【圖文】大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化_第1頁
【圖文】大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化_第2頁
【圖文】大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化_第3頁
【圖文】大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化_第4頁
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文檔簡介

實(shí)驗(yàn)步驟 CaCl2感受態(tài)細(xì)胞的制備實(shí)驗(yàn)步驟 電轉(zhuǎn)化法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)步驟 注意事項(xiàng) 1細(xì)菌的生長狀態(tài)：實(shí)驗(yàn)中應(yīng)密切注視細(xì)菌的生長狀態(tài)和密度，盡量使 用對數(shù)生長期的細(xì)胞（一般通過檢測OD600來控制。DH5菌株OD600為 0.5時(shí)細(xì)胞密度是5×107/ml）； 2 所有操作均應(yīng)在無菌條件和冰上進(jìn)行； 3 經(jīng)CaCl2處理的細(xì)胞，在低溫條件下，一定的時(shí)間內(nèi)轉(zhuǎn)化率隨時(shí)間的 推移而增加，24小時(shí)達(dá)到最高，之后轉(zhuǎn)化率再下降（這是由于總的 活菌數(shù)隨時(shí)間延長而減少造成的）； 4 化合物及無機(jī)離子的影響：在Ca2+的基礎(chǔ)上聯(lián)合其他二價(jià)金屬離子 （如Mn 2+或Co 2+）、DMSO或還原劑等物質(zhì)處理細(xì)菌，可使轉(zhuǎn)化效率大大 提高（100-1000倍）； 5 所使用的器皿必須干凈。跡量的去污劑或其它化學(xué)物質(zhì)的存在可能 大大降低細(xì)菌的轉(zhuǎn)化效率； 6 質(zhì)粒的大小及構(gòu)型的影響：用于轉(zhuǎn)化的應(yīng)主要是超螺旋的DNA； 7 一定范圍內(nèi)，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度呈正比；

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