1、植物激素脫落酸(ABA)ELISA試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定植物組織，細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中植物激素脫落酸(ABA)含量。實驗原理： 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中植物激素脫落酸(ABA)水平。用純化的植物激素脫落酸(ABA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物激素脫落酸(ABA)，再與HRP標(biāo)記的ABA抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物激素脫落酸(ABA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD

2、值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中植物激素脫落酸(ABA)濃度。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1×481×962-8保存標(biāo)準(zhǔn)品：225g/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8保存酶標(biāo)試劑3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8保存樣品稀釋液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8保存顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8保存顯色劑B液3 ml

3、15;1瓶6 ml×1瓶2-8保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8保存濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8保存標(biāo)本要求： 1標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟：1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100l，然后在第一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50l，混勻；然后從第一孔、第

4、二孔中各取100l分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50l，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50l棄掉，再各取50l分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50l分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50l，混勻后從第七、第八孔中分別取50l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50l，混勻后從第九第十孔中各取50l棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50l，濃度分別為150g/L，100g/L ，50g/L，25g/L，12.5g/L）。2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加

5、樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘。4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50l，空白孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混

6、勻，37避光顯色15分鐘. 10. 終止：每孔加終止液50l，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項：1 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本

7、OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 底物請避光保存。7 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9 本試劑不同批號組分不得混用。10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。計算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)， 在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋 倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值 代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù)，即為樣品的實際濃度