1、荔枝多糖對小鼠免疫功能的影響                             作者：李雪華，李福森，韋巍，吳妮妮【摘要】  目的研究荔枝多糖對小鼠免疫功能的影響。方法測定胸腺、脾臟重量并臟器系數；小鼠碳粒廓清法；溶血素法；遲發型超敏反應；PHA刺激淋巴細胞轉化實驗。結果在環磷酰胺（Cy）造成

2、免疫抑制狀態下，10 d內腹腔注射50 mg/（kg·d）荔枝多糖可顯著提高小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬百分率和吞噬指數,促進溶血素及溶血空斑形成,促進淋巴細胞轉化。結論荔枝多糖具有增強小鼠免疫功能的作用。 【關鍵詞】  荔枝多糖 免疫功能Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of litchi polysaccharides on immunological function of mice.MethodsThe weight of immunological organs, the clearance rate of char

3、coal particles, hemolysin production,the delay type hypersensitive response，and the spleen lymphocyte transformation induced by PHA of wice were mouitored.ResultsThe low immunological model of rats was established by the cyclophosphamide. Litchi polysaccharides could improve the clearance rate and t

4、he index of the mouse abdominal cavity macrophage, promote the production of hemolysin and hemolysis spot and the transformation of lymphocyte in 10 days.ConclusionLitchi po1ysaccharide can enhance immunological functions of miceKey words：Litchi polysaccharides；  Immunological function 

5、60;  荔枝Litchi chinnensis Sonn.為無患子科（Sapindaceae）常綠喬木，主要分布于我國西南及南部沿海各省區。荔枝果肉是嶺南佳果之一，適量食用，有補脾、益肝、養血、悅顏之功效1。近年來，荔枝的和藥用價值逐漸受到關注。據報道荔枝核有類似雙胍類降糖藥的降糖作用2，并能調節內、外源性血脂代謝紊亂,還具有抗氧化作用3，如用荔枝制成的荔枝口服液具有較好的降血糖作用4；荔枝皮也含有多種不同活性的有效成分，具有抗氧化作用5。但有關荔枝的免疫活性研究還未見報道。鑒于荔枝的藥用價值及在廣西具有巨大的產量，應加快對荔枝多糖的提取及其免疫活性的進一步研究，有助于更好地開發和

6、利用荔枝食用和藥用價值。本實驗研究荔枝多糖對小鼠免疫功能的影響。1  材料與儀器1.1   材料荔枝多糖,取新鮮荔枝肉（購于廣西南寧市交易場，產地：靈山，經廣西醫科大學副主任藥劑師黃其春鑒定為靈山黑葉荔枝Lichi chinensis Sonn.），采用熱水浸提法，95%乙醇沉淀，Savege法除蛋白，過氧化氫法除色素，經Saphadex G-25 和Saphadex G-100葡聚糖凝膠色譜柱分離提純，收集濃縮得荔枝多糖均一體。 分別精確稱取荔枝多糖20 mg和100 mg，加雙蒸水配置成0.5 mg/ml荔枝多糖溶液40 ml和2.5 mg/ml荔枝多糖溶液4

7、0 ml。1.2  動物昆明種小鼠，1822 g，共40只，雌雄各半；豚鼠，取新鮮血清，1：10稀釋，作補體用（小鼠、豚鼠均來自廣西醫科大學動物實驗中心）。1.3  儀器與試劑臺式中低速離心機、722型分光光度計、Olympus倒置顯微鏡、印度墨汁、綿羊紅細胞（SRBC）、環磷酰胺（cyclophsphamide，CY）、植物凝血素（PHA）等。2  方法6，72.1  分組及劑量選擇動物隨機分成4組(每組雌雄各半)，分別為空白組：以生理鹽水作對照；小劑量組：按0.5 mg/ml荔枝多糖溶液給藥；大劑量組：按2.5 mg/ml荔枝多糖溶液給藥；免疫抑制組

8、。組動物組按每只0.2 ml/d連續腹腔注射相應藥物10 d，組倒數第3天開始每只連續給環磷酰胺0.2 ml/d，給藥共10 d。2.2  碳廓清吞噬能力的測定末次給藥30 min 后，按0.050.1 ml/10 g 從小鼠尾部靜脈注入印度墨汁，分別于1 min和5 min后，從內眥靜脈叢取血20 l，立即加到2 ml 0.1Na2CO3溶液中。用722分光光度計在波長600680 nm處測定光密度值(A)。將小鼠處死后取出肝臟、脾臟，用濾紙吸干血跡后稱重，計算吞噬指數。按下式計算廓清指數K或吞噬指數。      K=logOD1-

9、logOD2t2-t1     =體重肝重+脾重×3K2.3  溶血素測定每鼠腹腔注射5(V/V)SRBC懸液0.2 ml進行免疫，5 d后，眼球取血做血清溶血素檢測。2.4  遲發型超敏反應(DTH) 足跖稱重法。倒數給藥第4天開始每天連續腹腔注射無菌的20%綿羊紅細胞生理鹽水懸液0.2 ml致敏，最后1次于一側足皮下注射20%綿羊紅細胞20 l， 24 h后處死小鼠，將對稱兩足剪下稱重，計算攻擊前后足重量差值。2.5  PHA刺激淋巴細胞轉化實驗（小鼠體內誘導法）每鼠均每天注射PHA 610 mg/kg，共3

10、d，待試藥及對照藥可在給PHA的同日或前1天給予。第10天將小鼠剪尾，取血推片，瑞氏染色，油鏡下計數100個淋巴細胞、淋巴母細胞及過度細胞數，分別計算它們的百分率和淋巴細胞轉化率。公式如下：    淋巴細胞轉化率（%）=轉化細胞數/（轉化細胞數+未轉化細胞數）×100%2.6  統計學處理所有數據以±s表示，采用醫學統計軟件處理，兩組間均數差異的比較采用t檢驗。3  結果3.1   荔枝多糖對小鼠肝臟和脾臟重量的影響荔枝多糖對小鼠肝臟和脾臟重量的影響見表1。由表1可知荔枝多糖大劑量組的脾臟和肝臟重量與空白

11、對照組比較時有顯著性差異，說明大劑量組的荔枝多糖能顯著的增強小鼠脾臟和肝臟重量。1         3.2   荔枝多糖對小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響荔枝多糖對小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響見表2。由表2可知大劑量組與空白組吞噬指數比較時有顯著性差異(P0.05)，說明大劑量荔枝多糖能顯著增加小鼠吞噬細胞的吞噬能力，小劑量組有增高吞噬指數的趨勢但無統計學意義。表1  荔枝多糖對小鼠肝臟和脾臟重量的影響（略）與正常對照組比較，*P0.05；n =10表2  荔枝多糖對小鼠巨噬細胞吞噬

12、功能的影響（略）與正常對照組比較，*P0.05；n =103.3  荔枝多糖對小鼠外周血T淋巴細胞數量的影響荔枝多糖對小鼠外周血T淋巴細胞數量的影響見表3。由表3可知大劑量組與正常對照組比較，具有顯著性差異(P<0.05)，小劑量組也有提高的趨勢，說明荔枝多糖能促進T淋巴細胞的轉化率。表3  荔枝多糖對小鼠外周血T淋巴細胞數量的影響（略）與正常對照組比較，*P0.05；n =103.4  荔枝多糖對小鼠溶血素的影響荔枝多糖對小鼠溶血素的影響見表4。由表4可知大劑量組的溶血素測定的A值與正常對照組比較有顯著性差異，說明大劑量的荔枝多糖能增加小鼠血液中抗體的數量

13、從而增強免疫力。表4  荔枝多糖對小鼠溶血素的影響（略）3.5  荔枝多糖對小鼠遲發性超敏反應荔枝多糖對小鼠遲發性超敏反應見表5。由表5可知各組數據進行比較無顯著性差異，但是大劑量組有增大的趨勢。表5  荔枝多糖對小鼠遲發性超敏反應（略）4  小結    荔枝是嶺南佳果之一。人們對它的化學成分和藥理活性研究一直沒間斷過。荔枝果肉中活性成分之一多糖，是具有復雜的生物學活性的一類物質，其研究備受生命領域的關注。本課題組采用水提醇沉，Savege法除蛋白，H2O2除色素，經Saphadex G-25和Saphadex G-100葡

14、聚糖凝膠色譜柱分離提純，得荔枝多糖。并對提取出的荔枝多糖展開了抗氧化作用研究8，研究結果表明荔枝多糖具有很好地抗氧化作用。在此基礎上又對荔枝多糖進行了小鼠體內的免疫活性研究。實驗后根據小鼠胸腺、脾臟重量，其臟器系數，并以小鼠碳粒廓清法、溶血素法、遲發型超敏反應、PHA刺激淋巴細胞轉化實驗觀察荔枝多糖的免疫作用。結果顯示，大劑量的荔枝多糖能明顯增加小鼠肝臟和脾臟重量、促進小鼠巨噬細胞的吞噬功能、提高小鼠外周血T淋巴細胞數量的轉化率，其對小鼠血液中抗體的數量的增加、增強小鼠遲發性超敏反應能力雖沒有明顯作用，但有增強的趨勢。由實驗表明荔枝多糖對小鼠特異性免疫和非特異性免疫有明顯的促進作用，給小鼠每天

15、腹腔注荔枝多糖50 mg/kg能激活巨噬細胞，增強其吞噬功能，能促進特異性抗體的產生，增加外周血T淋巴細胞數量，對T淋巴細胞和中樞免疫器官的肝臟和脾臟有顯著的促進與改善作用，并具有抵抗CY所致體液免疫功能降低和免疫器官重量減少的作用。綜上所述，荔枝多糖具有提高免疫活性作用。荔枝多糖的免疫活性作用與其他天然產物所提取出的多糖所具有的活性作用類似，顯示了多糖的活性特點。【】  1 丁 崗.荔枝研究進展J.時珍國醫國藥,1999,10(2):145.2 樓忠明，田菊霞，王文香，等.荔枝核總皂甙提取物對糖尿病小鼠的降糖療效觀察J.浙江醫學,2007,29(10)548.3 潘競鏘,劉惠純,劉廣南,等.荔枝核降血糖、調血脂和抗氧化的實驗研究J.廣東藥學,1999,9(1):47.4 郭厚基，張樹球，覃 藝，等.以荔枝