1、、微生物1.培養基成分 培養基的化學成分包括 水、無機鹽、碳源、氮源、生長因子2、NaHCO等無機碳源（自養）；糖類、石油、生粉餅等有機碳源。異養微生物只 能利用有機碳源。單質碳不能作為碳源。2、NH、NO-、NlH（無機氮源）蛋白質、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機氮 源）等。只有固氮微生物才能利用 N 0乳酸桿菌時需要在培養基中添加 維生素，培養霉菌時須將培養基的PH調至酸性, 培養細菌是需要將PH調至中性或微堿性，培養厭氧型微生物 是則需要提供 無氧的條件分類物理性質可分為液體培養基、半固體培養基和固體培養基按照用途可將培養基分為選擇培養基和鑒定培養基。選擇培養基是指在培養基 中加入某

2、種化學物質,以抑制不需要的微生物生長，促進所需要的微是根據微生物的定培養基制在培養格的中加入某種指 將未接種的培養基在恒溫箱中保溫 1 劑或化學藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物。說明培養加入青霉素 是成功的，否則需要重新制備。-美藍培養基鑒別大腸桿菌）生物的生長。鑒別培養基指示分離得到酵母菌和霉菌，利用伊紅人工合成培養基和天然培養基制備牛肉膏蛋白胨培養基 稱量時，牛肉膏蛋白胨都易吸潮，稱量要迅速融化加瓊脂時要不斷攪拌，防止脂糊底而導致燒杯破裂滅菌時，裝有培養基的錐形瓶要用高壓 蒸汽滅菌法，培養皿要用干熱滅菌法平板冷凝后需要倒置，既可以使培養基表面的水分更好地揮發，防止皿蓋上冷凝的水珠落

3、入培養基，造成污染。（微生物培養的時候也需要倒置，另一個原因：由于重力的作用使培養基表面及次層能富集微生物生長所需的營養物質，利于微生物生長。）2滅菌與消毒消毒 較為溫和的理化方法，僅殺死物體表面或內部的部分有害微生物。包括：煮沸消毒法，巴氏消毒法（對于一些不耐高溫的液體）還有化學藥劑消毒（如酒精、氯氣、石炭酸等）、 紫外線消毒法強烈理化因素，殺死物體內外 所有微生物，包括芽孢和孢子。包括：灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌 接種環、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；（防止X的微生物污染培 玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱； 培養基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器

4、械是高壓蒸汽滅菌鍋3純化微生物的接種方法平板劃線法（適用好氧菌）和 稀釋涂布平板法（適用好氧菌以及兼性厭氧菌） 平板劃線法 是通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作。將聚集的菌種 逐步稀釋 分散到培養基的表面。在數次劃線后培養，可以分離到由一個細胞 繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，這就是菌落。操作的第一步以、每次劃線之前、劃線操作結束時均需要灼燒接種環的目的操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。劃線結束后

5、灼燒接種環，能及時殺死接種環 上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。在灼燒接種環之后，要等其冷卻后再進行劃線，以免接種環溫度太高，殺死菌種最后一區不能與第一區相連，劃線力度要適中。稀釋涂布平板法 是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，進行培養。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落，以便于純化菌種。4統計菌落數目測定微生物數量的常用方法有 稀釋涂布平板法 和顯微鏡直接計數 釋涂布平板法統計（可以區分活死菌） 32個平板，選擇菌落數在 3

6、0300的平板進行計數，并 取平均值顯微鏡直接計數法統計（不能區分活死菌）利用特定的細菌計數板 或者血細胞計數板2 土壤中分解尿素與纖維素的細菌的分離原理Co（Nl2）2,是因為他們能合成脲酶，將尿素分解為CO,Nf纖維素酶，纖維素酶是一種復合酶，即Ci酶、G酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成 葡萄糖。（棉花是自然 界中纖維素含量最高的天然產物）選擇培養基 以尿素為唯一氮源的選擇培養基，富含纖維素的選擇培養基鑒別方法酚紅指示劑，分解產生氨氣，指示劑變紅剛果紅，剛果紅能與培養基中的纖維素形成 紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分 解后，剛果紅一纖維素的復合物就無

7、法形成，培養基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈。二、發酵1. 果酒、果醋發酵：通過微生物技術的培養來生產大量代謝產物的過程。有氧發酵：醋酸發酵谷氨酸發酵無氧發酵：酒精發酵乳酸發酵酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖（主要）分裂生殖 孢子生殖在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖。C6Hi2+ 6Q 6C0+ 6hbO在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發酵。GH12O 2C2HOI+ 2C0酒精發酵時一般將溫度控制在 18 C -25 C附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在發酵過程中，隨著酒精濃度的提高，紅葡萄皮的色素也進入發酵液，使葡萄酒呈現深紅色.在缺氧、呈酸性的發酵液

8、中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數其他微生物都因無法適應這一環境而受到 制約。醋酸菌是單細胞細菌（原核生物），代謝類型是異養需氧型，生殖方式為二分裂2QHOI÷ 4Q CHCooI4 6巳0 短時間中斷通入氧氣，也會引起醋酸菌死亡。醋酸菌最適生長溫度為 3035C ,控制好發酵溫度，使發酵時間縮短，又減少雜菌污染的機會實驗流程：挑選葡萄沖洗榨汁酒精發酵果酒（醋酸發酵果醋）新鮮葡萄除去枝梗，沖洗以除去灰塵為目的，防止洗去野生酵母菌C酒精檢驗:重鉻酸鉀。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應呈現灰綠色。先在試管中加入發酵液2m L,再滴入物質的量濃度為 3molL的HSQ3 滴,振蕩混勻，最后

9、滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3滴，振蕩試管，中微化 碳口；制觀察顏色實驗裝置長而彎曲的膠管與瓶身相連接，其目的是防止空氣生物的污染。開口向下的目的是有利于二氧的排出。使用該裝置制酒時，應該關閉充氣 醋時，應該充氣口連接氣泵，輸入氧 /空氣進行有氧呼吸快速繁殖，耗盡氧氣后再進行酒精發酵，防止發酵過程中產生CQ造成發酵液溢出。2. 腐乳參與微生物多種微生物參與了豆腐的發酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一種絲狀真菌。代謝類型是異養需氧型。生殖方式是孢子生殖。原理毛霉等微生物產生的 蛋白酶能將豆腐中的蛋白質分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。毛霉的

10、生長：條件：將豆腐塊平放在籠屜內，將籠屜中的控制在1518C,并保持一定的濕度。（溫度過低不利于毛霉生長，溫度高時菌絲易老化死亡， 影響腐乳品質）來源：1.來自空氣中的毛霉孢子 2.直接接種優良毛霉菌種實驗流程：讓豆腐上長出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制實驗材料豆腐的含水量為70%左右，水分過多則腐乳不易成形；過低，不利于毛霉生長。 加鹽腌制：將長滿毛霉的豆腐塊分層整齊地擺放在瓶中，同時逐層加鹽，隨著層 數的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。用鹽腌制時，注意控制鹽的用量（毛胚：食鹽= 5： 1）:鹽的濃度過低，不足以 抑制微生物的生長，可能導致豆腐腐敗變質；鹽的濃度過高會影響腐乳的

11、口味食鹽的作用：1.抑制微生物的生長，避免腐敗變質2.析出水分，是豆腐變硬，在后期制作過程中不易酥爛 3.調味作用，給腐乳以必要的咸味4.浸提毛酶菌 絲上的蛋白酶。鹵湯：鹵湯、香辛料調味、殺菌防腐。鹵湯中酒的含量一般控制在12%左右。酒的作用：1.防止雜菌污染2.與有機酸結合形成 酯，賦予腐乳風味3.酒精含量越高，對蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長；酒精含量過低，蛋白 酶的活性高，加快蛋白質的水解，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗，難以成塊。防止雜菌污染：用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。裝瓶時，操作要迅速小心。整齊地擺放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。 封瓶時，最好將瓶口通

12、過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。3. 泡菜參與微生物及原理制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代謝類型是異養厭氧型。在無氧條件下，降酶糖分解為乳酸。分裂方式是二分裂。反應式為：GHkQ2CHQ+能量含抗生素牛奶不能生產酸奶的原因是抗生素殺死乳酸菌。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于生產酸奶。發酵溫度在18-20 C,過高其他雜菌活動能力高，過低不利于乳酸菌代謝。實驗材料亞硝酸鹽易被還原為亞硝酸鹽。清水與鹽的質量比是4: I0鹽水要氣殺滅水中的其他微生物。保證乳酸菌發酵所需要的無氧環境。而且,發酵中的各類曲線煮沸后冷卻，煮沸的作用除去水中的氧 在發酵過程中要經常補水。a. 有氧氣，乳酸

13、菌活動受到抑制b. 乳酸菌含量達到最大，抑制其他菌種活性一般在腌制10天后亞硝酸鹽含量幵PH持續下降始降低，故在10天之后食用最好測定亞硝酸鹽含量在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發生重氮化反應 后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標準顯色液目測比較（比色法），估算泡菜中亞硝酸鹽含量。三、植物組織培養植物組織培養技術原理 植物細胞的全能性。具有某種生物全套遺傳信息的任何一個活細胞，都具有發育成完整個體的能力，即每個生物細胞都具有全能性。但在生物體的生長發育過程中并不表現出來，這是因為在特定的時間和空間條件下，通過基因的選擇性表達，構成不同組織和器官。細胞分化使

14、細胞生物體中細胞結構和 功能趨向專門化，有利于提高各種生理功能的效率。基本過程外植體愈傷組織根、芽植物體離體的植物組織或細胞，在培養了一段時間以后，會通過細胞分裂，形成愈傷組織，愈傷組織的細胞排列疏松而無規則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態的薄壁細胞。由高度分化的植物組織或細胞產生愈傷組織的過程，稱為植物細胞的脫分化，或者叫做去分化。脫分化產生的愈傷組織繼續進行培養，又可以重新分化成根或芽等器官，這個過程叫做再分化。實現優良品種的快速繁殖：培育脫毒作物：制作人工種子：培育作物新品 種。菊花的植物組織培養材料 菊花組織培養一般選擇 未幵花植物的莖上部新萌生的側枝 作材料。一般來說，容易進行無性繁

15、殖的植物容易進行組織培養。選取生長旺盛嫩枝進行組培的是嫩枝生理狀態好，容易誘導脫分化和再分化。一般將PH控制在左右，溫度控制在1822C,并且每日用日光燈照射12h 。 培養基MS固體培養基：大量元素、微量元素和有機物（包括 細胞分裂素與生長素）。（在菊花組織培養中，可以不添加植物激素，原因是菊花莖段組織培養 比較容易）。70%的酒精中搖動23次，持續67s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗。取出 后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入質量分數為的氯化汞溶液中12min。取出后，在無菌水中至少清洗 3次，漂洗消毒液。植物的耐受能力。接種：接種過程中插入外植體時形態學上端朝上，每個錐形瓶接種7

16、8個外植體。外植體接種與細菌接種相似，操作步驟相同，而且都要求無菌操作。外植體消毒不徹底；培養基滅菌不徹底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。移植栽前應先打幵培養瓶的封口膜，讓其在培養間生長幾日，然后用流水清洗 根部培養基。然后先將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環境中生活一 段時間，進行 壯苗。最后進行露天栽培月季的花藥培養 完全未幵放的花蕾，處于 單核靠邊期的花粉。細胞核由中央移向細胞一側的時期,組織類 型細胞來源細胞形 態細胞結構細胞排 列細胞去向尖 分生組 織受精卵正方形無液泡緊密分化成多種 細胞組織愈傷組 織高度分化 細胞無定形高度液泡 化疏松再分化成新 個體相同點都通過有絲分裂進

17、行細胞增殖花藥培養成功率最高鏡檢 確定花粉發育時期的最常用的方法是 醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉 細胞核不易著色，需采用 焙花青-鉻磯法，這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色 誘導產生單倍體植株產生花粉植株的兩種途徑通過花藥培養產生花粉植株（即單倍體植株）一 般有兩種途徑，一種是花粉通過胚狀體階段發育為植物，另一種是花粉在 誘導培養基上先形成愈傷組織申將其誘導分化成植株。這兩種途徑之間 并沒有絕對的界限，主要取決于培養基中激素的種類及其濃度配比。培養條件培養溫度控制在25 C左右,不需要光照.幼小植株形成后才需要光照.一般 經過2030天培養后，會發現花藥幵裂，長出愈傷組織或形成胚狀體。將愈

18、傷組織及時轉移到分化培養基上，以便進一步分化出再生植株。如果花藥 幵裂釋放出胚狀體，則一個花藥內就會產生大量幼小植株，必須在花藥幵 裂后盡快將幼小植株分幵，分別移植到新的培養基上，否則這些植株將很 難分幵。生長素和細胞分裂素等植物激素使用的先后順序、用量的比例影響使用順序實驗結果先生長素，后細胞分裂素有利于分裂但不分化先細胞分裂細胞既分裂也分素，后生長素化同時使用分化頻率提咼成分的提取植物芳香油的提取芳香油的提取方法：蒸餾、壓榨、萃取植生長素/細胞分裂素比值與結果比值咼時促根分化，抑芽形成比值低時促芽分化，抑根形成比值適中促進愈傷組織生長芳香油的性質：揮發性強，成分復雜，以萜類化合物及其衍生物

19、為主。水蒸氣蒸餾法水上蒸餾：原料隔放在沸水上加熱蒸餾。水汽蒸餾：利用外來高溫水蒸氣加熱蒸餾。有些原料不適宜于水中蒸餾，如柑橘、檸檬等易焦糊，有效成分容易水解。鐵架臺、酒精燈、石棉網、蒸餾瓶、橡膠塞、蒸餾頭、溫度計、直型冷凝管、接液管、錐形瓶，橡皮管。所有儀器必須事先干燥，保證無水安裝儀器一般都按照自下而上、從左到右 的順序。拆卸儀器的順序與安裝時相反。具體安裝順序和方法如下。(1) 固定熱源一一酒精燈。(2) 固定蒸餾瓶，并且保持蒸餾瓶軸心與鐵架臺的水平面垂直。(3) 安裝蒸餾頭，使蒸餾頭的橫截面與鐵架臺平行。(4) 連接冷凝管。保證 上端出水口向上，通過橡皮管與水池相連； 下端進水 口向下，

20、通過橡皮管與水龍頭相連。(5) 連接接液管(或稱尾接管)（6）將接收瓶瓶口對準尾接管的出口。常壓蒸餾一般用錐形瓶而不用燒杯作接受器，接收瓶應在實驗前稱重，并做好記錄。（7）將溫度計固定在蒸餾頭上，使溫度計水銀球的上限與蒸餾頭側管的下限 處在同一水平線上。（8） 蒸餾裝置安裝完畢后，在蒸餾瓶中加幾粒沸石，防止液體過度沸騰。在 整個蒸餾過程中，應保證溫度計的水銀球上常有因冷凝作用而形成的液滴?？刂普麴s的時間和速度，通常以每秒12滴為宜。蒸餾完畢，應先撤出熱源， 然后停止通水，最后拆卸蒸餾裝置。壓榨法分離困難，出油率低有機溶劑中的雜質影響芳香油的品質玫瑰精油的提取試劑目的mL氯化鈉溶液：促使油水混合

21、物（乳濁液）中油和水的分離。無水硫酸鈉：吸收油層中的水分。 采集玫瑰花：采集 盛花期（5月中上旬）的玫瑰花，清水清洗瀝干。 裝入蒸餾原料：稱取50g玫瑰花放入蒸餾瓶，添加 200mL蒸餾水。4: 1 安裝蒸餾裝置：按照從左向右、自下到上次序安裝水蒸氣蒸餾裝置。 加熱蒸餾：控制蒸餾時間和速度（12滴/秒），獲得乳白色乳濁液；拆 卸裝置。 分離油層：向乳濁液加入NaCl溶液后，利用分液漏斗分離出上面的油層。除去水分：向油層中加入無水硫酸鈉,24h后過濾，得到玫瑰油蒸餾時間不能過短，溫度不能過高。橘皮精油的提取:檸檬烯,主要分布在橘皮中。石灰水：防止壓榨時滑脫， 提高出油率，降低壓榨液 黏稠度，過濾

22、不堵塞 篩眼。小蘇打、硫酸鈉：促進 油和水的分離（用量分別為橘皮質量的和 5%）。 橘皮的處理：將新鮮橘皮用清水清洗瀝干。 石灰水浸泡：用78%石灰水浸泡橘皮 24h。 清水漂洗：浸泡好的橘皮用流水徹底漂洗干凈，瀝干。 粉碎和壓榨：將橘皮粉碎，加入小蘇打和硫酸鈉后，用壓榨機壓榨得到 壓榨液。 過濾壓榨液：用布袋過濾，濾液再高速離心處理，分離出上層橘皮油。 靜置處理：將橘皮油在510C冰箱中靜置57d，分離出上層澄清橘皮 油。 再次過濾：將下層橘皮油用濾紙過濾，濾液與上層橘皮油合并，進到橘皮精油。靜置處理目的：除去 果蠟和水分。胡蘿卜素的提取橘黃色結晶，化不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有機

23、溶劑。依據碳碳雙鍵的數目劃分為a、B、丫三類。其中最主要的組成成分為-胡蘿卜素。提取e-胡蘿卜素的方法主要有三種：從植物中提取從大面積養殖的巖藻中獲得利用微生物的發酵生產（影響萃取的主要因素）水溶性的：乙醇、丙酮水不溶性的：石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳等 （石油醚沸點最高最合適）選擇：具有較高的沸點，能夠充分溶解胡蘿卜素，并且不與水混溶。實驗步驟粉碎干燥萃取過濾濃縮 粉碎：使原料與有機溶劑充分接觸，增大溶解度 。 干燥：脫水溫度太高，干燥時間太長會導致胡蘿卜素分解。萃取過程應該避免明火加熱，采用 水浴加熱，這是因為有機溶劑都是易燃 物，直接使用明火加熱容易引起燃燒爆炸。為了防止加熱時有

24、機溶劑揮發， 還要在加熱瓶口安裝回流冷凝裝置。萃取液的濃縮可直接使用蒸餾裝置。 在濃縮之前，還要進行過濾，除去萃取液中的不溶物。:紙層析法濾紙：18 cm× 30 Cm基線：濾紙下端距底邊 2 Cm處做一基線，在基線上取 A B、C D四點。 點樣：用最細的注射器針頭（毛細吸管）吸取樣品進行點樣。點樣應該快 速細致，在基線上形成直徑2mm左右的圓點，每次點樣后，可用吹風機 將溶劑吹干，注意保持濾紙干燥。等濾紙上的點樣液自然揮發干后，將濾 紙卷成圓筒狀，至于裝有ICm深的石油醚的密封玻璃瓶中。等各種色素 完全分幵后，觀察標準樣品中位于展幵劑前沿的胡蘿卜素層析帶四、酶、DNA細胞固化果膠酶 果膠是植物細胞壁以及胞間層的主要成分之一，不溶于水果膠酶不特指某一種，是一類酶的統稱， 包括多聚半乳糖醛酸酶，果膠分解酶和果 膠酯酶果膠酶的主要作用是分解果膠變成可溶性的半乳糖醛酸，從而使果汁變得澄清，提升水果的出汁率探究果膠酶活性因素：T、PH酶抑制劑單一變量原則分別預熱、預PH處理，再混合最適用量：增加酶用量，直至果汁量不再 增加。最適用量與 T PH有關。加酶洗衣粉包含的酶制劑蛋白酶：蛋白質氨基酸、多肽脂肪酶:脂肪脂肪酸、甘油淀粉酶：淀粉麥