1、腫瘤患者紅細胞免疫功能與SAPO                 作者：王廣蘭,曹陽,張長遠,郭同生,徐萬青 【關鍵詞】 腫瘤【摘要】 目的 探討腫瘤患者紅細胞免疫功能與SAPO-1/Fas、TNF-、NO表達水平的相關性及相互作用。方法 采用酵母菌-紅細胞免疫黏附試驗，對45例化療前和17例化療后病情緩解者進行了紅細胞C3b受體花環試驗（RBC-C3bRR）和紅細胞免疫復合物花環試驗（RBC-ICR）及ELISA法對107例腫瘤患者及

2、22例健康人進行了SAPO-1/Fas的檢測，其中部分進行了TNF-、NO檢測。結果 腫瘤患者血清SAPO-1/Fas表達水平明顯高于健康對照組（P<0.001），且與腫瘤種類無關；17例化療后病情緩解者SAPO-1/Fas表達水平比化療前顯著降低(P<0.05)。45例和17例腫瘤患者血清同時檢測SAPO-1/Fas、TNF-表達水平及SAPO-1/Fas、NO含量并進行單因素直線相關分析，分別為r=0.76，P<0.05，r=0.72，P<0.05，呈顯著正相關。RBC-C3bRR明顯降低，45例腫瘤患者化療前又明顯低于17例病情緩解者(P<0.01)，RBC

3、-ICR明顯高于健康人，45例化療前腫瘤患者RBC-ICR明顯高于17例化療后病情緩解者(P<0.01)。結論 腫瘤患者RBC-ICR和SAPO-1/Fas、TNF-、NO表達水平明顯增高，呈顯著正相關，RBC-C3bRR明顯降低。為研究紅細胞免疫與淋巴細胞免疫的相互關系及腫瘤治療提供了新的理論基礎和實驗依據。【關鍵詞】 腫瘤；SAPO-1/Fas；紅細胞免疫；1型補體受體細胞凋亡（apoptosis，APO）和紅細胞免疫系統是機體清除感染、變異、衰老的細胞，維持自身正常生理平衡的一種調節方式；同時腫瘤細胞及其相關抗原可能直接旁路激活補體，吸引紅細胞（RBC） 1 型補體受體（CR1）免

4、疫黏附腫瘤細胞和相關抗原，并將它們運輸至肝脾網狀內皮系統，由巨噬細胞銷毀1。近年來，研究發現APO-1與其配體（FasL）通常被認為是致死基因，因為他們的相互作用往往導致表達APO-1的細胞發生APO而受到人們的廣泛關注。有研究報道2，人類許多惡性腫瘤表現為APO功能下降。在腫瘤患者免疫活性細胞如致敏T淋巴細胞、自然殺傷細胞（NK）等通過Fas系統活化介導細胞毒作用，以凋亡方式清除腫瘤細胞。免疫活性細胞通過其表面的FasL結合表達Fas的靶細胞，從而使其凋亡，而APO-1可與FasL結合，阻礙了靶細胞凋亡。同時一氧化氮（NO）含量超量也可引起基因突變和誘發腫瘤。本研究采用酵母菌-紅細胞免疫黏附

5、試驗進行了紅細胞C3b受體花環試驗（RBC-C3bRR）和紅細胞免疫復合物花環試驗（RBC-ICR）3及ELISA法測定SAPO-1/Fas分子，并對NO含量和腫瘤壞死因子（TNF-）的相關性進行了分析研究 ,腫瘤患者紅細胞免疫功能與SAPO-1/Fas、TNF-、NO表達水平的實驗研究 ?，F將結果報告如下。1 材料與方法1.1 研究對象 107例腫瘤患者，男80例，女27例，平均年齡55.48歲，患者均為我院19992004年經臨床和實驗檢查確診的住院患者。22例健康對照組血清來自健康體檢人群，男18例，女4例，平均年齡22.27歲。1.2 材料保存（同時取肝素抗凝血1ml用于紅細胞免疫黏附

6、試驗）。檢測 以雙抗夾心ELISA法，購自邦定公司，按說明書操作（自行包被）。1.3 方法×107/ml應用液備用。×108/ml應用液備用。水浴30min。取出用手輕輕搖均，每管各加0.1ml生理鹽水，混勻后再各加0.25戊二醛0.025ml，輕輕混勻，取1/3量，水平涂片，吹干，甲醇固定，瑞氏染色，濕片在高倍鏡下計數。1個紅細胞結上2個或2個以上酵母菌為1個花環。計數200個紅細胞計算出百分率。第一管為RBC-C3bRR，第二管為RBC-ICR。2 結果2.1 腫瘤患者與健康對照組血清SAPO-1/Fas表達水平及NO含量比較 見表1。結果顯示，腫瘤患者血清SAPO-1

7、/Fas表達水平及NO含量明顯高于健康對照組，并提腫瘤患者紅細胞免疫功能與SAPO-1/Fas、TNF-、NO表達水平的實驗研究(2) 且與腫瘤的種類無關。表1 腫瘤患者與健康對照組人血清SAPO-1/Fas表達水平及NO含量比 （略）注：各種腫瘤之間比較P0.05；與對照組比較，P均0.0012.2 腫瘤患者化療前后SAPO-1/Fas水平變化 在接受化療前后分別測SAPO-1/Fas水平的患者中，化療后病情緩解17例，化療前的表達水平為(8.15±0.11)ng/ml，化療后的表達水平為(7.05±0.59)ng/ml，進行配對資料t檢驗，P0.05。提示SAPO-1/

8、Fas水平隨病情緩解顯著降低。因化療后部分病情進展者例數少，未予統計。2.3 腫瘤患者與健康對照組TNF-水平比較 45例腫瘤患者血清TNF-水平(6.26±1.74)ng/ml，較健康對照組（22例）的(2.04±0.51)ng/ml顯著升高（P0.05）。腫瘤化療后患者血清TNF-水平呈下降趨勢，與腫瘤組比較差別無顯著性（P0.05）。2.4 腫瘤患者血清SAPO-1/Fas與TNF-、NO含量的相關性 將45例腫瘤患者同時測定的SAPO-1/Fas與TNF-血清水平及17例腫瘤患者同時測定SAPO-1/Fas與NO含量進行單因素直線相關分析，分別為r=0.76,P0.

9、05,r=0.72,P0.05。結果顯示：腫瘤患者血清SAPO-1/Fas與TNF-、NO呈顯著正相關。2.5 腫瘤患者化療前后與健康人紅細胞CR1活性與攜帶IC含量變化比較 45例腫瘤患者化療前較健康對照組RBC-C3bRR明顯降低，而又明顯低于17例病情緩解患者，差異有非常顯著性（P0.01），而17例化療后病情緩解者和45例化療前腫瘤患者的RBC-ICR明顯高于健康對照組，45例化療前腫瘤患者RBC-ICR亦明顯高于17例化療后病情緩解者，其比較差異均有非常顯著性（P0.01），見表2。表2 健康對照組與化療前腫瘤患者及化療后病情緩解者結果比較 （略）注：與健康對照組比較，*P0.013

10、 討論Fas抗原又名APO-1，CD95，是細胞膜表面的一種凋亡相關分子，是一種由319個氨基酸組成的 型跨膜糖蛋白，屬于TNF和神經生長因子（NGF）受體家庭成員。主要以膜受體的（mFas）形成存在，也可出現可溶性APO-1（SAPO-1/Fas）分子。近年來研究發現SAPO-1/Fas及紅細胞CR1在調節免疫功能維持體內環境的平衡方面起著重要作用。資料顯示：SAPO-1/Fas和紅細胞免疫物質與腫瘤的發生、發展有著密切的關系4，5。Fas基因位于人第10號及小鼠第19號染色體，Fas抗原為FasL的受體效應細胞，FasL與靶細胞Fas結合時，可誘導靶細胞凋亡；而FasL與Fas結合，又可以

11、控制這些靶細胞的凋亡。Cheng等研究發現一種突變的人Fas基因，可編碼產生一種SAPO-1。由于突變基因mRNA缺乏編碼Fas分子跨膜結構區時，以SAPO-1/Fas的第6外顯子，阻斷了凋亡信號的傳導，導致體內自身反應T、B細胞的異常積聚。以同樣水平的該SAPO-1/Fas分子注射小鼠體內時，可觀察到明顯的T細胞凋亡受抑68。本實驗結果顯示：腫瘤患者的SAPO-1/Fas水平上升，可競爭性抑制FasL與Fas的相互作用，造成Fas介導的A      PO減少；適量的TNF-、NO對機體的保護反應是必須的，但是，過量的TNF-、NO對機體產生損傷反應。近

12、年來，許多學者發現TNFa不但可以引起實體瘤發生出血性和缺血性壞死，還具有促進某些細胞生長的作用9。體外研究發現，TNF能夠使白血病細胞增殖，其作用機制是TNF作為APO的促發因子誘導APO。因此，SAPO-1/Fas與TNF-、NO、RBC-C3bRR、RBC-ICR的改變與免疫系統紊亂和腫瘤的發生、發展有著密切的關系；對腫瘤患者的病情進展和轉歸具有重要的參考價值；也為解釋腫瘤細胞逃避免疫監視及白血病的發生提供一個可能的機制。本研究尚發現腫瘤患者NO含量顯著增高，并與SAPO-1/Fas呈正相關。紅細胞免疫是機體免疫的一個重要的組成部分，與免疫系統內其他細胞的功能存在一定相關性，RBC CR

13、1具有免疫黏附C3b等的能力，其活性的測定可作為評價RBC免疫黏附功能強弱的主要指標。自1981年Siegel提出了紅細胞免疫系統至今，研究發展迅速，大量研究表明紅細胞免疫參與腫瘤的發生發展過程。腫瘤患者的RBC CR1分子明顯減少時，可能與腫瘤細胞釋放抑制物，影響RBC CR1數量與活性，以及RBC CR1基因缺陷有關；如果RBC CR1清除循環免疫復合物（CIC）能力下降，必然使CIC含量增加，封閉淋巴細胞功能，使機體抗腫瘤特異免疫功能受損；RBC CR1天然免疫黏附活性下降，RBC不能及時將進入血循環中的癌細胞和致病原運至肝脾網狀內皮系統銷毀，使癌細胞容易血行轉移，而且可使致癌因子各種抗

14、原存留血循環和病灶局部時間延長，更易激活B淋巴細胞，產生更多封閉抗體和自身抗體，腫瘤患者往往在血循環中含有自身抗體，血清出現封閉抗體、CIC抑制腫瘤的適應性免疫反應和天然免疫炎癥的發生，可能與此有關1。本研究結果顯示：腫瘤患者RBC-C3b受體活性明顯降低，RBC-ICR明顯增高，與正常人比較差異有非常顯著性（P<0.01）；化療前腫瘤患者RBC-C3bRR明顯低于化療后病情緩解者，其RBC-ICR化療前腫瘤患者明顯高于化療后病情緩解者，差異均有非常顯著性P0.01）。證實了腫瘤患者化療前后的病情發展過程中，RBC-C3bRR和RBC-ICR有顯著變化。由于腫瘤患者產生大量的IC，占據R

15、BC膜上的C3b受體空位或破壞其受體，使RBC-C3b受體下降及活性降低，IC明顯增高。這種現象對腫瘤患者化療前后及病程觀察有重要參考價值。本研究對腫瘤患者的SAPO-1/Fas表達及TNF-、NO含量和紅細胞免疫相關性及相互作用進行探討，結果反映了紅細胞免疫與SAPO-1/Fas表達及TNF-、NO血漿中的水平和RBC-ICR明顯增高，可抑制SAPO-1/Fas介導的APO使腫瘤細胞凋亡減少，說明在腫瘤細胞發展過程中可能起著非常重要的作用，因此用于腫瘤患者的研究，通過合適而有效的途徑使用外源性的FasL與腫瘤細胞上的SAPO-1/Fas結合能起到殺傷腫瘤細胞的作用，增加腫瘤細胞APO。這將有

16、可能成為惡性腫瘤治療新的行之有效的方法，也為研究RBC免疫與淋巴細胞免疫的相互關系及腫瘤治療提供了新的理論基礎和實驗依據?！緟⒖嘉墨I】2 Wyllie AH. Apoptosis and regulation of cell numbers in normal and neoplastic tissues. Cancer Metastasis Rev，1992，11(2):95-103.4 Murakami M, Sasaki T, Miyata H, et al. Fas and fas ligand: expression and soluble circulating lerels in bile duct carcinoma. Oncol Rep,2004,11(6):1183-1186.5 郭峰，路永珍.紅細胞免疫學新探（上卷）.南京：南京大學出版社，1993，1-171.6 Cheng JH. Characterization of human fas gene:exon/intron organization and promoter region. Immunol,1995,154:1239-1245.8 王廣蘭,曹陽,郭