，只是己糖C4位置的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)不同。W135群含半乳糖，Y群含葡萄糖，兩者的微弱差異足以提供不同的抗原表位，從而使機體產(chǎn)生針對各自多糖聚合物的特異性

18、抗體】。兩者的CPS均由結(jié)構(gòu)上為單一多肽的酶聚合而成，多肽相似度為97%。與PST不同，合成W135和Y群CPS的酶屬于GT-4家族，包含N末端己糖轉(zhuǎn)移的和C末端唾液酸轉(zhuǎn)移酶兩個結(jié)構(gòu)域。己糖轉(zhuǎn)移酶與唾液酸轉(zhuǎn)移能的活性歸因于GT-B折疊。W135群和Y群CPS結(jié)構(gòu)中，半乳糖、葡萄糖的特異性是由己糖轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域上的310位單一敏基酸決定)。含脯基酸殘基的酶具有半乳糖基轉(zhuǎn)移前活性，而含甘基酸的能具有葡萄糖轉(zhuǎn)移瓣活性。這些殘基位于EX7E基序中間,體現(xiàn)了GT-4酶保守的特性，并協(xié)調(diào)與UDP-糖供體的結(jié)合。2.3多糖的輸出CPS的輸出系統(tǒng)中NBI)高度保守，含有結(jié)合ATP的核心結(jié)構(gòu)域。NBD可偶聯(lián)ATP

19、水解，通過TMD結(jié)構(gòu)的變化，使復(fù)雜分穿過膜轉(zhuǎn)移到細(xì)胞表面或者使小分子物質(zhì)轉(zhuǎn)移進細(xì)胞3叫O細(xì)萌多糖合成系統(tǒng)中的NBT)有兩種類型，一種發(fā)現(xiàn)于脂多糖。抗原和S-層多糖的生成過程中，該類型含有延伸的C-末端結(jié)構(gòu)域；另一種類型的NBD缺乏結(jié)合糖鏈的結(jié)構(gòu)，該類型的NBD可見于CPS的輸出系統(tǒng)邊。Willis等研究表明，多糖最終從胞質(zhì)面轉(zhuǎn)運到細(xì)胞表面的過程是由PCP-3-OPX蛋白復(fù)合物所完成。ABC轉(zhuǎn)運體輸出CPS的具體機制目前尚不清楚，但末端糖脂對CPS的輸出很重要，它可能提供了一種輸出信號SoVimr等乂發(fā)現(xiàn),蛋白間相互作用可能促使CPS的合成與輸出偶聯(lián),當(dāng)合成與輸出分離時，導(dǎo)致CPS合成失控;旦鏈

20、位度可能是通過鏈延長前的活性和ABC轉(zhuǎn)運體來控制的。ABC轉(zhuǎn)運體依賴途徑具有多種細(xì)胞功能，除了多糖的運輸外，還包括營養(yǎng)物質(zhì)的攝入及藥物、蛋白等的運輸明。3腦膜炎奈瑟菌莢膜多糖合成及相關(guān)基因Nm染色體大小為2.0X1062.2x106bp,包含2000個基因。其中與莢膜多糖合成相關(guān)的基因定位于約24kb的毒力島上，該毒力島被稱為cps基因簇。（必基因簇包含六個部分，與合成和轉(zhuǎn)運有關(guān)的主要是前三部分。由于合成CPS的基因位點存在一致性,各亞群莢膜合成相關(guān)基因易發(fā)生重組，出現(xiàn)水平基因轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。各菌群水平基因轉(zhuǎn)移島（Islandofhorizontaltransfer,IHT）之間的互換使得英膜發(fā)生轉(zhuǎn)

21、換或脫落。調(diào)控NmCPS合成的主要方式是cps在轉(zhuǎn)錄階段的調(diào)控和IHT的重組互換。3.1cps基因簇的結(jié)構(gòu)及功能cps基因簇與NmCPS的合成及轉(zhuǎn)運有關(guān)。該基因簇由六個區(qū)域組成，分別為A、B、C、D、D'、E區(qū)A區(qū)包含多糖合成的操縱子3，,syn）,其中B、C、W135、Y血清群的A區(qū)都是由siaA、siaB、si«D四部分構(gòu)成，siaA、siaB、sM在所有群中都很保守，旦功能相同；X群A區(qū)含有三個開放性閱讀框,cs'A、cmB、cs%C,當(dāng)CPS寡糖引物存在時,cs先A能產(chǎn)生具有免疫學(xué)和化學(xué)特性的多糖長鏈聚合物B區(qū)包含如基因，負(fù)責(zé)脂質(zhì)的修飾，Nm的lipA、l，p

22、B與syu.ctr操縱子基因位點是分隔開的編碼的蛋白參與多糖聚合物還原端二酰基磷酸基團的取代，當(dāng)妣、邸B缺失時，胞內(nèi)脂化的英膜多糖會大量堆積】。C區(qū)包含5基因，負(fù)責(zé)莢膜多糖轉(zhuǎn)運。D區(qū)負(fù)責(zé)脂多糖的合成。D，區(qū)是由D區(qū)基因復(fù)制修飾而來。E區(qū)包含了tex的同源基因網(wǎng)。cps基因簇的表達受控于I）上的多聚胞昔系統(tǒng),A區(qū)syn、C區(qū)ctr操縱子的啟動子在轉(zhuǎn)錄水平上對CPS合成具有調(diào)控作用。3.2syndr操縱子啟動子在轉(zhuǎn)錄水平上對CPS合成的調(diào)控synA、swB、synC、synD與莢膜生成有關(guān)，ctrA、以rB、cZrC、cl）與膜轉(zhuǎn)運有關(guān)，A區(qū)syn、C區(qū)ctr操縱子的啟動子對CPS合成具有調(diào)控作用

23、。syn.ctr操縱子的啟動子位于134bp的間隔區(qū)，當(dāng)134bp處轉(zhuǎn)錄序列發(fā)生插入突變或缺失時,會導(dǎo)致arA、c"B、ctrC、c”D和synA、synB、synC、synD明顯減弱或消失，并伴隨著莢膜缺失：迎。除啟動子外,syn上游的5,非翻譯區(qū)（70bp）被發(fā)現(xiàn)有一個直接重復(fù)區(qū)和一個反向重復(fù)區(qū)。直接重復(fù)區(qū)的變異能上調(diào)syn.ctr的轉(zhuǎn)錄；反向重復(fù)區(qū)包含syn起始密碼，可能作為操縱子轉(zhuǎn)錄的調(diào)控元件。通過等位基因交換，使染色體轉(zhuǎn)錄報告系統(tǒng)lacZ-ermC和synctr啟動子融合表達后,發(fā)現(xiàn)生物合成操縱子轉(zhuǎn)錄水平比莢膜轉(zhuǎn)運操縱子高出4倍，兩啟動子在靜止期活性增加，表現(xiàn)出特異的調(diào)控作

24、用加圳。NmCPS基因的表達受控于基因開關(guān)機制及轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。2.3 1HT轉(zhuǎn)換與CPS合成Nm基因組的另一特點是多個IHT之間的轉(zhuǎn)換，但這種情況并不多見。其中,IHT-A與CPS的合成和轉(zhuǎn)運相關(guān)JHT-A1包含莢膜多糖合成與轉(zhuǎn)運相關(guān)基因JHT-A2可能編碼ABC轉(zhuǎn)運體。IHT轉(zhuǎn)換與基因序列滑動借配和IS元件移動有關(guān)皿。據(jù)文獻41報道,1997年，Swartley等在美國西北太平洋地區(qū)，分離出具有相同基因型的B和C群的Nm,經(jīng)PCR、DNA測序、Southernblot等手段分析，發(fā)現(xiàn)這些菌株的PST編碼基因發(fā)生了同源互換;2009年,Beddek等對新西蘭不太常見的W135分離株（ST-1

25、1）的莢膜基因的來源進行了研究，運用porA、porBg等位基因和MLST遺傳分型方法，對107個Nm分離株進行分析，發(fā)現(xiàn)W135分離株（ST-11）莢膜基因來源于C血清群。IHT的轉(zhuǎn)換也使得Nmcps基因簇缺失，并增加了NmCPS合成的復(fù)雜性和多樣性。4結(jié)語CPS是細(xì)菌重要的毒力因子和鑒別標(biāo)志，也是細(xì)菌性多糖疫苗的主要成分，對不同NmCPS合成及相關(guān)基因的掌握是制備流腦多糖疫苗的首要前提。各菌群CPS合成途徑不完全相同，GT是CPS合成的關(guān)鍵因素。目前,GT已被廣泛用于體外多糖合成試驗,這使得體外合成細(xì)菌CPS成為可能皿）。對CPS合成途徑的研究，有助于優(yōu)化Nm培養(yǎng)條件，提高GT的催化效率，

26、實現(xiàn)NmCPS工業(yè)化生產(chǎn)。基因組學(xué)與分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，使NmCPS合成相關(guān)基因的研究受到廣泛關(guān)注。隨著Nm各血清群cps基因簇的破譯，合成與轉(zhuǎn)運多糖相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)和功能得到更清晰的闡明，有望揭示CPS合成機制，為安全、有效的流腦多糖及多糖結(jié)合疫苗的研究提供理論依據(jù)。參考文獻：IHillDJ,GriffithsNJ,BorodinaE,etal.CellularandmolecularbiologyofNeisseriameningitiducolonizationandinvasivediseaseJJ.ClinicalScience,2010,118；547-564.2RouphaelN

27、G,StephensDS.NeMeriameningitidis:biology,microbiology,andepidemiology'J.MethodsMoIBiol,2012,799:1-20.3張紫恒，趙峽，于廣利，等.細(xì)萌英膜多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)J.生命化學(xué),201】，31(5):688-609.4WillisLM,WhitfieldC.Structure,biosynthesis,aiidfunctionofbacterialcapsularpolysaccharidessynthesizedbyABCtrans|x»rter-dependentpathwaysJ.C

28、arbohydrKes.2013,378：35-44.5GaspariniK,PanattoD.MeningococcalglycoconjugatevaccineJ.HumanVacc,20lI,7(2)：!70-!82.6GranoffDM.ReviewofMeningococcalgroupBvaccines!J.ClinInfectDis.2010,50(Supp.2)：S54-65.7 房明.趙志強.朱莉萍.細(xì)曲多精中氧乙酰基特性的研究進展J.微生物學(xué)免疫學(xué)進展,2015.43(3)：63-67.8 Xie0,BolgianoB.GaoF,rfal.Characterizationo

29、fsize,structureandpurityofserogroupXNeisseriameningitidispoly皿:charide,anddevelopmentofaiiassayforquantificationofhumanantilxxliesJ.Vaccine,2012,30(40):5812-5823.|9ClausH.BorrowR,AchtmanM,etal.Geneticsofcapsule0-acctylationinserogroupC,W135andYmeningococciJ.MolMicl,2004,51(1):227-239.10：JonesC.Izjme

30、rcinierX.UseandvalidationofNMRassaysfortheidentityandO-acet)'lcontentofcapsularpolysaccharidesfromNeisseriameningitidisusedinvaccinenianufacturefJ.JPhamiBiomedAnal,2002,30(4)J233-1247.11Ix)ngworthE,FemstenP.MininniTL.elal.O-AcetylationstatusofthecapsularpolysaccharidesofserogroupYandW135meningoc

31、occiisolatedintheUK.J.FEMSImmunolandMedMicrobiol,2002.32(2)：119-123.12BerryDS,LynnF,LeeCH,etal.Effectof0acetylationofNeisseriameningitidsserogn>upacapsularpolysaccharideondevelopmentoffunclionalimmuneresponses.J|.InfcclImmun.2002,70(7):3707-3713.13 SpinosaMH,Pn)gi(laC,BucciC,eZ»l.TheNeissria

32、meningitidiscapsuleisimportantforintracellularsurvivalinhumancellsJ.InfectionandImmunity,2007,75(7)：3594-3603.14 RamS,LewisLA,AgawalS.MeningococcalgroupW-135andYcapsular|x>lysaccharidesparadoxicallyenhanceactivationofthealternativepathwayofcomplementJ|.JBiolChcm,2011,286(J0)：8297-8307.15Jl-rwisLA

33、.RamS.Meningococcaldiseaseandthecomlementsystem.Virulence,2014,5(I)：98-126.16 DeghmaneAE,GiorginiD.IanibeM,etal.Down-regulationofpiliandcapsuleofNeisseriameninguidisuponcontactwithepithelialcellsismediatedbyCrgAregulatoryprotein'J.MolecularMicrobiology,2002,43(6):1555-1564.17 曾化偉，鄭惠華，陳惠.等.微生物多舫的

34、生物合成及代謝匚程研究進展J.陜西理工學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版).2015,31(4)：49-59.ll8"rueK,EordRC,WillisLM.Functionalandstructuralcharacterizationofpolysaccharideco-polymeraseproteinsrequiredforpolymerexportinATP-bindingcassrttrlransj)orter-dew?n(lentcapsulebiosynthesispathwaysJ.JBiolChem,2011,286(19):16658-16668.19GeorgeAM,Jon

35、esPM.Perspectivesonthestructure-functionofABCtransporters:theswitchandconstantcontactnuxlelsJ.ProgBiophysMolBiol,2012,109(3):95-107.20陳羞苗，王未名，祝清俊.細(xì)窗多糖的生物合成機制J.微生物學(xué)報.2010,50(12):1583-1589.21JChangA,SinghS,PhilipsGN.eZal.Glycosy11ransferascrstructuralbiologyanditsroleinthedesigncatalystsforglycosylati

36、onJ.CurrOpinBiotechnol,2011,22(6)：800-808.22'HomaiiowA.HasclhorstT.StummeyerK,rtal.Biochemicalandbiophysicalcharacterizationofthesialyl/hexosyl-transferasesynthesizinglhemeningococcisrrogroupWI35heteropolysaccharidecapsuleJ.JBiolChem.2013,288(17)：11718-11730.23jFicbigT,FreibergerF,PintoV,etal.Mo

37、lecularcloningandfunctionalcharacterizationofcomponentsofthecapsulebiosynthesiscomplexofNeisseriameningilidessrrogroupA:towardinvitrovaccineproductionJJBiolChem,2014,289(28)：19395-194()7.24MuindiKM.MeCarthyPC,WangT,rtal.CharacterizationofthemeningococcalsemgroupXcapsuleN-acetylglucosamine-1-phosphot

38、ransferaseJ.Glycobiology,2014,24(2)：139-149.!25SobhanyM,KakutaY.SugiuraN.Thestructuralbasisforacoor-dinatedreadioncatalyzedbyabifunctionalglycosyltransferaseinchondroitinbiosynthesisJ.JBio!Chem,2012,287(43)：36022-36028.：26PetersonDC,ArakereG,JustineV.etal.Characterizationandacceptorpreferenceofasolu

39、blemeningococcalgroupCpolysialyl-tran»feraseJj.JBacteriol,2011,193(7)：1576-1582.27SltenbergenSM,EricBV.Functionalrelationshipsofthesiaiyl-transferaseMinvolvedincxpn-Hsionofthe|x>lysialicacidcapsulesofEsfhcrichiacollKIandK92andNeisseriameningitidisgroupsBorCJ.JBiolChrm,2(X)3,278(17):15349-153

40、59.28MooreSL,UitzC,LingCC,etal.EpitopespecificitiesofthegroupYandW-135polysaccharidesofNeisseriameningitidisJ.ClinVaccineImmunol.2007,14(10)：1311-1317.；29ClausmH,StummeyerK.BatziliaJ,etal.Aminoacid310determinesthedonorsubstratespecificityofsrn>gn)upW-135andYpolymerasesofNeisseria.MolMicrobiol.200

41、9,71(4)：960-971.30ManjulaM,PampaKJ,KumarSM,etal.CrystalstructureofATP-bindingsubunitofanABCtransporterfromgrobacilluskuu-stophilusJ.BiochemicalBiophysResCommun,2015,459(I):113-117.31CuthbertsonL,KosV,WhitfieldC.ABCtransjxjrterainvolvedinexportofcellsurfaceglycoconjugates(J.MicrobiolMolBiolRev,20l0,7

42、4(3)：341-362.32,SilverHP.PriorK,NsahlaiC,elal.ABCtransportersandtheexportofcapsularpolysaccharidesfromgram-negativebacteria.ResMicrobiol2001,152(3/4)：357-364.33LisaMW,JacekS,MichardMR,etal.ConservedglycolipidterminiincapsularpolysaccharidessynthesizedbyATP-bindingcassettetransporter-dependentpathway

43、sinGram-negativepatho-gsMJ.ProcNatlAcadSciUSA.2013,110(19):7868-7873.34VimrER,Steenl)«TgeiiSM.Earlymolecular-recognitioneventsinthesynthesisandexportofgroup2capsularpolysaccharidesJ.Microbiology,20()9,155(I):9-15.35 FiebigT,BertiF,FreibergerF.rfal.FunctionexpressionofthecapsulejMilymeraseofNeis

44、seriameningitidisscrognmpsX:anewperspectiveforvaccinedevelopmentJ.Glycobiology,2013,24(2)：1-9.36 TzengYL,DaliaAK,StroleCA,etal.Transl(K：ationandsurfaceexpressionoflapidatedserogroupBcapsularpolysaccharideinNeisseriameningitidisfJ.InfectImmun,2(X)5,73(3)：1491-1505.37 HarrisonOB,ClausH,JiangY.eZal.DescriptionandnomenclatureofNeisseriameningitulescapsulelocus|J.EmrrgInGxttDis.2013,19(4):566-573.38 TzengYL.SwartleyJS,MillerYK.rtal.Transcriptionalregulationofdivergentcapsulebiosynthesisandtransportopronprotnol-rrsinscrogroupBNeisseriameningitidisJ.Infectiinmun,2001.69(4)：2502-2511.39.SiddiqueA